基于PI3K/Akt信号通路探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

作     者：彭博 练东银 张广平 陈颖 侯红平 贺蓉 李建荣 胡晓茹 PENG Bo;LIAN Dong-yin;ZHANG Guang-ping;CHEN Ying;HOU Hong-ping;HE Rong;LI Jian-rong;HU Xiao-ru

作者机构：中国中医科学院中药研究所北京100700 中国食品药品检定研究院北京100050 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第9期

页      面：36-42页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 100502[医学-中医临床基础] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFC1708100 2018YFC1708105) 

主　　题：小金丹 RAW264.7 巨噬细胞极化 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路 

摘      要：目的:探讨小金丹提取物(XJD)对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法:以脂多糖(LPS)、白细胞介素-4(IL-4)刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞增殖活性检测(CCK-8)法检测10~80 mg·L^(-1)对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的释放;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞因子白细胞介素-6(IL-6)释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的mRNA表达;采用流式细胞分析法检测CD206表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键蛋白的活化。结果:10~80 mg·L^(-1)XJD对0.5 mg·L^(-1)LPS和20μg·L^(-1)IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。与空白组比较,LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括显著增加NO、IL-6释放(P0.01),明显上调M1型基因白细胞介素-1β(IL-1β)、一氧化氮合酶(iNOS)、前列腺素氧化环化酶-2(COX-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达(P0.01)。同LPS诱导组比较,20~80 mg·L^(-1)XJD能浓度依赖性显著抑制NO、IL-6的释放(P0.01);10~80 mg·L^(-1)XJD能浓度依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-αmRNA表达(P0.01)。与空白组比较,IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括CD206+巨噬细胞比例显著升高(P0.01),显著上调M2型基因精氨酸-1(Arg-1)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))mRNA表达(P0.01)。同IL-4诱导组比较,10~80 mg·L^(-1)XJD能浓度依赖性显著降低CD206+M2型巨噬细胞比例(P0.01);显著下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β_(1)mRNA表达(P0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3-激酶p110(PI3K-p110)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达均显著上调(P0.01);同LPS或IL-4诱导组比较,XJD能明显降低PI3K p110蛋白表达和p-Akt水平(P0.05,P0.01)。结论:小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化,机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。