欧当归内酯A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡及自噬的影响

作     者：王利莹 陆玉成 王丽娟 王蒙恩 韦志永 车峰远 WANG Liying;LU Yucheng;WANG Lijuan;WANG Meng′en;WEI Zhiyong;CHE Fengyuan

作者机构：潍坊医学院临床医学院山东潍坊261000 临沂市人民医院生物样本库山东临沂276000 临沂市人民医院中心实验室山东临沂276000 临沂市人民医院病理科山东临沂276000 

出 版 物：《新乡医学院学报》 (Journal of Xinxiang Medical University)

年 卷 期：2022年第39卷第3期

页      面：201-207页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：山东省医药卫生科技发展计划项目(编号:2019WS125)。 

主　　题：胶质瘤细胞 欧当归内酯A 凋亡 自噬 

摘      要：目的探讨欧当归内酯A(LA)对人胶质瘤细胞U251凋亡及自噬的影响。方法将对数生长期的U251细胞随机分为空白组、30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组,分别用含有0、30、60、90μmol·L^(-1)的LA培养基培养24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测4组细胞的增殖能力,应用流式细胞术检测4组细胞培养24 h时的细胞凋亡率。将对数生长期的U251细胞分为空白组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、90μmol·L^(-1)LA组、30μmol·L^(-1)LA+3-MA组、60μmol·L^(-1)LA+3-MA组、90μmol·L^(-1)LA+3-MA组,空白组不加LA和3-MA,其余5组分别加入含0、90、30、60、90μmol·L^(-1)LA和1、0、1、1、1 mmol·L^(-1)3-MA的培养基培养24 h,采用CCK-8检测各组细胞活性。应用Western blot法检测空白组、30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组细胞中p53、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3抗体(LC3)-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果培养24、48、72 h时,30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组和90μmol·L^(-1)LA组的细胞增殖能力显著低于空白组,60μmol·L^(-1)LA组和90μmol·L^(-1)LA组细胞增殖能力显著低于30μmol·L^(-1)LA组,90μmol·L^(-1)LA组细胞增殖能力显著低于60μmol·L^(-1)LA组(P0.05)。30μmol·L^(-1)LA组培养72 h时的细胞增殖能力显著高于培养24、48 h时(P0.05);60μmol·L^(-1)LA组培养48、72 h时的细胞增殖能力显著低于培养24 h时(P0.05)。90μmol·L^(-1)LA组培养48、72 h时的细胞增殖能力显著低于培养24 h时,培养72 h时的细胞增殖能力显著低于48 h时(P0.05)。90μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA+3-MA组细胞活性低于空白组、3-MA组、30μmol·L^(-1)LA+3-MA组和60μmol·L^(-1)LA+3-MA组,90μmol·L^(-1)LA组细胞活性低于90μmol·L^(-1)LA+3-MA组(P0.05)。30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组和90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中p53和Bax蛋白相对表达量高于空白组,30μmol·L^(-1)LA组U251细胞中caspase-3蛋白相对表达量低于空白组,90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中Bcl-2蛋白相对表达量低于空白组,90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中caspase-3蛋白相对表达量高于空白组(P0.05)。90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中p53、Bcl-2蛋白相对表达量低于30μmol·L^(-1)LA组和60μmol·L^(-1)LA组,90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中Bax、caspase-3蛋白相对表达量高于30μmol·L^(-1)LA组,90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中caspase-3蛋白相对表达量高于60μmol·L^(-1)LA组(P0.05)。60μmol·L^(-1)LA组U251细胞中Bax、caspase-3蛋白相对表达量高于30μmol·L^(-1)组(P0.05)。4组U251细胞中LC3-Ⅰ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中LC3-Ⅱ蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著高于空白组和30μmol·L^(-1)LA组(P0.05);60μmol·L^(-1)LA组与90μmol·L^(-1)LA组U251细胞中LC3-Ⅱ蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值比较差异无统计学意义(P0.05)。结论LA能够通过增加凋亡蛋白p53、Bax、caspase-3和减少Bcl-2蛋白的表达,以及增加自噬蛋白LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制U251细胞增殖,促进U251细胞凋亡和自噬。