miR-216b对顺铂耐药胃癌细胞生物学行为的影响

作     者：周京涛 刘佳 李亮 李建刚 努尔买买提·阿米都拉 闫军 寇旭东 艾孜买提·艾海提 马博 ZHOU Jing-tao;LIU Jia;LI Liang;LI Jian-gang;Nurmamat AMIDULLAH;YAN Jun;KOU Xu-dong;Aizmat AIHETI;MA Bo

作者机构：新疆医科大学第二附属医院普外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830000 新疆维吾尔自治区第八人民医院急诊科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830000 新疆医科大学第七附属医院普外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830000 

出 版 物：《中华实用诊断与治疗杂志》 (Journal of Chinese Practical Diagnosis and Therapy)

年 卷 期：2021年第35卷第8期

页      面：789-795页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：新疆维吾尔自治区卫生健康青年医学科技人才专项科研项目(WJWY-202006) 

主　　题：胃癌 顺铂 耐药 miR-216b ATG5 自噬 

摘      要：目的探讨miR-216b对顺铂耐药的胃癌细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞系SGC7901/DDP的miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞ATG5蛋白相对表达量。SGC7901/DDP细胞加入不同浓度顺铂,采用CCK-8实验检测顺铂对细胞的半数抑制浓度,确定顺铂在后续实验中浓度。对数生长期SGC7901/DDP细胞随机分为空白对照组(正常培养)、agomir-NC组(转染agomir-NC)、agomir-miR-216b组(转染agomic-miR-216b)、antagomir-NC组(转染antagomir-NC)和antagomir-miR-216b组(转染antagomir-miR-216b),采用实时荧光定量PCR法检测5组细胞miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测5组细胞LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、ATG5、P62蛋白相对表达量,采用CCK-8实验检测5组细胞活力,采用克隆形成实验检测5组细胞克隆细胞数,采用流式细胞术检测5组细胞凋亡率。采用荧光素酶报告实验检测miR-216b与ATG5的靶向结合。对数生长期SGC7901/DDP细胞随机分为agomir-NC+oe-NC组(转染agomir-NC和oe-NC)、agomir-MiR-216b+oe-NC组(转染agomir-miR-216b和oe-NC)和agomir-miR-216b+oe-ATG5组(转染agomir-miR-216b和oe-ATG5),采用实时荧光定量PCR法检测miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测细胞ATG5蛋白相对表达量。结果SGC7901/DDP细胞miR-216b相对表达量(0.26±0.04)低于SGC7901细胞(0.49±0.06)和GES-1细胞(1.00±0.05)(P0.05)。miR-216b靶向调控ATG5。agomir-miR-216b+oe-NC组和agomir-miR-216b+oe-ATG5组细胞miR-216b相对表达量高于agomir-NC+oe-NC组(P0.05);agomir-miR-216b+oe-NC组细胞ATG5蛋白相对表达量低于agomir-NC+oe-NC组和agomir-miR-216b+oe-ATG5组(P0.05),agomir-miR-216b+oe-ATG5组低于agomir-NC+oe-NC组(P0.05