甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

作     者：王凌琪 董婷婷 陈雯 甘海锋 徐小伟 秦朗 李良俊 贺振 WANG Lingqi;DONG Tingting;CHEN Wen;GAN Haifeng;XU Xiaowei;QIN Lang;LI Liangjun;HE Zhen

作者机构：扬州大学园艺与植物保护学院扬州225009 

出 版 物：《植物保护》 (Plant Protection)

年 卷 期：2022年第48卷第6期

页      面：319-325页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK20211323) 中央本级重大增减支项目(2060302) 国家特色蔬菜产业技术体系(CARS-24-B-03) 

主　　题：甘薯潜隐病毒莲藕分离物 辅助成分-蛋白酶 原核表达 抗血清 

摘      要：根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-Pro^(SPLV-lotus)。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1∶256000时,ELISA显色后OD_(450)读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带。这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测。