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基于LiCl法优化酿酒葡萄叶片的rna提取

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山西农业科学 2024年第2期52卷 50-57页

作者：成丹丹范丽娜王美娇于放王燕燕大连工业大学生物工程学院辽宁大连116033

为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片rna以用于荧光实时定量分析,为后续以酿酒葡萄叶片rna为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障,以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料,比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化... 详细信息

为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片rna以用于荧光实时定量分析,为后续以酿酒葡萄叶片rna为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障,以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料,比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和LiCl法(基于改良的SDS法)4种方法对酿酒葡萄叶片rna提取的影响。结果表明,重蒸酚法提取rna浓度较低,完整性较差,存在部分降解;Trizol法提取的rna则有部分DNA污染;改良CTAB法提取浓度较高,但蛋白和DNA污染严重;LiCl法提取结果显示,28S的条带亮度是18S的2倍,条带无拖尾,完整性较好,存在DNA污染和少量的蛋白污染。进一步在LiCl法基础上利用醋酸钠、DNAase消化、苯酚抽提法进一步优化,并采用荧光实时定量验证,结果表明,醋酸钠的加入rna质量无明显改善;然而,经氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提2次,氯仿抽提1次,氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提1次,并经DNAase进行消化,最终提取出质量浓度为173.611μg/mL、A_(260/280)为1.803纯度高、完整性较好且无蛋白和DNA污染的葡萄叶片总rna;经实时荧光定量PCR进一步验证,该方法提取的rna经反转录后获得较好的扩增曲线以及融解曲线,并能够对相关基因进行定量分析。

关键词：酿酒葡萄赤霞珠 rna提取 LiCl法优化 qRT-PCR

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猫爪草总rna提取方法效果比较

农村经济与科技 2024年第10期35卷 82-85页

作者：朱阳阳汪作琳郭光明谈珍妮张婷婷阜阳职业技术学院医学院安徽阜阳236031

为筛选出适合猫爪草病害鉴定的rna提取方法,以阜南县人工栽培感病猫爪草叶片为试验材料,比较 Trizol 、rnaiso Plus、CTAB 及SDS四种提取总rna的方法。通过琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性,使用Nano drop 2000超微量紫外分光系统检测rna... 详细信息

为筛选出适合猫爪草病害鉴定的rna提取方法,以阜南县人工栽培感病猫爪草叶片为试验材料,比较 Trizol 、rnaiso Plus、CTAB 及SDS四种提取总rna的方法。通过琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性,使用Nano drop 2000超微量紫外分光系统检测rna的纯度和浓度。结果表明,四种方法均能从感病猫爪草叶片提取出总rna,Trizol法提取总rna条带清晰完整,获得率高,质量浓度最佳,适用于后续猫爪草病害分子检测对rna样品品质的要求。

关键词：药用植物猫爪草 rna提取 Trizol 提取方法效果

四种类型竹种竹叶总rna提取方法的比较研究

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核农学报 2024年第2期38卷 256-264页

作者：马迎春王曙光詹卉于丽霞杨德佳高若天李娟西南林业大学生命科学学院云南昆明650224 西南林业大学云南省丛生竹重点实验室云南昆明650224 西南林业大学竹藤科学研究院云南昆明650224

为探索适合不同类型竹种竹叶总rna的提取方法,本研究选取合轴丛生型竹种勃氏甜龙竹、合轴散生型竹种云南箭竹、单轴散生型竹种毛竹、复轴混生型竹种巴山木竹为代表,提取其心叶的总rna,通过琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性,利用超微量紫... 详细信息

为探索适合不同类型竹种竹叶总rna的提取方法,本研究选取合轴丛生型竹种勃氏甜龙竹、合轴散生型竹种云南箭竹、单轴散生型竹种毛竹、复轴混生型竹种巴山木竹为代表,提取其心叶的总rna,通过琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性,利用超微量紫外分光系统检测rna的纯度和浓度,比较自配TRIzol试剂法、商品化TRIzon试剂法、rna提取试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法四种方法提取的竹叶总rna的质量、纯度和提取成本的差异。结果表明,自配TRIzol试剂法可以提取出质量好、浓度高的竹叶总rna,且提取成本较低;商品化TRIzon试剂法提取的总rna质量及浓度仅次于自配TRIzol试剂法,提取成本稍高;而rna提取试剂盒法和改良CTAB法无法提取出高浓度的竹叶总rna。本研究结果为竹类植物更深入的分子生物学研究提供了一定的基础,并为其他竹类植物总rna的提取提供了参考依据。

关键词：竹叶 rna提取隶属函数

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一种广泛适用的rna提取方法

生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 591-597页

作者：淳俊郑彦峰王胜华陈放四川大学生命科学学院成都610064

分离提取高质量的rna是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而rnase、多糖及多酚类物质严重干扰rna的分离提取过程.现利用硅藻土对rnase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的rna提取方法.在富含多糖... 详细信息

分离提取高质量的rna是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而rnase、多糖及多酚类物质严重干扰rna的分离提取过程.现利用硅藻土对rnase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的rna提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含rnase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种rna提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的***-PCR实验表明,提取的rna能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取rna的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总rna经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段rna,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小rna可以用于mirna克隆等后续实验.

关键词：硅藻土 rna提取小rna 乙二醇丁醚

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微囊藻群体总rna提取方法的比较

湖泊科学 2018年第2期30卷 441-448页

作者：高胜玲黄亚新卢亚萍施丽梅孔繁翔张小倩南京农业大学生命科学学院南京210095 中国科学院南京地理与湖泊研究所湖泊与环境国家重点实验室南京210008

微囊藻群体富含多糖类物质是影响微囊藻rna提取的关键因素.为了获得高质量的微囊藻群体总rna,对比分析4种针对多糖含量较高的方法——方法 1 PGTX-bead法、方法 2 CTAB-bead法、方法 3 Fast rnaPro Blue Kit和方法 4RNeasy Mini Kit... 详细信息

微囊藻群体富含多糖类物质是影响微囊藻rna提取的关键因素.为了获得高质量的微囊藻群体总rna,对比分析4种针对多糖含量较高的方法——方法 1 PGTX-bead法、方法 2 CTAB-bead法、方法 3 Fast rnaPro Blue Kit和方法 4RNeasy Mini Kit对微囊藻群体总rna的提取效果.采用琼脂糖凝胶电泳检测微囊藻群体rna的完整性,Nanodrop ND1000分光光度计检测rna纯度及浓度,并采用q PCR检测DNA污染情况.结果表明,4种方法都能从微囊藻群体中提取获得rna,并在去除DNA后都可以进行RT-PCR等后续实验.方法 1 PGTX-bead提取的rna产量最高,纯度好,DNA污染小,成本低,适合从微囊藻群体中大量提取rna;方法 2 CTAB-bead提取的rna样品产量也较高,但DNA污染严重,适合需要同时提取DNA和rna的样本;方法 3 Fast rnaPro Blue Kit和方法 4 RNeasy Mini Kit提取的rna产量都较低,但方法 4操作简单,耗时短,所检测目的基因的相对表达量较高,更适合从少量的微囊藻群体中提取总rna.

关键词：微囊藻群体 rna提取 qPCR 多糖

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一种改良的红豆杉成熟针叶总rna提取方法

分析化学 2018年第9期46卷 1379-1385页

作者：李德文杨超付金颖刘英于莉莉付玉杰东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室

红豆杉(Taxus chinensis（Pilger）Rehd.)是一种重要的药源植物,根据红豆杉针叶特点,本研究提出改良rna提取方法,即十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂（CTAB-Li Cl）联用法,以红豆杉的幼嫩、成熟针叶为材料,采用TRIzol法提取rna,结果表明,TRI... 详细信息

红豆杉(Taxus chinensis（Pilger）Rehd.)是一种重要的药源植物,根据红豆杉针叶特点,本研究提出改良rna提取方法,即十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂（CTAB-Li Cl）联用法,以红豆杉的幼嫩、成熟针叶为材料,采用TRIzol法提取rna,结果表明,TRIzol法提取嫩针叶中的rna质量完整,成熟针叶中的rna质量不完整;针对成熟针叶采用CTAB法、SDS-酚法和改良的CTAB-Li Cl法提取rna,并进行了质量验证比对显示,CTAB法和SDS-酚法提取的rna质量差,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA污染,改良CTAB-Li Cl联用法提取红豆杉成熟针叶的rna质量完整,A;/A;比值在1.9;.0之间,rna产率最高,分别为CTAB法和SDS-酚法提取的rna产率的1.37和1.24倍。进一步反转录后,利用特异性引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,片段大小符合预期。成熟针叶中高质量的rna更有利于红豆杉分子生物学方面的深入研究。

关键词：红豆杉 rna提取十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂法成熟针叶

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一种简单有效的植物rna提取方法

遗传 2006年第5期28卷 583-586页

作者：张容郑彦峰吴瑶王胜华陈放四川大学生命科学学院成都610064

在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制rnase,建立了一种高效的植物rna提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总rna进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有... 详细信息

在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制rnase,建立了一种高效的植物rna提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总rna进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的rna。进一步以皂土法提取的18Srrna为模板的RT-PCR结果分析表明,用该法提取的rna能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的rna提取方法。

关键词：皂土 rna提取麻疯树

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李果实高质量rna提取方法的比较和优化

北京林业大学学报 2010年第1期32卷 57-62页

作者：邵毅罗云波张京声陈安均朱本忠中国农业大学食品科学与营养工程学院

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其rna以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实rna的效果,... 详细信息

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其rna以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实rna的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取rna的吸光值,并用提取的rna反转录后扩增β-actin基因片段验证rna的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的rna完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的rna。

关键词： rna提取高氯酸盐李果实多酚多糖

烟草花粉管生长信号转导研究中一种简单的rna提取方法(简报)(英文)

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分子细胞生物学报 2009年第2期42卷 173-178页

作者：方华红马兆武李芬余光辉中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室武汉430074 河南师范大学生命科学学院新乡453007

液氮研磨是一种从具有坚韧细胞壁的植物细胞中提取rna的常规方法。然而,对于那种不易得到的少量的植物材料如花粉,这种方法的操作显得尤为困难。针对这一问题,本论文描述了一种不涉及液氮研磨的一种简单的rna提取方法:改变萌发花粉管的... 详细信息

液氮研磨是一种从具有坚韧细胞壁的植物细胞中提取rna的常规方法。然而,对于那种不易得到的少量的植物材料如花粉,这种方法的操作显得尤为困难。针对这一问题,本论文描述了一种不涉及液氮研磨的一种简单的rna提取方法:改变萌发花粉管的渗透压使其破裂而释放rna。这一方法减少了rna抽提材料的用量并且提高了rna的抽提效率,用于rna抽提的花粉的量可以少至一个花药。后续的rna分析需要的花粉可以少至10毫克,这一用量相当于从50个烟草花药中得到的量。这一rna提取方法的可靠性和可操作性为研究花粉管生长过程中对细胞外信号响应的基因时空表达提供了有益的参考。

关键词：基因表达烟草花粉管 rna提取