梅毒螺旋体TrkA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

作     者：曹二龙 唐愈菲 宁韶辉 CAO Er-long;TANG Yu-fei;NING Shao-hui

作者机构：邵阳学院医学检验学院病原生物学教研室湖南邵阳422600 邵阳学院附属第二医院检验科 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2022年第17卷第6期

页      面：660-664页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：湖南省自然科学基金项目(No.2020JJ5522) 湖南教育厅科研项目(No.18C0810) 

主　　题：梅毒螺旋体 钾离子转运蛋白 生物信息学分析 免疫原性 

摘      要：目的 分析梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的生物学特性,表达、纯化并制备TrkA蛋白的抗血清。方法 从NCBI中查到梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的氨基酸序列,采用生物信息学方法分析TrkA蛋白的基本理化性质、信号肽、定位、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位。按照梅毒螺旋体TrkA的DNA序列设计引物,PCR扩增TrkA基因,双酶切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-TrkA转转化入大肠埃希菌BL21,培养后使用IPTG诱导重组TrkA蛋白表达,利用Ni^(2+)亲和层析法纯化TrkA蛋白。取TrkA蛋白皮下接种小鼠,免疫3次,制备小鼠血清,ELISA法检测血清TrkA特异性IgG滴度。结果 生物信息学预测TrkA蛋白共有236个氨基酸,相对分子质量26.7ku,为胞内蛋白。该蛋白二级结构中α螺旋占45.34%,β折叠占20.76%,无规卷曲占27.97%,β转角占5.93%。Phyre2网站预测TrkA蛋白三级结构中85.5%氨基酸处于最合理区。TrKA蛋白含有6个连续B细胞表位和4个非连续表位。成功构建重组质粒pET28a-TrkA并获得高纯度的重组TrkA蛋白。该蛋白免疫小鼠能够诱导产生特异性IgG抗体,血清抗体滴度为1∶25 600。结论 生物信息学分析梅毒螺旋体TrkA为亲水性蛋白,含有B细胞歌表位,纯化的重组TrkA蛋白具有良好的抗原性,能诱导小鼠产生高滴度抗体。