非洲猪瘟病毒A151R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定

作     者：李鹏昊 刘鹏 吴芃 梁严予 关洋 李向东 逄文强 田克恭 LI Penghao;LIU Peng;WU Peng;LIANG Yanyu;GUAN Yang;LI Xiangdong;PANG Wenqiang;TIAN Kegong

作者机构：国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471003 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2022年第30卷第2期

页      面：142-146页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：洛阳市重大科技专项(1901029A) 

主　　题：非洲猪瘟 A151R蛋白 可溶性表达 Western blot 

摘      要：非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致死性传染病,对养猪业危害巨大。为了提供有效的抗原蛋白用于ASFV的临床诊断及免疫预防研究,本试验将ASFV SY18株A151R蛋白的基因序列进行密码子优化,并克隆至pET28a载体,双酶切验证得到大小分别为450 bp和5300 bp的片段,验证重组载体正确。重组载体pET28a-A151R转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,添加pG-Tf2载体以提供伴侣分子帮助目的蛋白折叠,并通过摇瓶发酵考察目的蛋白的表达。SDS-PAGE与Image-Pro Plus软件分析结果表明,A151R蛋白可实现65.4%的可溶性表达,蛋白分子量大小为17 kDa,利用亲和层析纯化所得目的蛋白纯度达到97.4%。Western blot结果显示,A151R蛋白可被ASFV阳性血清识别,表明其反应性良好。本研究首次实现A151R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,为ASFV诊断及其疫苗的研究提供了较好的候选抗原蛋白。