凝血因子ⅩⅢ A亚基mRNA大片段缺失所致遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症的分子机制研究
Study on the molecular mechanisms of a novel large deletion of FⅩⅢ A mRNA in a new hereditary factor ⅩⅢ deficiency作者机构：河南中医学院第二附属医院血液科450002 浙江大学医学院附属第一医院血液科 海南医学院生物化学教研室
出 版 物：《中华血液学杂志》 (Chinese Journal of Hematology)
年 卷 期：2015年第36卷第2期
页 面：131-134页
核心收录：
学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金(30060037) 教育部科学技术研究重点项目(03147)
主 题：因子ⅩⅢ 因子ⅩⅢ缺乏 质粒 突变 Factor ⅩⅢ
摘 要：目的 研究凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）A亚基mRNA DelCD 11-279大片段缺失引起遗传性FⅩⅢ缺乏症的分子致病机制.方法 构建正常人、先证者母亲FⅩⅢA亚基mRNA表达质粒pET-22b（＋）/FⅩⅢA和先证者FⅩⅢA亚基mRNA DelCD 11-279大片段缺失的表达质粒pET-22b（＋）/FⅩⅢA-Del,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE和Western blot法检测FⅩⅢA亚基蛋白的表达,Ni-NTA树脂结合柱纯化FⅩⅢA亚基蛋白质,EZ-LinkTM5-（Biotinamido） Pentylamine掺入法检测纯化FⅩⅢA亚基蛋白质活性.结果 pET-22b（＋）/FⅩⅢA和pET-22b（＋）/FⅩⅢA-Del经酶切及PCR鉴定构建成功,转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后获特异高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白质的相对分子质量分别为83 200和51 900,用Ni-NTA树脂结合柱分离得到纯化蛋白质,Western blot方法分析表明重组的蛋白质是人FⅩⅢA亚基蛋白,先证者及其母亲的纯化FⅩⅢA亚基蛋白活性分别为正常人的0、95.87％.结论 FⅩⅢA亚基mRNA DelCD 11-279大片段缺失导致编码截短的464个氨基酸的无活性FⅩⅢA亚基蛋白是先证者遗传性FⅩⅢ缺乏症的分子机制之一.
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