重组猪干扰素α的原核表达及抗病毒活性

作     者：李秀丽 韩颖 赵款 张武超 梁飞 杨欢 雷白时 袁万哲 LI Xiuli;HAN Ying;ZHAO Kuan;ZHANG Wuchao;LIANG Fei;YANG Huan;LEIBaishi;YUAN Wanzhe

作者机构：河北农业大学河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001 石家庄市动物基因工程药物技术创新中心河北石家庄050800 河北伯瑞动物药业有限公司河北正定050800 山东省莒南县动物疫病预防控制中心山东莒南276600 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第2期

页      面：245-252页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：2019年河北省自然科学基金重点资助项目(C2019204219) 

主　　题：重组猪干扰素α 大肠杆菌表达 干扰素刺激基因 细胞毒性 抗病毒活性 

摘      要：为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的活性,同时测定了重组蛋白作用PK-15细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;之后通过小鼠攻毒保护试验,测定了rPoIFN-α治疗后各组织器官的病毒载量,ELISA测定了小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的动态变化,并对整个试验期间小鼠出现的临床症状进行打分。结果显示,成功获得了原核表达的特异性重组蛋白rPoIFN-α,在细胞上抗病毒比活性达到1.67×10^(6)IU,对细胞没有损害作用,且显著上调了Mx1、OAS等因子的转录水平;在小鼠体内能明显拮抗EMCV和PRV的增殖,减少促炎因子的产生,延缓临床症状的出现。结果表明,原核表达重组蛋白rPoIFN-α在体内外均具有抗病毒活性,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础。