铁调素通过抑制肝细胞凋亡在肝纤维化中的作用机制研究

作     者：刘莹莹 王晓凡 李长英 刘琳 刘天会 王萍 丛敏 LIU Ying-ying;WANG Xiao-fan;LI Chang-ying

作者机构：首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心肝硬化转化医学北京市重点实验室暨国家消化系统疾病临床医学研究中心北京100050 

出 版 物：《临床和实验医学杂志》 (Journal of Clinical and Experimental Medicine)

年 卷 期：2021年第20卷第10期

页      面：1013-1017页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:81570542) 王宝恩肝纤维化研究基金资助(编号:CFHPC 2021042)。 

主　　题：小鼠 铁调素 肝脏纤维化 肝细胞凋亡 

摘      要：目的明确在小鼠肝纤维化发生、发展过程中铁调素(hepcidin)的调控作用。方法将野生型C57BL/6(WT)小鼠和hepcidin基因敲除(HAMP-/-)小鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=10)和四氯化碳(CCl 4)组(n=10)。正常对照组小鼠给予橄榄油灌胃,CCl 4组小鼠给予25%CCl 4(CCl 4︰橄榄油=1︰3)灌胃,每周2次,共6周。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CCl 4灌胃1周、4周和6周小鼠血清中hepcidin的水平;通过Masson染色和苏木精-伊红(HE)染色来分别观察CCl 4所诱导的小鼠肝脏纤维化严重程度,以及肝内的炎症水平;通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠肝脏内纤维化相关基因Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)和转化生长因子β(TGF-β)的表达,炎症相关基因白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,以及凋亡相关基因Bax、Fas、Bcl-xl和Bcl 2的表达;最后采用流式细胞术检测hepcidin多肽对CCl 4诱导的小鼠肝细胞系NCTC1469细胞凋亡的调控作用。结果ELISA结果表明,随着肝纤维化进展,小鼠血清中hepcidin水平呈现出逐渐升高的趋势,在6周时最高,与正常对照组小鼠相比,升高约1.9倍,差异有统计学意义(P0.01)。肝组织病理学结果显示,与WT型CCl 4组小鼠相比,HAMP-/-CCl 4组小鼠肝纤维化程度和肝脏炎症细胞浸润更严重。qPCR结果显示,与WT型CCl 4组小鼠相比,HAMP-/-CCl 4组小鼠其肝脏CollagenⅠ、CollagenⅢ和TGF-β的表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05);促凋亡基因Bax和Fas的表达也呈现出上调趋势,凋亡抑制基因Bcl-xl和Bcl 2的表达呈下调趋势,差异均有统计学意义(P0.05)。流式细胞仪分析结果显示,hepcidin可显著抑制CCl 4诱导的小鼠肝细胞系NCTC1469细胞凋亡。结论Hepcidin可以通过抑制肝脏细胞的凋亡进而抑制肝脏炎症和肝纤维化。