益肾活血方对肾纤维化小鼠血管内皮结构及功能的影响

作     者：钟建 罗芳 方桂玉 卢登勇 石晓冬 吴慧敏 翁雪莹 陈宇珊 左金巾 ZHONG Jian;LUO Fang;FANG Guiyu;LU Dengyong;SHI Xiaodong;WU Huimin;WENG Xueying;CHEN Yushan;ZUO Jinjin

作者机构：广西中医药大学第一附属医院南宁530023 广西中医药大学研究生学院南宁530001 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第15期

页      面：70-77页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 100504[医学-方剂学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81760807 82060820) 

主　　题：益肾活血方 单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠 肾间质纤维化 内皮细胞 

摘      要：目的:从内皮细胞及细胞能量代谢角度,探讨益肾活血方对肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)方法造模成功后将75只SPF级C57BL/6小鼠随机分为模型组、白藜芦醇组(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))、益肾活血方低、中、高剂量组(7.1、14.2、28.4 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组15只。另设15只作为假手术组。假手术组及模型组予等体积生理盐水灌胃。所有小鼠于造模术后第7、14、21天(d7、d14、d21)处死并取材,采用免疫组织化学S-P法检测血小板内皮细胞黏附分子31(CD31)蛋白表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、促血管生成素-1(Ang-1)/酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠活性氧(ROS)水平。结果:与假手术组比较,模型组肾组织中CD31表达明显减少且随造模时间延长而加重(P0.05),α-SAM、Col-Ⅳ蛋白表达水平显著升高(P0.01);但d14~d21间CD31表达趋于平稳;ROS水平显著升高(P0.01);Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin蛋白表达及mRNA表达显著下调(P0.01)。与模型组比较,白藜芦醇组、益肾活血方中、高剂量组治疗后CD31表达量明显增加(P0.05),α-SAM、Col-Ⅳ显著下降(P0.01),ROS含量显著减少(P0.01),Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin的蛋白表达及mRNA表达量均显著上调(P0.01)。与白藜芦醇组比较,益肾活血方低剂量组与益肾活血方中剂量组Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin蛋白表达具有显著差异(P0.01),益肾活血方高剂量组CD31、Ang-1/Tie-2 mRNA表达量差异无统计学意义,益肾活血方中剂量组ROS水平差异无统计学意义。结论:益肾活血方抗RIF作用可能与促进血管内皮修复、调控线粒体ROS减轻氧化应激,保护肾脏内皮结构完整性,延缓细胞凋亡,维持细胞能量代谢有关。