载脂蛋白-J质粒转染大鼠BMSCs及其在靶细胞中的表达

作     者：刘学良 彭建华 周冲 徐斌 秦兴虎 刘亮 Liu Xueliang;Peng Jianhua;Zhou Chong;Xu Bin;Qin Xinghu;Liu Liang

作者机构：西南医科大学附属医院神经外科四川泸州646000 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2016年第45卷第14期

页      面：1942-1944,1947页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：四川省教育厅重点项目课题(12ZA075) 泸州市科技局课题(2011-I-S45) 

主　　题：载脂蛋白类 间质干细胞 载脂蛋白-J 重组质粒 骨髓间充质干细胞 转染 蛋白免疫印迹法 

摘      要：目的对比pEGFP-N1-apoJ质粒在不同DNA浓度条件下转染骨髓间充质干细胞的转染率,并测定载脂蛋白-J的表达情况。方法 0.8、1.2、1.6、2.0μg pEGFP-N1-apoJ质粒分别在脂质体的介导下转染大鼠骨髓间充质干细胞,并在荧光显微镜下观察,确定24、48、72h时转染率,筛选出能获得最高转染率的质粒的量。设置pEGFP-N1-apoJ质粒组、空pEGFP-N1质粒组、空白对照组,用蛋白免疫印迹法检测载脂蛋白-J在24、48、72h3个时间点的表达情况。结果 4个不同质粒浓度组转染率分别为:(16.7±1.0)%、(19.7±1.4)%、(30.1±3.6)%、(21.7±5.5)%,比较4个组间转染效率差异有统计学意义(P0.05),且1.6μg pEGFP-N1-apoJ质粒组转率最高。通过蛋白免疫印迹法检测后,3个目的蛋白灰度值与内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)灰度值相比较,蛋白质相对表达水平为:pEGFP-N1-apoJ质粒组1.91±0.12,空pEGFP-N1质粒组0.56±0.11,空白对照组0.57±0.17,差异有统计学意义(P0.05)。结论质粒pEGFP-N1-apoJ可在脂质体的介导下转染入大鼠骨髓间充质干细胞,携带载脂蛋白-J基因的靶细胞可表达载脂蛋白-J。