鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

作     者：翟凯新 刘丽婷 陈晓文 陈越 高婧华 吴利先 ZHAI Kai-xin;LIU Li-ting;CHEN Xiao-wen;CHEN Yue;GAO Jing-hua;WU Li-xian

作者机构：大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2020年第15卷第11期

页      面：1257-1261页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81760357)。 

主　　题：鸟分枝杆菌 PPE25-MAV蛋白 Ana-1巨噬细胞 细胞凋亡 

摘      要：目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系Ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系Ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。