溶质载体蛋白SLC15A3参与抗病毒天然免疫反应

作     者：何龙珍 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邹飞雁

授予年度：2018年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：溶质载体蛋白15家族成员3 天然免疫反应 单纯疱疹病毒1 水疱性口炎病毒 仙台病毒 线粒体抗病毒信号蛋白 干扰素诱导蛋白 干扰素 

摘      要：研究目的溶质载体蛋白15家族成员3(solute carrier family 15 member 3,SLC15A3)是一种膜转运蛋白,以往的研究大多围绕其转运功能展开,而关于其在抗病毒天然免疫反应方面的研究非常罕见。本课题组前期研究工作显示,应用单纯疱疹病毒1(herpes simplex virus 1,HSV-1)可诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)SLC15A3高表达。因此,本课题将探索SLC15A3参与抗病毒天然免疫反应及其分子机制和相关信号通路。研究方法1.用HSV-1或水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)或仙台病毒(sendai virus,SeV)感染从PBMCs分离的多种免疫细胞(T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、NK细胞和树突状细胞)和/或多个细胞系(HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞),并应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹(western blot,WB)检测细胞中SLC15A3的表达量。2.用激光共聚焦显微镜研究SLC15A3蛋白的亚细胞定位。3.用SLC15A3过表达和沉默实验观测细胞病毒复制和干扰素诱生。4.用免疫共沉淀法寻找SLC15A3相互作用蛋白。研究结果***15A3高表达于受HSV-1感染的B淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞、HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞以及受VSV和SeV感染的HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞。***15A3能定位于溶酶体、线粒体、过氧化物酶体、晚期内涵体和内质网,但不定位高尔基体。***15A3能增加IFNβ和IL-29的分泌,并能有效抑制HSV-1、VSV和SeV的复制。***15A3能与线粒体和/或过氧化物酶体上线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)和内质网上干扰素诱导蛋白(stimulator of interferon genes,STING)相互结合。研究结论***15A3高表达于受HSV-1感染的部分免疫细胞,如单核细胞、B淋巴细胞和树突状细胞以及受HSV-1、SeV和VSV感染的细胞系,如HeLa细胞、HaCaT细胞、THP1细胞和293T细胞。***15A3能定位于溶酶体、线粒体、过氧化物酶体、晚期内涵体和内质网。***15A3能通过诱导干扰素的分泌,如IFNβ和IL-29,有效抑制HSV-1、VSV和SeV的复制。***15A3能参与抗病毒天然免疫反应MAVS和STING信号通路。