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细胞与分子免疫学杂志 2010年第1期26卷 84-85,88页

作者：王桂花周向梅尹晓敏杨利锋周海云张交儿刘爱林赵德明中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100193 沈阳农业大学动物医学院辽宁沈阳110161 邯郸市动物疫病预防控制中心河北邯郸056005

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70... 详细信息

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。

关键词： Ana-1巨噬细胞小囊泡免疫胶体金免疫印迹

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登革2型病毒NGC株体外诱导Ana-1巨噬细胞极化和对其TLR7表达影响的研究

登革2型病毒NGC株体外诱导Ana-1巨噬细胞极化和对其TLR7表达影响...

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第八届全国免疫学学术大会

作者：龙世棋左丽商正玲贵阳医学院免疫学教研室

目的:研究DEN2体外诱导ana-1极化和对其TLR7表达的影响,探讨巨噬细胞极化及TLR7在DEN致病过程中的作用。方法:RT-PCR、直接免疫荧光法鉴定DEN2感染ana-1细胞;Q RT-PCR检测DEN2感染ana-1细胞24h、72h、120h病毒载量、iNOS、Arg-1、IL-10... 详细信息

目的:研究DEN2体外诱导ana-1极化和对其TLR7表达的影响,探讨巨噬细胞极化及TLR7在DEN致病过程中的作用。方法:RT-PCR、直接免疫荧光法鉴定DEN2感染ana-1细胞;Q RT-PCR检测DEN2感染ana-1细胞24h、72h、120h病毒载量、iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12p40mRNA水平;Western blot检测iNOS、Arg-1、TLR7蛋白表达;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度。实验数据采用单因素方差分析进行组间比较。结果:1.被DEN2感染的ana-1细胞病毒载量在72h最高,120h最低。2-ΔΔCt值分别为159.98±37.80、3.69±0.38,差异有统计学意义(P0.05)。M1、M2型极化对照组IL-10 mRNA水平均低于正常对照组。DEN2感染组IL-12p40 mRNA水平在72h达峰值,2-ΔΔCt值为11.1±2.41明显高于M2型对照及正常对照组,差异有统计学意义(P细胞培养上清中TNF-α水平明显高于M2型极化对照组及正常对照组,72h达峰值,分别为454.72±13.41、372.02±12.14pg/ml。5.DEN2感染组TLR7蛋白低于同期正常对照组,且呈逐渐下降趋势。M1、M2型极化对照组较正常对照组无明显差异(P>0.05)。结论:1.DEN2能够感染ana-1细胞并诱导其向M1型极化,M1型极化程度与病毒载量呈正相关。2.DEN2感染ana-1细胞后其TLR7表达下调,ana-1细胞M1、M2型极化对TLR7表达无明显影响。3.ana-1产生TNF-α水平与细胞内DEN病毒载量呈正相关。

关键词： DEN2 Ana-1巨噬细胞极化细胞因子 TLR7

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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定

Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：王桂花周向梅尹晓敏杨利锋周海云张交儿刘爱林赵德明中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室沈阳农业大学动物医学院河北省邯郸市动物疫病预防控制中心

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exsomes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exsomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mA... 详细信息

目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exsomes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exsomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exsomes平均大小为

关键词： Ana-1巨噬细胞小囊泡免疫胶体金 Western blot

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鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

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中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1257-1261页

作者：翟凯新刘丽婷陈晓文陈越高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上... 详细信息

目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P细胞的早期凋亡率仅在5μg/ml时升高(P0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。

关键词：鸟分枝杆菌 PPE25-MAV蛋白 Ana-1巨噬细胞细胞凋亡

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