斑地锦RT-qPCR内参基因的筛选

作     者：宋美玲 黄胜和 陈祖杰 邹嘉轩 刘欢胜 全文军 SONG Meiling;HUANG Shenghe;CHEN Zujie;ZOU Jiaxuan;LIU Huansheng;QUAN Wenjun

作者机构：江西中医药高等专科学校医学基础部江西抚州344000 南昌大学江西医学院南昌330031 南昌大学抚州医学院江西抚州344000 

出 版 物：《广西植物》 (Guihaia)

年 卷 期：2022年第42卷第2期

页      面：340-348页

学科分类：0710[理学-生物学] 1006[医学-中西医结合] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ191230)。 

主　　题：斑地锦 基因克隆 内参基因 RT-qPCR 

摘      要：实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的前提条件之一是具有合适的内参基因。为筛选斑地锦(Euphorbia maculata)合适的RT-qPCR内参基因,该文利用同源克隆法克隆斑地锦GAPDH、EF-1α、act、UBQ、TUB-α、eIF-4A、CYP等基因片段,RT-qPCR检测7个候选内参基因在斑地锦不同生长期根、茎、叶和果实中的表达情况,并用geNorm、NormFinder和BestKeeper等生物学软件对各候选基因表达稳定性进行评价。结果表明:(1)克隆的GAPDH、EF-1α、act、UBQ、TUB-α、eIF-4A、CYP基因片段为729、808、753、422、233、656、313 bp,分别编码242、269、250、140、77、218、103个氨基酸,与其他植物相应氨基酸序列的最高同源性均在85%以上。(2)综合3个分析软件分析内参基因表达稳定性得出,表达稳定性排名为UBQEF-1αTUB-αeIF-4AGAPDHCYPact。因此,可以选取UBQ作为斑地锦RT-qPCR分析的内参基因,用于不同生长期基因组织特异性表达研究。