检索结果-南通市图书馆

作者：孙伟伟暨南大学

学位级别：硕士

目的：本研究通过慢病毒技术上调鼻咽癌细胞6-10B的HSP70-2基因的表达和异黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因的表达，探索HSP70-2基因对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：一方面应用慢病毒技术，构建pLV-HSP70-2-IRES... 详细信息

目的：本研究通过慢病毒技术上调鼻咽癌细胞6-10B的HSP70-2基因的表达和异黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因的表达，探索HSP70-2基因对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：一方面应用慢病毒技术，构建pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，分别获得目的慢病毒和空载慢病毒转导的6-10B细胞稳转株，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞（目的基因组）和6-10B-blank/eGFP细胞（空载对照组），上调6-10B细胞HSP70-2基因表达。另一方面应用黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因表达。继而应用Western blotting检测hsp70-2蛋白表达水平;CCK8检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡状况。结果：首先构建了pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP入门载体，再应用LR反应构建了pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，再运用慢病毒4质粒包装系统成功包装出目的慢病毒和空载慢病毒，分别转导6-10B细胞后经G418筛选出各自的单克隆细胞，利用Western blotting方法检测各组细胞hsp70-2蛋白表达水平，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞组与6-10B-blank/eGFP细胞组或与6-10B细胞组比较，hsp70-2蛋白表达量升高75.31±3.54%（P0.05）。另一方面，应用不同浓度的异黄酮类药物ZSGS-4（0μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL和17.5μg/mL）分别处理6-10B和5-8F细胞12h。各实验组与对照组比较，hsp70-2蛋白的表达水平明显降低（p<0.05）;细胞抑制率明显增强（p<0.05）;G0/G1期和S期DNA含量明显降低（p<0.05）;subG0/G1期和G2/M期DNA含量明显升高（p<0.05）;细胞凋亡率明显升高（p<0.05）。结论：本研究通过上调鼻咽癌细胞6-10B的hsp70-2蛋白表达，促进其生长增殖;而下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的hsp70-2蛋白表达，抑制其生长增殖和促使其凋亡。

关键词： HSP70-2 鼻咽癌慢病毒 ZSGS-4

CK1α基因shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

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CK1α基因shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

作者：姜少杰暨南大学

学位级别：硕士

目的：近年来的研究表明,酪蛋白激酶Ⅰα(Casein Kinase 1 alpha, CKlα)与肿瘤的发生发展关系密切。通过RNA干扰技术特异沉默CK1α基因,体外研究其对A549细胞生长增殖的影响,为进一步研究CK1α基因在肺癌中的作用提供参考。方法：构建... 详细信息

目的：近年来的研究表明,酪蛋白激酶Ⅰα(Casein Kinase 1 alpha, CKlα)与肿瘤的发生发展关系密切。通过RNA干扰技术特异沉默CK1α基因,体外研究其对A549细胞生长增殖的影响,为进一步研究CK1α基因在肺癌中的作用提供参考。方法：构建三个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体及一个无义错配载体,分别转染A549细胞,并用G418筛选出阳性克隆,通过RT-PCR和Western blotting分别检测CK1α基因的mRNA和蛋白表达。通过细胞计数绘制细胞生长曲线,通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果：实验成功构建了pGenesil-shRNA表达质粒,并且该质粒明显下调A549细胞CK1α的表达,A549-S1、A549-S2及A549-S3 mRNA水平的抑制率分别为84.3%、57.9%和61.8%(P<0.001);蛋白质水平的抑制率分别为78.4%、51.3%和59.9%(P<0.001)。选择干扰效率较高的A549-S1进行后续实验。细胞计数和CCK-8增殖实验结果显示,A549-S1与A549和A549-NK两对照组的平均值比较,A549-S1的增殖受到明显抑制,其细胞计数抑制率为37.7±2.2%(P<0.01);CCK-8抑制率为26.2±1.5%(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,A549-S1的S期和G2／M期细胞数明显少于A549和A549-NK两对照组的平均值,S期减少75.0±4.0%(P<0.01);G2／M期减少45.2±5.4%(P<0.05)。结论：CK1α基因的沉默可明显抑制A549细胞的生长和增殖,且细胞被阻滞在G0／G1期。

关键词： CK1α A549 RNA干扰细胞增殖

溶质载体蛋白SLC15A3参与抗病毒天然免疫反应

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溶质载体蛋白SLC15A3参与抗病毒天然免疫反应

作者：何龙珍暨南大学

学位级别：硕士

研究目的溶质载体蛋白15家族成员3(solute carrier family 15 member 3,SLC15A3)是一种膜转运蛋白,以往的研究大多围绕其转运功能展开,而关于其在抗病毒天然免疫反应方面的研究非常罕见。本课题组前期研究工作显示,应用单纯疱疹病毒1(he... 详细信息

研究目的溶质载体蛋白15家族成员3(solute carrier family 15 member 3,SLC15A3)是一种膜转运蛋白,以往的研究大多围绕其转运功能展开,而关于其在抗病毒天然免疫反应方面的研究非常罕见。本课题组前期研究工作显示,应用单纯疱疹病毒1(herpes simplex virus 1,HSV-1)可诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)SLC15A3高表达。因此,本课题将探索SLC15A3参与抗病毒天然免疫反应及其分子机制和相关信号通路。研究方法1.用HSV-1或水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)或仙台病毒(sendai virus,SeV)感染从PBMCs分离的多种免疫细胞(T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、NK细胞和树突状细胞)和/或多个细胞系(HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞),并应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹(western blot,WB)检测细胞中SLC15A3的表达量。2.用激光共聚焦显微镜研究SLC15A3蛋白的亚细胞定位。3.用SLC15A3过表达和沉默实验观测细胞病毒复制和干扰素诱生。4.用免疫共沉淀法寻找SLC15A3相互作用蛋白。研究结果***15A3高表达于受HSV-1感染的B淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞、HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞以及受VSV和SeV感染的HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞。***15A3能定位于溶酶体、线粒体、过氧化物酶体、晚期内涵体和内质网,但不定位高尔基体。***15A3能增加IFNβ和IL-29的分泌,并能有效抑制HSV-1、VSV和SeV的复制。***15A3能与线粒体和/或过氧化物酶体上线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)和内质网上干扰素诱导蛋白(stimulator of interferon genes,STING)相互结合。研究结论***15A3高表达于受HSV-1感染的部分免疫细胞,如单核细胞、B淋巴细胞和树突状细胞以及受HSV-1、SeV和VSV感染的细胞系,如HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞。***15A3能定位于溶酶体、线粒体、过氧化物酶体、晚期内涵体和内质网。***15A3能通过诱导干扰素的分泌,如IFNβ和IL-29,有效抑制HSV-1、VSV和SeV的复制。***15A3能参与抗病毒天然免疫反应MAVS和STING信号通路。

关键词：溶质载体蛋白15家族成员3 天然免疫反应单纯疱疹病毒1 水疱性口炎病毒仙台病毒线粒体抗病毒信号蛋白干扰素诱导蛋白干扰素

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氯丙醇影响生殖的毒性机制初步研究

氯丙醇影响生殖的毒性机制初步研究

作者：白顺暨南大学

学位级别：硕士

目的：利用大鼠睾丸间质瘤细胞R2C、小鼠受精卵细胞和早期胚胎为实验对象，初步探索氯丙醇(chloropropanol，CP)两种主要形式，即3-氯-1,2-丙二醇(3-monochloropropane-1,2-diol，3-MCPD)和1,3-二氯-2-丙醇(1,3-dichloro-2-propanol，1,3-DCP)影响生殖的毒性机制探索。方法： MTT法检测CP对R2C细胞的生长影响和筛选CP实验浓度;原子力显微镜(atomic force microscopy，AFM)和单细胞电泳法(single cell gel electrophoresisassay，SCGE)观察细胞形态和DNA损伤作用;放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)检测细胞孕酮的合成和分泌状况;QRT-PCR法检测孕酮合成通路中关键基因StAR、P4Cscc和3β-HSD mRNA水平;Western blotting法检测StAR和3β-HSD蛋白水平;流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential，MMP);化学发光法(chemiluminescence，CL)检测细胞内活性氧(reactie oxygen species，ROS)和环腺苷酸(cyclic adenosinemonophosphate，cAMP)的水平。体外受精检测小鼠卵母细胞碎裂率、受精率和受精卵早期胚胎发育状况。结果： 3-MCPD和1,3-DCP均可抑制R2C细胞生长。3-MCPD的IC、ICC和IC分别为1.027、1.802和3.160mM;1,3-DCP的IC、ICC和IC分别为1.161、1.897和3.100mM。AFM结果，3-MCPD或1,3-DCP刺激R2C细胞24h，随着IC、ICC到IC刺激剂量的增加，细胞体积逐渐变小，外形由多边趋向椭圆，细胞膜的变化用平均粗糙度(Ra)、均方根粗糙度(Rq)和平均高度(Rpm)来量化分析。3-MCPD各刺激组(IC、ICC和IC)和对照组的Ra值分别为36.10±4.46nm、40.80±10.04nm、82.92±12.73nm和14.70±2.44nm;Rq值分别为45.72±4.838nm、C.70±12.70nm、101.80±15.04nm和18.48±3.075nm;Rpm值分别为33.00±11.19nm、36.42±11.21nm、92.36±17.18nm和18.88±3.867nm。1,3-DCP各刺激组和对照组的Ra值分别为38.10±5.90nm、48.80±14.29nm、84.92±15.47nm和14.70±2.44nm;Rq值分别为51.98±6.35nm、60.08±13.25nm、108.5±7.47nm和18.48±3.075nm;Rpm值分别为35.00±11.52nm、46.42±13.72nm、100.4±18.54nm和18.88±3.867nm。以上各实验组与对照组之间进行两两比较，均有显著性差异(p＜0.05)。这些结果提示，3-MCPD和1,3-DCP对R2C细胞均有损伤作用。SCGE结果，3-MCPD或1,3-DCP刺激R2C细胞4h，用尾部DNA含量、尾长和Olive尾距来量化刺激组DNA的损伤状况。3-MCPD各刺激组和对照组尾部DNA含量分别为10.243±1.073%、11.427±1.865%、18.984±1.640%和4.288±0.660%;尾长分别为17.429±1.913μm、19.333±1.647μm、29.167±2.332μm和12.286±0.808μm;Olive尾距分别为3.247±0.471μm、4.844±0.807μm、8.965±0.800μm和1.759±0.144μm。1,3-DCP各刺激组和对照组尾部DNA含量分别为23.80±2.48%、34.33±3.18%、38.03±3.63%和4.29±0.66%;尾长分别为58.67±6.38μm、79.67±5.86μm、84.86±6.07μm和12.29±0.81μm;Olive尾距分别为7.80±1.13μm、18.C±1.22μm、21.05±2.74μm和1.76±0.14μm。以上各实验组与对照组之间进行比较，均有显著性差异(p＜0.05)。3-MCPD和1,3-DCP对细胞DNA均有损伤作用。RIA结果，3-MCPD或1,3-DCP刺激R2C细胞4h或24h，随着浓度的增加或时间的延长，具有抑制孕酮合成能力。3-MCPD刺激细胞4h，各刺激组与对照组相比，孕酮合成量没有显著性差异(p＞0.05);3-MCPD继续作用细胞到24h，各刺激组和对照

关键词： 3-氯-1,2-丙二醇 1,3-二氯-2-丙醇孕酮活性氧线粒体膜电位环腺苷酸类固醇激素合成急性调节蛋白