胃癌细胞MKN-45外泌体携带miR-552对HUVEC细胞增殖、迁移和血管生成能力的影响

作     者：刘柱 田圣威 史守兴 许春进 LIU Zhu;TIAN Shengwei;SHI Shouxing;XU Chunjin

作者机构：商丘市第三人民医院消化内科河南商丘476000 商丘市第一人民医院消化内科河南商丘476000 

出 版 物：《中国普外基础与临床杂志》 (Chinese Journal of Bases and Clinics In General Surgery)

年 卷 期：2022年第29卷第6期

页      面：719-725页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：2019年度河南省医学科技攻关计划联合共建项目(项目编号:LHGJ20191504) 

主　　题：MKN-45胃癌细胞 外泌体 微小RNA-552 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移 血管生成 

摘      要：目的探讨MKN-45细胞外泌体(exosome)携带的微小RNA-552(miR-552)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖、迁移和血管生成能力的影响。方法(1)将MKN-45细胞分为MKN-45空白对照组(不转染任何质粒)、MKN-45 miR-552抑制组[转染抑制miR-552表达的质粒(miR-552抑制质粒)]、MKN-45阴性对照组[转染阴性对照质粒(空质粒)]。提取、纯化和鉴定MKN-45细胞外泌体,采用免疫印迹法检测外泌体标志物分化抗原63(CD63)、分化抗原9(CD9)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)蛋白的表达。(2)将HUVEC细胞分为HUVEC对照组(加入PBS溶液)、HUVEC-外泌体组(加入MKN-45细胞来源外泌体)、HUVEC-阴性对照外泌体组(加入转染阴性对照质粒的MKN-45细胞来源外泌体)和HUVEC-miR-552抑制外泌体组(加入转染miR-552抑制质粒的MKN-45细胞来源外泌体),采用外泌体示踪实验检测外泌体是否进入HUVEC细胞;采用实时荧光定量PCR法检测miR-552的表达;采用噻唑蓝法检测HUVEC细胞的增殖情况;采用Transwell小室法检测HUVEC细胞的迁移情况;采用血管生成实验检测血管生成能力。结果本研究成功从MKN-45胃癌细胞中提取了外泌体,透射电镜下观察外泌体均呈圆形或椭圆形,直径为100~150 nm,可见外泌体囊泡结构;免疫印迹法法检测到外泌体表面表达标志物CD63、CD9和TSG101蛋白。示踪实验结果显示,MKN-45细胞来源的外泌体成功被HUVEC细胞内化。与MKN-45空白对照组和MKN-45阴性对照组相比较,MKN-45 miR-552抑制组外泌体中的miR-552相对表达水平降低(P0.05);与HUVEC对照组相比,HUVEC-外泌体组24、48和72 h的细胞增殖率较高,且迁移细胞数、小管生成节点数以及miR-552相对表达水平均升高(P0.05);与HUVEC-阴性对照外泌体组相比较,HUVEC-miR-552抑制外泌体组24、48和72 h的细胞增殖率降低,且迁移细胞数、小管生成节点数以及miR-552相对表达水平均降低(P0.05)。结论MKN-45细胞外泌体携带的miR-552可以显著促进HUVEC细胞的增殖、迁移以及血管生成。