环磷酸腺苷生产酵母菌株不同阶段RNA的提取改进

作     者：李佳蔓 章小毛 郭敬涵 孙思凡 贾玉蝶 邹少兰 LI Jiaman;ZHANG Xiaomao;GUO Jinghan;SUN Sifan;JIA Yudie;ZOU Shaolan

作者机构：天津大学化工学院天津300072 系统生物工程教育部重点实验室天津300072 发酵技术国家工程研究中心(天津)天津300072 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2020年第46卷第24期

页      面：1-8页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081703[工学-生物化工] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：国家自然科学基金(31470208) 国家高技术研究发展计划(863计划,2012AA02A701) 天津市科委基金(18YFZCNC01240) 

主　　题：酵母 生长阶段 RNA提取 珠打 

摘      要：考察了环磷酸腺苷(cyclic adenosine monphosphate,cAMP)生产酵母菌株G2在YPD培养基中不同生长阶段的总RNA提取效果,并进行了初步改进研究。选择16 h对数生长期、36 h二次生长期和60 h稳定期细胞,分别用试剂盒提取,RNA得率依次为1010.6、171.5和91.3 ng/A 600。选择高、低丰度表达基因ACT 1和CYR 1进行实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR),同时判断DNA污染情况;琼脂糖电泳和RNA完整值(RNA integrity number,RIN)测定判断完整性。结果显示,36 h和60 h RNA提取物都存在DNA污染,仅16 h样品能满足RNA测序要求。进一步对比了5种破壁方法在破碎细胞及相应RNA提取上的效果,添加珠打破壁步骤破碎细胞效果最好,显示对16 h细胞RNA提取效果没有明显变化,但36 h和60 h细胞的RNA得率分别提高至979.6和785.6 ng/A 600,为前述值的5.71倍和8.60倍,且纯度能满足qRT-PCR要求,36 h样品能满足RNA测序要求。该研究有助于推动建立酵母生长全阶段RNA分析技术和深化cAMP相关途径调控机制的认识。