HSP70-2基因在鼻咽癌细胞增殖与凋亡中的作用

作     者：孙伟伟 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邹飞雁

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：HSP70-2 鼻咽癌 慢病毒 ZSGS-4 

摘      要：目的： 本研究通过慢病毒技术上调鼻咽癌细胞6-10B的HSP70-2基因的表达和异黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因的表达，探索HSP70-2基因对鼻咽癌细胞增殖的影响。 方法： 一方面应用慢病毒技术，构建pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，分别获得目的慢病毒和空载慢病毒转导的6-10B细胞稳转株，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞（目的基因组）和6-10B-blank/eGFP细胞（空载对照组），上调6-10B细胞HSP70-2基因表达。另一方面应用黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因表达。继而应用Western blotting检测hsp70-2蛋白表达水平;CCK8检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡状况。 结果： 首先构建了pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP入门载体，再应用LR反应构建了pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，再运用慢病毒4质粒包装系统成功包装出目的慢病毒和空载慢病毒，分别转导6-10B细胞后经G418筛选出各自的单克隆细胞，利用Western blotting方法检测各组细胞hsp70-2蛋白表达水平，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞组与6-10B-blank/eGFP细胞组或与6-10B细胞组比较，hsp70-2蛋白表达量升高75.31±3.54%（P0.05）。 另一方面，应用不同浓度的异黄酮类药物ZSGS-4（0μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL和17.5μg/mL）分别处理6-10B和5-8F细胞12h。各实验组与对照组比较，hsp70-2蛋白的表达水平明显降低（p0.05）;细胞抑制率明显增强（p0.05）;G0/G1期和S期DNA含量明显降低（p0.05）;subG0/G1期和G2/M期DNA含量明显升高（p0.05）;细胞凋亡率明显升高（p0.05）。 结论： 本研究通过上调鼻咽癌细胞6-10B的hsp70-2蛋白表达，促进其生长增殖;而下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的hsp70-2蛋白表达，抑制其生长增殖和促使其凋亡。