重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌生产L-5-甲基四氢叶酸

作     者：韩林 许激扬 卞筱泓 邵飞 吴东儿 朱虹 

作者机构：中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 

出 版 物：《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)

年 卷 期：2013年第22卷第20期

页      面：2379-2382,2409页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金(JKQ2011046) 

主　　题：L-5-甲基四氢叶酸 甘氨酸脱羧酶 克隆 原核表达 双酶切 

摘      要：目的:针对叶酸代谢通路中的甘氨酸脱氢酶(GDC)构建高效表达GDC的重组菌*** BL21(pET22b-gcvP)并检测L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的增加量。方法:采用PCR法获得GDC基因gcvP,分别在其两端加上HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET22b中,经限制性内切酶酶切和测序验证正确后,转化至*** BL21中。乳糖诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE电泳,HPLC检测L-5-MTHF产量。结果:经双酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET22b-gcvP构建成功,表达产物相对分子质量约为104×103,与GDC大小相符。与原始菌相比,重组菌的L-5-MTHF的产量增加了23.1%。结论:重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌能够提高L-5-MTHF产量。