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蛋白免疫印迹法检测胃癌组织Cyr61和HIF-1α蛋白的表达及其临床意义

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中国现代医学杂志 2011年第14期21卷 1620-1624页

作者：许之美司君利钮自宇王贺亓玉琴隋爱华青岛大学医学院附属青岛市市立医院消化内一科山东青岛266011 青岛市传染病医院山东青岛266000 青岛大学附属医院临床医学研究所山东青岛266003

目的侵袭转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为之一,也是导致死亡率增加的主要原因,而肿瘤细胞发生转移的机制一直是研究的热点。研究旨在检测富含半胱氨酸61(Cyr61)蛋白和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白在胃癌组织中的表达水平,探讨两者... 详细信息

目的侵袭转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为之一,也是导致死亡率增加的主要原因,而肿瘤细胞发生转移的机制一直是研究的热点。研究旨在检测富含半胱氨酸61(Cyr61)蛋白和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白在胃癌组织中的表达水平,探讨两者与胃癌侵袭转移的关系。方法将标本分成3组,分别为49例胃癌组、49例配对的癌旁组(距癌2 cm)和49例配对的正常组(距癌5 cm以上),用免疫组织化学和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Cyr61和HIF-1α的蛋白表达水平,并分析两者与胃癌的临床病理特征的关系。结果免疫组织化学检测显示Cyr61在胃癌细胞的胞浆中表达,HIF-1α在胃癌细胞的胞浆/胞核中表达。进一步用Western blot检测结果显示,胃癌中Cyr61蛋白的表达水平(0.2767±0.02200)高于癌旁组织(0.2145±0.02209)和正常组织(0.1055±0.02082),癌旁组织高于正常组织(均P蛋白的表达水平(0.2663±0.02682)高于癌旁组织(0.2120±0.04087)和正常组织(0.1008±0.03867)(均P蛋白表达的增强与肿瘤的分化程度、淋巴转移及TNM分期相关(均P蛋白和HIF-1α蛋白的表达呈明显正相关(r=0.411,P蛋白和HIF-1α蛋白在胃癌组织中呈高表达,可能与胃癌的侵袭转移有关。联合检测Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白对指导胃癌临床及判断预后有重要价值。

关键词：胃肿瘤富含半胱氨酸61 低氧诱导因子-1α 免疫组织化学蛋白免疫印迹法

中国莱姆病伽氏疏螺旋体蛋白免疫印迹法诊断标准的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 594-598页

作者：蒋毅万康林耿震侯学霞中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206

目的研究中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型蛋白免疫印迹法(WB)的阳性诊断标准。方法采用中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因型参照菌株PD91作抗原,建立WB检测方法。采用Gel-Pro凝胶分析软件进行结果分析。病例组和对照组各组蛋白条带的频数... 详细信息

目的研究中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型蛋白免疫印迹法(WB)的阳性诊断标准。方法采用中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因型参照菌株PD91作抗原,建立WB检测方法。采用Gel-Pro凝胶分析软件进行结果分析。病例组和对照组各组蛋白条带的频数分布比较采用χ2检验或Fisher′s精确检验,WB检测莱姆病阳性诊断标准确定采用ROC曲线。结果共检测127例莱姆病病例和504例对照的血清标本,经统计学分析得出我国莱姆病伽氏疏螺旋体检测中WB阳性诊断标准为:对于IgGP83/100、P58、P39、P30、OspC、P17、P66、OspA中至少有一条蛋白条带显色即可诊断为阳性,此标准敏感度为73.2%,特异度为99.4%;对于IgMP83/100、P58、OspA、P30、OspC、P17、P41中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性,此标准敏感度为50.4%,特异度为93.1%。结论建立了中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型WB阳性诊断标准,用于莱姆病的WB诊断具有较好的特异性。

关键词：莱姆病伽氏疏螺旋体蛋白免疫印迹法诊断标准莱姆病螺旋体疏螺旋体诊断标标准中国 Fisher

蛋白免疫印迹法检测胃癌中Cyr 61和HIF-1α蛋白的表达及其临床意义

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临床消化病杂志 2010年第6期22卷 323-326页

作者：许之美司君利王贺亓玉琴隋爱华青岛大学医学院附属青岛市市立医院消化内一科青岛266011 青岛市传染病医院青岛266000 青岛大学附属医院临床医学研究所青岛266003

目的本研究旨在检测Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白在胃癌组织中的表达水平,探讨二者与胃癌侵袭转移的关系。方法将标本分成3组,分别为49例胃癌组,49例配对的癌旁组(距癌2cm)和49例配对的正常组(距癌5cm以上),用蛋白免疫印记(Western blot)方... 详细信息

目的本研究旨在检测Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白在胃癌组织中的表达水平,探讨二者与胃癌侵袭转移的关系。方法将标本分成3组,分别为49例胃癌组,49例配对的癌旁组(距癌2cm)和49例配对的正常组(距癌5cm以上),用蛋白免疫印记(Western blot)方法检测Cyr61和HIF-1α的蛋白表达水平,并分析二者与胃癌的临床病理特征的关系。结果胃癌中Cyr61蛋白的表达水平(0.2767±0.02200)显著高于癌旁组织(0.2145±0.02209)和正常组织(0.1055±0.02082),癌旁组织明显高于正常组织(P均蛋白的表达水平(0.2663±0.02682)显著高于癌旁组织(0.2120±0.04087)和正常组织(0.1008±0.03867)(P均蛋白表达的增强与肿瘤的分化程度、淋巴转移及TNM分期显著相关(P均蛋白和HIF-1α蛋白的表达呈明显正相关(r=0.411,P蛋白和HIF-1α蛋白在胃癌组织中呈高表达,且Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白表达的增强可促进胃癌的侵袭转移。联合检测Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白对指导胃癌临床诊治及判断预后有重要价值。

关键词：胃肿瘤 Cyr61 HIF-1α 侵袭转移蛋白免疫印迹法

蛋白免疫印迹法同时检测大、小分子蛋白的实验条件改进

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现代生物医学进展 2016年第24期16卷 4618-4621页

作者：陈彩萍冯志奇宋壮陈超温小安袁浩亮中国药科大学新药研究中心江苏省代谢性疾病药物重点实验室江苏南京210009

目的:蛋白免疫印迹法是现代生物医学研究中广泛应用于蛋白定性和半定量分析的实验技术。然而,常规采用传统单一浓度凝胶的蛋白免疫印迹法在应用过程中仍有不足之处,如不能同时检测分子量很大和很小的蛋白,因而有必要探索一种增大凝胶有... 详细信息

目的:蛋白免疫印迹法是现代生物医学研究中广泛应用于蛋白定性和半定量分析的实验技术。然而,常规采用传统单一浓度凝胶的蛋白免疫印迹法在应用过程中仍有不足之处,如不能同时检测分子量很大和很小的蛋白,因而有必要探索一种增大凝胶有效分离范围的检测方法。本文提出采用组合凝胶来实现更大范围分子量蛋白的同时检测。方法:比较双浓度的组合凝胶与单一浓度凝胶的分离范围以及分析采用组合凝胶,蛋白免疫印迹法对大、小分子蛋白的检测效果。结果:12%/7.5%组合凝胶和15%/7.5%组合凝胶的分离范围显著大于相应的单一浓度凝胶。通过12%/7.5%组合凝胶,蛋白免疫印迹法同时检测到15-300 k Da范围内的大、小分子蛋白。结论:组合凝胶有助于蛋白免疫印迹法对分子量相差很大的蛋白进行同时检测分析,具有很强的实用性。

关键词：蛋白免疫印迹法蛋白分析组合凝胶分离胶

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免疫印迹法检测绵羊朊蛋白prp^c的研究

中国兽医杂志 2008年第1期44卷 23-24页

作者：乔俊文赵德明吴长德王志刚周向梅王秀菊中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京海淀100094 鲁南牧工商联合肉联厂山东腾州277512

蛋白免疫印迹法在目前已有的朊病检测方法中具有敏感性和特异性高的特点,是检测痒病的金标准。本实验室为国家动物海绵状脑病实验室,负责检测北方地区的牛羊海绵状脑病,自2003年成立以来,在羊痒病流行病学调查、痒病易感性相关分子机理... 详细信息

蛋白免疫印迹法在目前已有的朊病检测方法中具有敏感性和特异性高的特点,是检测痒病的金标准。本实验室为国家动物海绵状脑病实验室,负责检测北方地区的牛羊海绵状脑病,自2003年成立以来,在羊痒病流行病学调查、痒病易感性相关分子机理方面及病理组织学检查、免疫组织化学检测法等领域进行了广泛深入的研究,同时基本建立了羊痒病免疫印迹检测方法。[第一段]

关键词：蛋白免疫印迹法化学检测法 prp^c 朊蛋白病理组织学检查海绵状脑病绵羊流行病学调查

子宫内膜周围淋巴结区素和N-乙酰葡萄糖胺-6-转磺酶表达及其对胚胎着床的影响

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北京大学学报（医学版） 2004年第6期36卷 575-580页

作者：王波黄荷凤金帆何荣环浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科杭州310006

目的：探讨人子宫内膜周围淋巴结区素(peripheral lymph node addressin，PNAd)及 N-乙酰葡萄糖胺-6-转磺酶(GlcNkc-6-sulfotransferase，GlcNAc6ST)表达特点及其与胚胎着床的关系。方法：对75例子宫内膜(增生期12例为健康妇女；分泌期6... 详细信息

目的：探讨人子宫内膜周围淋巴结区素(peripheral lymph node addressin，PNAd)及 N-乙酰葡萄糖胺-6-转磺酶(GlcNkc-6-sulfotransferase，GlcNAc6ST)表达特点及其与胚胎着床的关系。方法：对75例子宫内膜(增生期12例为健康妇女；分泌期63例为不孕症患者，含分泌早期27例，分泌中期36例)采用免疫组织化学法和半定量蛋白免疫印迹法检测 PNAd 的表达，实时荧光定量 PCR 法检测41例分泌期内膜 GlcNAc6ST mRNA。对63例不孕症(男性因素17例，输卵管因素46例)行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)治疗，临床妊娠29例，非妊娠34例，分析两组间 PNAd 和 GlcNAc6ST 表达的差异。结果：(1)PNAd 位于腔上皮和腺上皮细胞胞膜和胞浆，增生期表达较弱，分泌期强表达。PNAd 蛋白免疫印迹呈现至少4条带，对应 Sgp200、CD34、MAdCAM-1，GlyCAM-1四种分子，表达水平呈两两正相关。分泌期 Sgp200、CD34、MAdCAM-1表达高于增生期，差异有统计学意义。各病例均表达 GlcNAc6ST mRNA，与 PNAd 各分子水平无相关。(2)妊娠组 CD34、GIyCAM-1表达高于非妊娠组，差异有统计学意义；两组 GlcNAc6ST mRNA 水平差异无统计学意义。(3)妊娠组与非妊娠组年龄、受精方式、hCG 注射日子宫内膜厚度。

关键词：表达水平分泌期 CD34 子宫内膜增生期葡萄糖胺胚胎着床 PNA mRNA水平蛋白免疫印迹法

江西建昌帮阴附片和阳附片对阳虚小鼠棕色脂肪组织的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第14期26卷 72-77页

作者：凡若楠钟凌云于武华童恒力邓小燕江西中医药大学药学院南昌330004

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0.25 g·m... 详细信息

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0.25 g·mL^-1)建立阳虚模型,造模结束后随机分为模型雌、雄组,生附片雌、雄组,阴附片雌、雄组以及阳附片雌、雄组,每组10只。按照小鼠组别给予相应药液,灌胃2周(1.54 g·kg^-1·d^-1),正常组和模型组给予等体积蒸馏水。灌胃结束后,采集小鼠肩胛处BAT,进行苏木素-伊红(HE)染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测解偶联蛋白1(UCP1)及其mRNA的表达。结果:与同性别正常组比较,模型组的BAT比重显著降低(P蛋白及其mRNA的表达、增强BAT的活性,且阳附片效果最好。

关键词：阴附片阳附片棕色脂肪组织(BAT) 解偶联蛋白1(UCP1) 阳虚证蛋白免疫印迹法聚合酶链式反应(PCR) 附子

艳山姜挥发油通过Nrf2/Notch1信号通路抑制高糖诱导的内皮间质转分化

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中国实验方剂学杂志 2020年第23期26卷 99-105页

作者：赵爽何丽黄梅张嫩玲姜丰沈祥春李玲张彦燕贵州医科大学基础医学院药学院贵阳550025

目的:分析艳山姜挥发油(EOFAZ)抑制高糖(HG)诱导的内皮间质转分化(EndMT)的作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分析EOFAZ对HG诱导EndMT及氧化应激损伤的药效学作用,设定空白组,EOFAZ低、高剂量组(1,4μg·L-1),高糖... 详细信息

目的:分析艳山姜挥发油(EOFAZ)抑制高糖(HG)诱导的内皮间质转分化(EndMT)的作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分析EOFAZ对HG诱导EndMT及氧化应激损伤的药效学作用,设定空白组,EOFAZ低、高剂量组(1,4μg·L-1),高糖组(35 mmol·L-1),EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h复制EndMT细胞模型。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测波形蛋白(vimentin)和血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白表达水平,血管生成实验检测细胞迁移能力以分析EOFAZ对EndMT的影响;采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)水平的变化以及试剂盒法检测细胞内丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的含量,以分析EOFAZ对氧化应激的影响;采用Western blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)与Notch1的蛋白表达水平。通过腺病毒(AD)转染实现Nrf2的过表达,进一步分析EOFAZ抑制EndMT的作用机制,设定空白组,AD-Nrf2+EOFAZ组(4μg·L-1),AD-Nrf2组,高糖组(35 mmol·L-1),EOFAZ组(4μg·L-1)。Nrf2基因重组腺病毒过表达质粒感染细胞6 h,更换为正常培养基24 h,EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h诱导EndMT。通过Western blot检测Nrf2,CD31,vimentin,Notch1和Snail的蛋白表达。结果:与高糖组比较,EOFAZ干预给药后明显上调HG诱导的CD31蛋白表达水平和下调vimentin蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P蛋白表达水平(P<0.01)。结论:EOFAZ可改善HG诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤,从而抑制EndMT,其作用与Nrf2/Notch1信号通路相关。

关键词：艳山姜挥发油氧化应激内皮间质转分化(EndMT) 核转录因子E2相关因子2(Nrf2) Notch信号蛋白免疫印迹法

丹参素冰片酯影响大鼠脑组织P-糖蛋白表达研究

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中国药理学通报 2017年第8期33卷 1114-1119页

作者：张郑杨黎朱凯莉周安惠爱玲张文成吴泽宇合肥工业大学食品科学与工程学院天然药物研究所安徽合肥230009 安徽中医药大学药学院安徽省中药研究与开发重点实验室安徽合肥230038

目的考察丹参素冰片酯(DBE)及丹参素钠-冰片(SDSS-B)等摩尔联合用药的脑部靶向作用与其对P-糖蛋白表达的影响。方法采用LC-MS分析大鼠尾静脉注射DBE、SDSS-B及SDSS后脑部丹参素分布量;蛋白免疫印迹法分析3种给药方式对大鼠脑组织P-糖蛋... 详细信息

目的考察丹参素冰片酯(DBE)及丹参素钠-冰片(SDSS-B)等摩尔联合用药的脑部靶向作用与其对P-糖蛋白表达的影响。方法采用LC-MS分析大鼠尾静脉注射DBE、SDSS-B及SDSS后脑部丹参素分布量;蛋白免疫印迹法分析3种给药方式对大鼠脑组织P-糖蛋白(P-gp)表达量的影响。结果以大鼠脑部丹参素分布定性评价其脑靶向大小为:DBE(SDSS-B)>SDSS;蛋白免疫印迹结果分析显示:DBE和SDSS-B给药均可有效降低大鼠海马组织P-gp表达水平(P0.05在5、15、45、60 min,与Control组对比)。结论 DBE和SDSS-B均表现出脑部靶向作用,其靶向作用与其降低脑组织P-gp表达量有关。

关键词：丹参素冰片丹参素冰片酯联合用药脑靶向 P-糖蛋白蛋白免疫印迹法