基于JNK信号通路探究半胱氨酸在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用

作     者：刘庆生 丁滨 窦晓兵 潘然 张福利 丁蕾 桑怡 LIU Qingsheng;DING Bing;DOU Xiaobing;PAN Ran;ZHANG Fuli;DING Lei;SANG Yi

作者机构：杭州市中医院消化内科 浙江中医药大学生命科学学院 

出 版 物：《中国临床药理学与治疗学》 (Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics)

年 卷 期：2016年第21卷第4期

页      面：366-371页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81473393) 浙江省卫生科技计划项目(2013KYA138) 浙江省自然科学基金项目(LR15H030003) 

主　　题：半胱氨酸 棕榈酸 内质网应激 肝细胞 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 

摘      要：目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制。方法:以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,采用LDH、MTT技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,应用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,利用Western blot技术检测细胞内质网应激相关蛋白C/EBP同源转录因子(C/EBP homologous transcription factor,CHOP),GRP-78以及磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)的表达量。结果:(1)PAL可以显著抑制Hep G2细胞的增殖活性。(2)PAL提高Hep G2细胞内的GSH水平,但不影响MDA和ROS水平。(3)CYS显著加剧PAL诱导肝细胞死亡的作用。(4)CYS/PAL协同作用不影响细胞内MDA和ROS水平。(5)CYS/PAL协同作用可显著提高肝细胞内质网应激相关蛋白GRP-78、CHOP和p-JNK的表达。(6)抑制JNK通路可抑制PAL诱导的细胞死亡。结论:CYS通过激活JNK通路导致内质网应激加强,从而加剧PAL诱导细胞死亡,参与NASH发病机制。