OGT介导的RIPK3糖基化在七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

作     者：张静 王城 余鹏 唐晓祎 田龙 邓小兵 Zhang Jing;Wang Cheng;Yu Peng;Tang Xiaoyi;Tian Long;Deng Xiaobing

作者机构：南昌大学第二附属医院麻醉科南昌330006 南昌市洪都中医院麻醉科南昌330038 南昌大学第二附属医院内分泌科南昌330006 解放军联勤保障部队庐山康复疗养中心麻醉科南昌332000 

出 版 物：《国际麻醉学与复苏杂志》 (International Journal of Anesthesiology and Resuscitation)

年 卷 期：2022年第43卷第6期

页      面：571-578页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82160371) 江西省自然科学青年基金(20212BAB216051) 

主　　题：糖基化 心肌 缺血再灌注损伤 麻醉药 吸入 

摘      要：目的:评估O-N-乙酰葡糖胺(O-N-acetyl-glucosamine, O-GlcNAc)糖基化修饰转移酶(O-GlcNAc transferase, OGT)介导的受体相互作用蛋白(receptor interacting protein kinase, RIPK) 3糖基化在七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)损伤中的作用。方法:取Langendorff离体灌注模型制备成功的大鼠心脏45个,采用随机数字表法分为5组(每组9个):假手术组(SHAM组)、IR组、七氟醚后处理组(SPC组)、SPC+溶剂组[SPC+二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)组]和SPC+OGT抑制剂组(SPC+OSMI-1组)。建模完成后各组均平稳30 min,之后SHAM组给予K-H液持续灌注150 min,其余各组大鼠心脏均经历停止灌注30 min后恢复灌注2 h的过程;SPC组、SPC+DMSO组和SPC+OSMI-1组均于再灌注初给予含2.4%七氟醚的K-H液持续灌注15 min;此外,在术前准备的K-H液中,SPC+DMSO组给予50 μmol/L DMSO, SPC+OSMI-1组给予50 μmol/L OSMI-1。连续监测各组大鼠缺血前即刻(T 0)、再灌注30 min (T 1)、再灌注60 min (T 2)、再灌注90 min (T 3)、再灌注2 h (T 4)的左室峰压(left ventricular peak pressure, LVSP)、左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)、心率、左室压力升高最大速率(maximum rate of rise of left ventricular pressure, +dp/dt max)与左室压力降低最大速率(maximum rate of drop of left ventricular pressure,-dp/dt max);在再灌注末,采用1%氯化三苯基四氮唑 (triphenyl tetrazolium chloride, TTC)染色检测各组大鼠心肌梗死范围;采用ELISA法检测各组大鼠冠状动脉漏出液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)浓度;Western blot法检测各组大鼠心脏O-GlcNAc、OGT、O-糖基化糖苷酶(O-GlcNAcase, OGA)、磷酸化受体相互作用蛋白1 (phosphorylated RIPK1, p-RIPK1)、磷酸化RIPK3 (phosphorylated RIPK3, p-RIPK3)和磷酸化混合系激酶结构域样蛋白(phosphorylated mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL)蛋白水平。 结果:与T 0比较,IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低( P0.05),LVEDP升高( P0.05);与SHAM组比较,IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低( P0.05),LVEDP升高( P0.05);与IR组比较,SPC组和SPC+DMSO组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max升高( P0.05),LVEDP降低( P0.05)。与SHAM组比较:IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加( P0.05),OGT和OGA蛋白水平升高( P0.05),p-RIPK1蛋白水平升高( P0.05);IR组、SPC组、SPC+DMSO组O-GlcNAc蛋白水平升高( P0.05);IR组、SPC+OSMI-1组p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高( P0.05)。与IR组比较,SPC组、SPC+DMSO组心肌梗死范围和LDH浓度减少( P0.05),O-GlcNAc、OGT蛋白水平升高( P0.05),p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平降低( P0.05)。与SPC组比较,SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加( P0.05),O-GlcNAc、OGT蛋白水平降低( P0.05),p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高( P0.05)。 结论:七氟醚后处理可降低离体大鼠心肌IR损伤,其机制与激活OGT介导的RIPK3糖基化有关。