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梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1187-1194页

作者：孙爱华范兴丽沈香娣汤仁仙严杰浙江医学高等专科学校基础医学部杭州310053 徐州医学院病原生物学教研室徐州221002 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成... 详细信息

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性。本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。

关键词：梅毒螺旋体抗原表位融合基因重组表达酶联免疫吸附试验

梅毒螺旋体的营养物质转运及能量合成相关代谢机制研究

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微生物学报 2022年第1期62卷 57-64页

作者：江晗谢碧波赵思思尹卫国赵飞骏南华大学衡阳医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 广东省清远市人民医院分子诊断中心广东清远511518

梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)是严重危害人类健康的性传播疾病梅毒的病原体,目前仍难以实现体外人工培养。Tp在感染期间是如何获得足够的能量来完成其复杂的致病过程迄今不明。本文就Tp的葡萄糖转运、糖酵解途径、丙酮酸去路以及N... 详细信息

梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)是严重危害人类健康的性传播疾病梅毒的病原体,目前仍难以实现体外人工培养。Tp在感染期间是如何获得足够的能量来完成其复杂的致病过程迄今不明。本文就Tp的葡萄糖转运、糖酵解途径、丙酮酸去路以及NAD+再生的研究进展做一综述,旨在为探索Tp尚未明了的生理代谢机能、突破Tp无法体外人工培养的瓶颈、进一步阐明Tp可能的致病机制和寻找新的临床治疗靶点提供依据。

关键词：梅毒螺旋体糖酵解途径 ATP合成 NAD+ 丙酮酸

梅毒螺旋体与母胎界面细胞相互作用影响妊娠结局的机制研究进展

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中国病理生理杂志 2024年第2期40卷 351-357页

作者：黄少彬熊顺刘兆平张晓红赵飞骏南华大学衡阳医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 南华大学附属第一医院检验医学中心/感染性疾病研究所湖南衡阳421001

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)感染引起的一种慢性、性传播疾病[1]。近十年来,梅毒在世界范围内流行,特别是在非洲、东南亚、西欧、俄罗斯和中国,并在这些地区造成了严重的公共卫生问题[2-3]。梅毒发病率逐年上升,先天性梅... 详细信息

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)感染引起的一种慢性、性传播疾病[1]。近十年来,梅毒在世界范围内流行,特别是在非洲、东南亚、西欧、俄罗斯和中国,并在这些地区造成了严重的公共卫生问题[2-3]。梅毒发病率逐年上升,先天性梅毒(con-genital syphilis,CS)发生率也一直处于较高水平[4-5]。CS是由Tp经胎盘垂直传播感染胎儿的一种先天感染性疾病,可发生于妊娠任何阶段.

关键词：梅毒螺旋体先天性梅毒母胎免疫不良妊娠结局

梅毒螺旋体膜抗原基因在毕赤酵母中的表达和蛋白纯化

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微生物学报 2006年第5期46卷 831-834页

作者：黄宗炎王亚妮朱娟莉董兆麟陈超西北大学生命科学学院国家微检测系统工程技术研究中心西安710069 陕西西大北美基因股份公司西安710069

以梅毒螺旋体(Treponema ***)Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增梅毒螺旋体47kDa、17kDa和15kDa 3个膜抗原基因,克隆进毕赤酵母表达载体pPICZ B,构建重组表达载体pTP47、pTP17、pTP15,转化酵母菌株GS115,甲醇诱导表达。表达菌体... 详细信息

以梅毒螺旋体(Treponema ***)Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增梅毒螺旋体47kDa、17kDa和15kDa 3个膜抗原基因,克隆进毕赤酵母表达载体pPICZ B,构建重组表达载体pTP47、pTP17、pTP15,转化酵母菌株GS115,甲醇诱导表达。表达菌体裂解后通过镍离子亲和层析获得3个抗原与6xHis tag的融合蛋白,重组蛋白的获得量分别为His-TP15:4.8mg/L;His-TP 17:6.6mg/L;His-TP47:25mg/L,经SDS-PAGE鉴定纯度都在96%以上,ELISA鉴定均具有很好的抗原性。从而首次在毕赤酵母中表达出梅毒螺旋体膜抗原,为梅毒血清学检测方法开辟了新的抗原制备途径。

关键词：梅毒螺旋体毕赤酵母膜抗原表达

梅毒螺旋体Tpp17基因的扩增、克隆及表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第6期20卷 499-500页

作者：熊礼宽周华宁波洪福昌曾序春罗斌深圳市慢性病防治院性病防治中心中山医科大学免疫教研室

目的系统观察胃粘膜肠化生的形成及其发展趋势以及病变过程中癌相关基因蛋白表达。方法应用低浓度甲硝基亚硝基胍（MNNG）及抑酸剂雷尼替丁联合喂饲，辅以胃部间断X线照射方法建立Beagle（毕格）犬胃粘膜肠化生动物模型。运用免疫组化... 详细信息

目的系统观察胃粘膜肠化生的形成及其发展趋势以及病变过程中癌相关基因蛋白表达。方法应用低浓度甲硝基亚硝基胍（MNNG）及抑酸剂雷尼替丁联合喂饲，辅以胃部间断X线照射方法建立Beagle（毕格）犬胃粘膜肠化生动物模型。运用免疫组化法对胃粘膜活检组织APC、p53、K-ras、bcl-2基因蛋白表达进行了分析。结果运用MNNG+雷尼替丁+局部X线照射方法成功地建立了毕格犬胃粘膜肠化生模型，采用此模型动态观察胃粘膜病变过程，证实了正常→浅表胃炎→萎缩胃炎→灶状肠化→中重度肠化变化规律。并发现癌基因bcl-2蛋白在萎缩性胃炎中即可表达，在肠化组织中可检出抑癌基因APC、癌基因K-ras蛋白表达。结论MNNG+雷尼替丁+局部X线照射是建立毕格犬胃粘膜肠化生模型有效方法。犬胃粘膜肠化生经历了与人体相似变化过程。癌相关基因bcl-2、APC、K-ras蛋白在犬胃粘膜肠化生及癌变中可能起一定作用。

关键词：梅毒螺旋体 Tpp17基因扩增克隆表达

梅毒螺旋体Tp0136活性肽段的可溶性表达、纯化及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第2期31卷 119-123页

作者：杨珺沈琳张小贤孙琦浙江医学高等专科学校杭州310053 杭州市第三人民医院检验科

目的筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段... 详细信息

目的筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段（Tp0136B）替代全蛋白.将Tp0136B基因插入到pET22b（＋）上,在*** BL21中表达.镍离子亲和色谱纯化表达产物,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以重组Tp0136B蛋白为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果重组工程菌可溶性表达相对分子质量约为28×103的rTp0136B,表达率为21%,制备得到纯度大于98%的rTp0136B.纯化的rTp0136B能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1：*** blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为85.5%.结论重组表达的Tp0136活性肽段具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.

关键词：梅毒螺旋体 Tp0136 活性肽段可溶性表达免疫活性

梅毒螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 612-615页

作者：刘双全赵飞骏张秋桂颜向军刘兰芳吴移谋南华大学附属第一医院检验科衡阳421001 南华大学病原生物学研究所

目的表达梅毒螺旋体黏附蛋白Tp0751，纯化表达产物并进行免疫活性分析，为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析，去除Tp0751信号肽序列，构建原核表达体进行诱导表达；Ni亲和层析柱纯化重组蛋白... 详细信息

目的表达梅毒螺旋体黏附蛋白Tp0751，纯化表达产物并进行免疫活性分析，为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析，去除Tp0751信号肽序列，构建原核表达体进行诱导表达；Ni亲和层析柱纯化重组蛋白，Western blot检测其免疫反应性，用重组蛋白免疫新西兰家兔，评价其免疫原性。结果成功构建了pET-28a（＋）-0751原核表达载体，经表达、纯化后获得了相对分子质量约为26×10^3的融合蛋白；Western blot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应；利用纯化的Tp0751重组蛋白免疫新西兰家兔，能诱导家兔产生特异性免疫应答，ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1：10 240以上。结论重组表达的Tp0751黏附蛋白具有良好的免疫活性，为进一步研究其在梅毒致病过程中的作用和生物学功能奠定了基础。

关键词：梅毒螺旋体黏附蛋白 Tp0751 重组蛋白免疫原性

梅毒螺旋体Tp0971经MAPKs、NF-κB和组蛋白乙酰化途径诱导巨噬细胞分泌IL-8及GM-CSF

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中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2695-2699页

作者：周艳飞刘佳强彭俊肖鹏程张跃军中南大学湘雅医学院附属株洲医院检验医学中心株洲412007

目的:研究梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971对巨噬细胞分泌IL-8及GM-CSF的影响及作用机制。方法:体外培养人单核细胞系THP-1并将其诱导分化为巨噬细胞,加入不同浓度重组膜蛋白Tp0971,ELISA检测IL-8及GM-CSF分泌,qRT-PCR检测GM-CSF mRNA表达,Weste... 详细信息

目的:研究梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971对巨噬细胞分泌IL-8及GM-CSF的影响及作用机制。方法:体外培养人单核细胞系THP-1并将其诱导分化为巨噬细胞,加入不同浓度重组膜蛋白Tp0971,ELISA检测IL-8及GM-CSF分泌,qRT-PCR检测GM-CSF mRNA表达,Western blot检测组蛋白H3和H4乙酰化水平及组蛋白去乙酰化酶(HDAC)1和HDAC2表达,荧光发光法检测细胞HDAC活性,染色质共沉淀技术检测组蛋白与IL-8启动子结合。结果:ELISA结果显示,10μg/ml Tp0971处理巨噬细胞24 h后可诱导其分泌GM-CSF,且呈一定时间依赖性。qRT-PCR结果显示,Tp0971可上调GM-CSF mRNA表达。ERK1/2抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580及NF-κB抑制剂IKK-NBD均能显著抑制IL-8和GM-CSF分泌,而JNK抑制剂SP600125对两者分泌无明显影响。Tp0971处理巨噬细胞2 h后,乙酰化H3和H4表达显著上调,并能促进乙酰化H3和H4结合至IL-8启动子。组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA预处理细胞后,IL-8分泌显著增加。Western blot结果显示,Tp0971处理后HDAC1和HDAC2表达明显降低,细胞核内HDAC酶活性也有所降低。结论:梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971可激活ERK1/2、p38和NF-κB,并诱导组蛋白乙酰化从而诱导巨噬细胞分泌IL-8和GM-CSF。

关键词：梅毒螺旋体组蛋白乙酰化细胞因子

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梅毒螺旋体耐药性的研究现状

中华传染病杂志 2015年第6期33卷 382-384页

作者：肖海璐田洪青济南大学医学与生命科学学院 250022 山东省皮肤病性病防治研究所

梅毒是由梅毒螺旋体（***，Tp）导致的慢性多阶段的疾病，几乎可引起全身所有组织和器官的损害，产生功能障碍，甚至致死。Tp主要通过性接触传播，还可通过胎盘屏障导致先天梅毒的发生。据WHO统计，世界每年仍有1200万的梅毒新发病例，... 详细信息

梅毒是由梅毒螺旋体（***，Tp）导致的慢性多阶段的疾病，几乎可引起全身所有组织和器官的损害，产生功能障碍，甚至致死。Tp主要通过性接触传播，还可通过胎盘屏障导致先天梅毒的发生。据WHO统计，世界每年仍有1200万的梅毒新发病例，且90％以上发生在发展中国家，是危害人类健康和生命的主要性传播疾病之一。

关键词：梅毒螺旋体耐药性性传播疾病性接触传播发展中国家功能障碍先天梅毒胎盘屏障