检索结果-南通市图书馆

作者：姜瑾南通大学

学位级别：硕士

目的探讨中国汉族人群中DNA修复基因的(copy number variants, CNVs)与年龄相关性白内障(age-related cataract ARC)发病的关系,检测ARC患者和正常对照组外周血淋巴细胞的DNA损伤并探讨DNA修复基因的CNVs对DNA修复功能的影响。方法本... 详细信息

目的探讨中国汉族人群中DNA修复基因的(copy number variants, CNVs)与年龄相关性白内障(age-related cataract ARC)发病的关系,检测ARC患者和正常对照组外周血淋巴细胞的DNA损伤并探讨DNA修复基因的CNVs对DNA修复功能的影响。方法本实验设计为以人群为基础的流行病学研究。研究对象来自“江苏眼病研究”流行病学人群。包括780名ARC患者(皮质性257例,核性368例,后囊下性34例,混合性121例)和525名对照。采集受试者外周静脉血,提取全血基因组DNA。通过实时荧光PCR方法(RT-PCR)检测四种DNA修复基因的拷贝数。用卡方检验分析ARC组和对照组DNA修复基因拷贝数的差异以及相对危险度(odds ratio, OR)。并通过外周血淋巴细胞彗星实验检测ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤。结果ARC组(780例)中WRN基因拷贝数为0的1例(0.1%),拷贝数为1的4例(0.5%),拷贝数为2的726例(93.1%),拷贝数>2的49例(6.3%)：对照组(525例)中WRN拷贝数为0的1例(0.2%),拷贝数为1的4例(0.8%),拷贝数为2的502例(95.6%),拷贝数>2的18例(3.4%)。表明在WRN基因中可能存在此前未见报道的CNV。 WRN基因高拷贝(CN=3+)与ARC的易感性有关(OR=1.88,P=0.02)。 HSF4基因低拷贝(CN=I)的人群对ARC易感(OR=4.09,P=0.004)。进行Bonferroni多重校正以后,HSF4基因的CNV与ARC的易感性仍相关。WRN基因的CNV与白内障的易感性无统计学意义。 WRN基因高拷贝(CN=3+)与核性以及后囊下性白内障的易感性有关(OR=2.06, P=0.02;and OR=3.72, P=0.02)。HSF4基因低拷贝(CN=I)与核性以及后囊下性白内障的易感性有关(OR=5.73, P=0.001;OR=6.80,P=0.01)。进行Bonferroni多重校正以后,HSF4的CNV与核性和后囊下性白内障的易感性仍相关。WRN基因的CNV与白内障的易感性无统计学意义。 WRN和HSF4基因CNV的联合作用显著增加了ARC的易感性,同时携带WRN和HSF4基因CNV的OR值从单纯HSF4基因的2.63上升到联合作用后的6.80。进行Bonferroni多重校正以后,WRN和HSF4基因的联合作用对ARC的易感性无统计学意义。其他CNVs组合的联合作用与ARC的易感性无统计学意义。外周血淋巴细胞彗星实验显示,ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤比正常对照显著增高。并且在男性组及女性组中,ARC患者外周血淋巴细胞的DNA损伤程度都比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HSF4基因与WRN基因的CNVs可能与中国汉族人群ARC尤其是核性和后囊下性ARC的易感性有关。WRN和HSF4基因的联合作用增加了ARC的易感性。DNA修复基因对ARC易感性有一定的作用,并且对不同亚型ARC产生不同的影响。

关键词：年龄相关性白内障 DNA修复基因 ERCC6 WRN HOGG1 HSF4 拷贝数变异流行病学彗星实验

OGG1基因在年龄相关性白内障患者晶状体中的表达及甲基化研究

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OGG1基因在年龄相关性白内障患者晶状体中的表达及甲基化研究

作者：王勇南通大学

学位级别：硕士

目的探索参与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)DNA损伤后碱基清除修复途径(base excision repair,BER)的氧化损伤修复基因—8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)在正常中老年人、ARC(皮质性)患者的晶状体皮质中的表达及第一外显子区甲基化状态,并分析其表达与DNA甲基化的关系。方法本实验设计为临床病例对照研究。病例组为2013年3月-2013年9月在南通大学附属医院眼科诊断为ARC,LOCS III分级晶状体混浊程度为C4,并接受白内障手术的患者,共15例15眼;对照组为本院眼科诊断为玻璃体视网膜疾病,因年龄或手术等因素需要在玻璃体切除手术中同时作透明晶状体摘除者,及本院红十字眼库接受的中老年人身后捐献的新鲜眼球,共15例15眼,于手术中取得晶状体皮质。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析OGG1 m RNA表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析蛋白质表达量,免疫荧光分析细胞内的蛋白质定位,甲基化特异性PCR法(BSP)检测OGG1基因的甲基化状态。SPSS17.0统计软件分析数据。结果RT-PCR及Western blot结果表明,与对照组相比,ARC患者晶状体皮质中OGG1 m RNA及蛋白质表达均下调(t=4.39,P<0.01;t=7.95,P<0.01)。免疫荧光结果表明在ARC患者晶状体皮质中OGG1阳性细胞减少(t=5.3,P<0.01)。BSP分析表明在ARC患者中OGG1基因第一外显子Cp G岛呈现高甲基化(t=11.64,P<0.01)。结论OGG1基因低表达,可能与ARC的发生发展相关;OGG1基因第一外显子CpG岛的甲基化调节OGG1基因的表达,进而影响其DNA的修复功能,可作为ARC防治的新靶点。

关键词： 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1 年龄相关性白内障晶状体皮质 DNA甲基化表观遗传学

WRN的表达及表观遗传学改变与年龄相关性白内障的关系

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WRN的表达及表观遗传学改变与年龄相关性白内障的关系

作者：朱曦南通大学

学位级别：硕士

目的本文旨在探索DNA氧化损伤修复基因WRN在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)患者晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)和晶状体皮质中的表达及甲基化状态与组蛋白修饰,并分析其表达与表观遗传修饰的关系。方法本实... 详细信息

目的本文旨在探索DNA氧化损伤修复基因WRN在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)患者晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)和晶状体皮质中的表达及甲基化状态与组蛋白修饰,并分析其表达与表观遗传修饰的关系。方法本实验设计为临床病例对照研究。病例组由2013年8月-2014年8月在南通大学附属医院眼科诊断为ARC并接受白内障手术的患者组成,包括皮质性、核性、后囊下性三种类型ARC,每种各39例39眼;对照组为本院眼科诊断为玻璃体视网膜疾病,因年龄或手术等因素需要在玻璃体切除手术中同时作透明晶状体摘除者,共39例39眼,与病例组患者年龄相匹配。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析WRN基因m RNA表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析蛋白质表达量,甲基化特异性PCR法(BSP)检测WRN的甲基化状态。染色质免疫共沉淀(CHIP)分析检测WRN的组蛋白修饰状态。对人晶状体上皮细胞株(HLEB-3)进行5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-aza-d C)和曲古霉素(TSA,trichostatin A)处理后检测WRN表达的变化。结果与对照组相比,ARC患者LECs中WRN基因m RNA及蛋白质表达均下调(F=162.82,P<0.01;F=68.72,P<0.01)。但是在病例组和对照组患者的晶状体皮质中均没有检测到WRN的表达。在ARC患者LECs中WRN基因启动子区Cp G岛呈现高甲基化(F=104.01,P<0.01)。ARC组患者与对照组患者的晶状体皮质中WRN基因启动子区Cp G岛甲基化率差异无统计学意义。与对照组相比,ARC患者LECs中H3乙酰化水平较低而H3K9三甲基化水平则较高(F=67.00,P<0.01;F=21.40,P<0.01)。经5-aza-d C和TSA处理后,HLEB-3中WRN蛋白表达升高(t=0.32,P<0.01;t=0.36,P<0.01)。结论WRN基因表达的下调可能与ARC的发生发展相关。WRN基因启动子区Cp G岛的DNA甲基化及组蛋白修饰可能调节其表达,与ARC的发病机制相关。

关键词： WRN 年龄相关性白内障晶状体 DNA甲基化组蛋白修饰表观遗传学

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《管子》辑佚研究

《管子》辑佚研究

作者：连伟喀什大学

学位级别：硕士

中华典籍浩如烟海,《管子》是子书中较为重要的一部,今本《管子》(1),目录有八十六篇,其中十篇有目无文,已经亡佚。且《封禅篇》也已经亡佚,今本《封禅篇》之文,是尹知章为《管子》作注之时,以《史记·封禅书》中管仲言论补上的,如此八... 详细信息

中华典籍浩如烟海,《管子》是子书中较为重要的一部,今本《管子》(1),目录有八十六篇,其中十篇有目无文,已经亡佚。且《封禅篇》也已经亡佚,今本《封禅篇》之文,是尹知章为《管子》作注之时,以《史记·封禅书》中管仲言论补上的,如此八十六篇,已经亡佚了11篇。自唐代开始,不断有人对《管子》一书进行辑佚。展开《管子》的辑佚工作,尽量恢复《管子》的早期面貌,对于保存典籍和先秦学术思想史研究具有重大意义。本文第一章讨论了《管子》流传和散佚的过程,以及今本《管子》篇目和文本所存在的问题,这是辑佚工作的出发点。《管子》的流传和亡佚过程可以以两个时间节点划分为三个时间段:1、刘向校书之前,古本《管子》以若干单篇文献的形式流传;2.刘向校书之后,《管子》有了一个八十六篇的定本,从此《管子》以这个八十六篇定本的形式抄写流传,在流传过程中逐渐有亡佚;3.宋代雕版印刷术成熟,书籍大量出版,宋本《管子》流传至今,《管子》的主体文本不再流失,《管子》的亡佚过程终结。根据以上时间节点的划分,可以有针对性地展开《管子》辑佚的工作,以出土文献辑古本《管子》,以类书、政书、古注辑今本《管子》所无文句。分析今本《管子》内部篇目和文本存在的问题,可以指导我们从今本《管子》文本发掘佚失篇章的内容。第二章主要是考辨历代古注、类书、政书等文献辑佚《管子》的成果,并在前人的基础上,进一步利用这些文献继续挖掘《管子》佚文。第三章主要是论述《管子》的内部析出式辑佚的得失。《管子》存在内部篇目与文本的错乱,故存在佚篇已经被混入其他篇章的可能性。张佩纶、石一参、李勉等人都从《管子》其他篇章辑出了他们认为属于佚篇的内容,本章对此种辑佚方法和所辑内容进行考论和评价。第四章主要是利用出土文献进行辑佚,以还原《管子》早期文本的面貌。银雀山汉简《王兵》篇、清华简《管仲》篇,都可能是刘向未曾见过的《管子》佚篇。通过以上三种方法,使得《管子》的佚篇得到部分恢复,还搜集到了一些无法确定篇章归属的《管子》佚文,对于还原《管子》原貌很有意义。但是因为掌握资料有限,《管子》辑佚的工作还需要更深入开展,出土文献的不断发掘将是以后《管子》辑佚的最佳切入点。本文的创新之处主要在于,对历代《管子》辑佚成果进行了考辨和评述,使得前人散乱无章、真伪参半的辑佚成果得到系统性地校勘、辨别和定位,肯定了前人在《管子》辑佚方面的成绩与地位,并努力纠正其中的谬误和不足;在前人的基础上继续挖掘,又在古注、类书、政书上辑得若干《管子》佚文;利用新发现的出土文献进行《管子》辑佚,取得了《管子》辑佚的新成果。

关键词：《管子》辑佚出土文献

乙酰化8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1与年龄相关性白内障的关系

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乙酰化8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1与年龄相关性白内障的关系

作者：赵唯洁南通大学

学位级别：硕士

目的探索乙酰化8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(acetylated 8-oxoguanine DNA glycosylase 1,Ac-OGG1)与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)的关系,并探讨在ARC病理过程中,组蛋白乙酰基转移酶p300和组蛋白去乙酰化酶SIRT1对8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)切除8-氧鸟嘌呤(8-oxo-guanine,8-oxoG)能力的影响。方法本实验为临床病例对照研究。ARC组由在南通大学附属医院眼科诊断为ARC并接受白内障手术的患者组成,包括皮质性ARC、核性ARC、后囊下性ARC各80例80眼;对照组包括(1)南通大学附属医院眼科诊断为玻璃体视网膜病,因年龄或手术等因素需在玻璃体切除手术中同时作透明晶状体摘除者;(2)南通大学附属医院红十字眼库接受的中老年人身后捐献的新鲜眼球。对照组共80例80眼。手术显微镜下实施前囊膜连续环形撕囊时获取晶状体前囊膜。免疫荧光法观察8-oxoG,Ac-OGG1,OGG1,p300和SIRT1在人类晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)中的细胞定位及其表达变化。Western blot检测Ac-OGG1和OGG1蛋白质表达水平。免疫共沉淀法分析在LECs中OGG1与p300或SIRT1之间特异性结合的水平变化。结果ARC组LECs中8-oxoG的阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)。在ARC组中,Ac-OGG1分子的蛋白质表达明显降低,而OGG1分子的蛋白质表达明显升高(P<0.01)。Ac-OGG1的阳性细胞百分数在ARC组LECs中明显减少,而OGG1的阳性细胞百分数明显增加(P<0.01)。在LECs中,OGG1能与p300相互结合形成复合物并共同定位于细胞核中,同时两者共定位的阳性细胞数在ARC组中明显少于对照组(P<0.05)。另外,OGG1也能与SIRT1共同定位于LECs细胞核中,且两者共定位的阳性细胞数在ARC组中明显多于对照组(P<0.01)。结论(1)Ac-OGG1通过调节OGG1的氧化修复活性而参与ARC的病理过程。(2)ARC形成过程中,8-oxoG的聚集可能与OGG1乙酰化水平的下降有关。(3)OGG1乙酰化水平的下降可能是由于p300与OGG1相互结合能力的减弱和/或SIRT1与OGG1相互结合能力的增强所致。

关键词：年龄相关性白内障乙酰化 p300 SIRT1 表观遗传学 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1

DNA修复基因的多态性以及DNA损伤与汉族人年龄相关性白内障的关系

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DNA修复基因的多态性以及DNA损伤与汉族人年龄相关性白内障的关系

作者：苏舒南通大学

学位级别：硕士

背景在年龄>50岁人群中,年龄相关性白内障(age-related cataract, ARC)是引起严重视力损伤最常见的原因之一。年龄相关性白内障可分为四种类型：分别为皮质型、核型、后囊下型以及混合型。有研究提示氧化损伤在ARC的发生发展过程中起重... 详细信息

背景在年龄>50岁人群中,年龄相关性白内障(age-related cataract, ARC)是引起严重视力损伤最常见的原因之一。年龄相关性白内障可分为四种类型：分别为皮质型、核型、后囊下型以及混合型。有研究提示氧化损伤在ARC的发生发展过程中起重要作用。目的本研究旨在探讨DNA氧化损伤修复基因BLM. WRN. ERCC6以及OGG1的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)是否影响年龄相关性白内障(ARC)的发生,并检测SNP是否会引起外周血淋巴细胞DNA损伤程度的改变。方法本实验设计为病例对照研究,从“江苏眼病研究：无锡滨湖区以及盐城阜宁县眼病流行病调查”人群收集ARC患者789名(皮质型257例,核型366例,后囊下型34例,混合型132例),其中男性315名、女性474名,平均年龄70.38+7.72岁。同时收集与患者年龄、性别相匹配且无亲属关系的对照531人。采集受试者外周静脉血,提取全血基因组DNA,实时荧光PCR方法分析BLM (rs1063147. rs7183308. rs17273206. rs8027126. rs7175811. rs3815003. rs6496724), OGG1(rs2072668. rs2304277), ERCC6(***4253038)及WRN(rs4733220. rs2725361. ***1801195. ***11574311)的基因型。用构成比表示ARC组和对照组各位点等位基因的出现频率,运用卡方检验(Stata8.0)比较各组之间的差异并计算各位点的相对危险度(OR)。在789例ARC患者中随机选取69例(皮质型32例,核型22例,混合型15例),531例对照中选取年龄、性别均匹配的28例进行外周血淋巴细胞彗星试验,以检测外周血淋巴细胞的DNA损伤,并运用方差分析计算SNP对外周血淋巴细胞DNA损伤的影响。结果WRN-rs11574311与ARC,皮质型以及混合型ARC相关(P=0.003, OR=1.49;P=0.001, OR=1.68;P<0.0001, OR=2.08), BLM-rs1063147与核型ARC相关(P=0.03, OR=1.31), WRN-rs2725383与皮质型ARC相关(P=0.01, OR=1.49), WRN-rs4733220以及WRN-rs2725338与混合型ARC相关(P=0.04, OR=0.74and P-0.003, OR=0.60)。经过Bonferroni校正multiple testing后,WRN-rs11574311仍然与皮质型以及混合型ARC相关,WRN-rs2725338仍然与混合型ARC相关,P值均小于0.05,其他各位点与ARC以及各亚型ARC均失去统计学联系。SNP位点不同基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤程度的差异无统计学差异。结论在年龄≥50岁人群中,WRN及BLM基因在ARC的发生发展过程中起重要作用,而且在不同类型的ARC中所起的作用也有所不同,说明不同亚型的ARC可能具有特异性的危险因素以及致病机制。SNP不同基因型对外周血淋巴细胞DNA损伤程度无影响。

关键词：年龄相关性白内障 DNA修复基因 DNA损伤单核苷酸多态性流行病学研究

GSTM1、GSTT1拷贝数变异与汉族人年龄相关性白内障的关系

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GSTM1、GSTT1拷贝数变异与汉族人年龄相关性白内障的关系

作者：周婧南通大学

学位级别：硕士

目的探讨GSTM1和GSTT1的拷贝数变异(CNVs)与中国汉族人年龄相关性白内障(ARC)发病的关系。方法通过前瞻性病例对照研究,从医院和流行病调查基地收集ARC患者279名(皮质性131例,核性70例,后囊下性78例),其中男性103名、女性176名,平均年龄... 详细信息

目的探讨GSTM1和GSTT1的拷贝数变异(CNVs)与中国汉族人年龄相关性白内障(ARC)发病的关系。方法通过前瞻性病例对照研究,从医院和流行病调查基地收集ARC患者279名(皮质性131例,核性70例,后囊下性78例),其中男性103名、女性176名,平均年龄69.0岁。同时收集与患者年龄、性别相匹配且无亲属关系的对照145人。采集受试者外周静脉血,提取全血基因组DNA,用△△Ct的方法通过实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测GSTM1和GSTT1拷贝数。用卡方检验分析两组间GSTM1和GSTT1基因拷贝数携带率的差异和相对危险度(OR)。结果ARC组(279例)中GSTM1基因拷贝数为0的173例(62.0%),拷贝数为1的12例(4.3%),拷贝数为2的49例(17.6%),拷贝数>2的45例(16.1%);对照组(145例)中GSTM1拷贝数为0的95例(65.5%),拷贝数为1的7例(4.8%),拷贝数为2的20例(13.8%),拷贝数>2的23例(15.9)。GSTM1拷贝数为0的ARC组和对照组相比,差别无统计学意义(P>0.05)。GSTM1拷贝数>0的ARC组和对照组相比,差别无统计学意义(P>0.05)。说明GSTM1拷贝数变异与ARC发病无关,GSTM1不是ARC发病的危险因素。ARC组(279例)中GSTT1拷贝数为0的146例(52.3%),拷贝数为1的1例(0.4%),拷贝数为2的11例(3.9%),拷贝数>2的121例(43.4%);对照组145人中GSTT1拷贝数为0的56例(38.6%),拷贝数为1的3例(2.1%),拷贝数为2的12例(8.3%),拷贝数>2的74例(51.0%)。GSTT1拷贝数为0的ARC组和对照组相比,差别有统计学意义(P=0.03,OR=1.74,95%CI=1.14-2.68)。GSTT1拷贝数>0的ARC组和对照组相比,差别均无统计学意义(P值均>0.05)。说明GSTT1基因完全缺失与ARC发病有关,GSTT1完全缺失是ARC发病的危险因素。皮质性ARC中GSTM1拷贝数是0、1、2和>2的分别为77(58.8%)、9(6.9%)、29(22.1%)和16例(12.1%);核性ARC中GSTM1拷贝数是0、1、2和>2的分别为40(57.2%)、3(4.3%)、15(21.4%)和12(17.1%)例;后囊下性ARC中GSTM1拷贝数是0、1、2和>2的分别为56(71.8%)、0、5(6.4%)、17(21.8%)例。GSTM1拷贝数变异在不同类型ARC和对照组间,差别均无统计学意义(P值均>0.05)。说明GSTM1拷贝数变异与不同类型ARC的发生无关,GSTM1不是各型ARC发病的危险因素。皮质性ARC中GSTT1拷贝数是0、1、2和>2的分别为67(51.1%)、1(0.8%)、6(4.6%)、57(43.5%)例;核性ARC中GSTT1拷贝数是0、1、2和>2的分别为33(47.1%)、0、1(1.4%)、36(51.4%)例;后囊下性ARC中GSTT1拷贝数是0、1、2和>2的分别为46(59.0%)、0、4(5.1%)、28(35.9%)例。GSTT1拷贝数为0的皮质性、后囊下性ARC组和对照组相比,差别均有统计学意义(P值分别为0.04、0.00)。GSTT1拷贝数为0的核性ARC组和对照组相比,差别无统计学意义(P>0.05)。GSTT1拷贝数>0的不同类型ARC组与对照组相比,差别均无统计学意义(P值均>0.05)。说明GSTT1完全缺失与皮质性和后囊下性ARC发病有关,是皮质性和后囊下性ARC发病的危险因素。通过与文献报道的数据相比较,本研究中国汉族人中GSTM1完全缺失的频率为63.2%,GSTT1完全缺失的频率为47.6%。汉族人GSTM1完全缺失的频率与日本人[15](51.3%)不同,GSTT1完全缺失的频率与日本人(54.0%)相接近。汉族人GSTM1、GSTT1完全缺失的频率与高加索人[20]的(53.5%和14.7%)均不同。结论GSTT1完全缺失是ARC尤其是皮质性和后囊下性ARC发病的危险因素,而GSTM1可能不是ARC发病的危险因素。亚洲人群GSTT1完全缺失的频率一致,GSTM1完全缺失的频率不同。汉族人与高加索人GSTM1、GSTT1完全缺失的频率均不同。实时荧光PCR简便、快速,是检测基因拷贝数的有效方法。

关键词：年龄相关性白内障 GSTM1 GSTT1 拷贝数变异基因

NIDD/nNOS和nNOS抑制剂L-NAME在DBA/2J小鼠青光眼发病过程中的作用

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NIDD/nNOS和nNOS抑制剂L-NAME在DBA/2J小鼠青光眼发病过程中的作用

作者：陈晨南通大学

学位级别：硕士

背景青光眼是一种严重的不可逆性致盲性眼病,其对人类的视力损害仅次于白内障。青光眼病理过程为进展性视神经变性,眼压异常升高是青光眼发病过程中的主要危险因素,但是患者即使眼压被控制在正常水平,视功能损害仍可能继续发展。视网膜... 详细信息

背景青光眼是一种严重的不可逆性致盲性眼病,其对人类的视力损害仅次于白内障。青光眼病理过程为进展性视神经变性,眼压异常升高是青光眼发病过程中的主要危险因素,但是患者即使眼压被控制在正常水平,视功能损害仍可能继续发展。视网膜视神经节细胞(RGCs)死亡是其视神经损伤的最终共同通路,RGCs的病理改变和凋亡机制在青光眼发病过程中起到了重要作用。NIDD基因是一种与nNOS分子相关的DHHC主导的包含树突状mRNA结构域的蛋白质,其主要通过与nNOS主导的PDZ结构域的相互作用上调nNOS酶的活性。nNOS酶的活性与胶质细胞活化有关。胶质细胞活化尤其是视网膜中的Muller细胞的活化可能是青光眼中RGCs凋亡的一个重要因素。目的本研究旨在根据DBA/2J小鼠中一系列眼部表型变化,建立DBA/2J小鼠青光眼临床诊断标准,并研究DBA/2J小鼠视网膜中NIDD/nNOS的表达变化及其与青光眼表型和RGCs凋亡的相关性。方法3至15月龄的清洁级DBA/2J小鼠共计100只,对其进行眼前节裂隙灯检查,眼底照相,眼压测量,杯盘比凹陷和视神经轴突计数等检查,结合月龄将DBA/2J小鼠分为正常组(normal group, Nor)、青光眼临床前期组(pre-glaucoma group, pre-G)、青光眼组(glaucoma group, G)、青光眼后期组(late glaucoma group, late-G)、青光眼终末期组(terminalglaucoma group, Ter-G)。通过定量RT-PCR和免疫印记的方法分析了NIDD/nNOS mRNA和蛋白的表达趋势,免疫组化方法定位了NIDD/nNOS在DBA/2J小鼠视网膜的空间分布,NIDD/nNOS和NIDD/Miiller细胞的共定位采用了免疫荧光的方法。最后应用TUNEL染色和免疫印迹的方法分析了一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME对DBA/2J小鼠RGCs的保护作用。结果(1)随着青光眼疾病的进展,DBA/2J小鼠眼前节逐渐发生异常,出现虹膜色素脱失,虹膜萎缩,瞳孔变形等变化,DBA/2J小鼠眼压逐渐升高,在青光眼期时达到最高,其后又逐渐下降至正常基线水平。视盘自青光眼期时开始出现病理性凹陷,而后逐渐加深,视神经萎缩逐步明显。(2) nNOS分子的mRNA和蛋白表达在小鼠青光眼期时达到高峰,NIDD分子的蛋白变化趋势与此相似,而NIDD分子的mRNA表达却在小鼠青光眼前期时达到高峰。(3)NIDD与nNOS在视网膜Muller细胞中存在着共定位。(4)腹腔内连续注射NOS抑制剂L-NAME能够阻止视网膜神经节细胞凋亡,本实验主要是通过观察Brn-3a (RGC标记物)的表达增加和NIDD的表达减少来证实此作用的。结论(1)结合临床和病理检查方法建立了DBA/2J小鼠青光眼临床诊断标准。(2)NIDD可能通过nNOS激活Miiller细胞参与了青光眼疾病进展中RGCs损伤的病理过程。(3)在体小鼠腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME能有效保护RGCs存活。(4)NIDD/nNOS可能参与了青光眼中RGCs损伤的病理过程。

关键词： NIDD nNOS 青光眼视网膜神经节细胞 DBA/2J

前房灌注对白内障术中前房稳定性的影响及临床意义

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前房灌注对白内障术中前房稳定性的影响及临床意义

作者：耿文静南通大学

学位级别：硕士

目的研究前房灌注对白内障超声乳化术中前房稳定性的影响及术中前房不稳可能导致的眼部并发症。方法前瞻性研究。纳入2020年05月至2021年05月在南通大学附属医院眼科中心行白内障超声乳化吸除联合人工晶状体植入术的年龄相关性白内障患... 详细信息

目的研究前房灌注对白内障超声乳化术中前房稳定性的影响及术中前房不稳可能导致的眼部并发症。方法前瞻性研究。纳入2020年05月至2021年05月在南通大学附属医院眼科中心行白内障超声乳化吸除联合人工晶状体植入术的年龄相关性白内障患者242例(280眼)。根据术中是否使用前房维持器(anterior chamber maintainer,ACM)灌注分为灌注组和非灌注组。通过显微集成术中光学相干断层扫描(intraoperative optical coherence tomography,i OCT)观察前房稳定性。术后一天,在裂隙灯显微镜下观察房水闪辉和前房细胞。术前、术后1周、1月、3月检查入组患者矫正远视力(corrected distance visual acuity,CDVA)、眼内压(intraocular pressure,IOP)、内皮细胞密度(endothelial cell density,ECD)、中央角膜厚度(central corneal thickness,CCT)、黄斑中心凹厚度(central foveal thickness,CFT)以及玻璃体后脱离(posterior vitreous detachment,PVD)情况。两组患者PVD分级比较采用卡方检验,房水闪辉、前房细胞等级比较采用Mann-Whitney U检验。手术显微镜和其内置i OCT观察结果的一致性评价采用Kappa检验。结果本研究中灌注组和非灌注组分别有121眼(86.4%)和127眼(90.7%)完成了术后3个月随访。手术显微镜和其内置i OCT对于术中前房稳定性的评估具有较好的一致性。当超声乳化针尖和注/吸(irrigation/aspiration,I/A)针尖撤出前房后,两组前房不稳定的发生率具有显著差异(P0.05)。术后1月,灌注组和非灌注组分别有8眼(16.3%)和22眼(40.7%)发生了PVD(P=0.006),术后3月,两组分别有14眼(28.6%)和37眼(68.5%)发生了PVD(P<0.001)。术后1月和3月,非灌注组的CFT显著升高(P=0.018,P<0.010)。结论手术显微镜和其内置i OCT在评估白内障超声乳化术中前房稳定性方面具有较好地一致性。当超声乳化针尖和I/A针尖从前房中撤出时,前房极易不稳(变浅或消失)。术中前房不稳可能会增加术后炎症反应,导致PVD和黄斑水肿等并发症。自制ACM能有效降低术中前房不稳及上述并发症的发生率。

关键词：白内障超声乳化吸除术前房稳定性前房维持器并发症

GSTM3基因的表达及表观遗传学改变与年龄相关性白内障的关系

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GSTM3基因的表达及表观遗传学改变与年龄相关性白内障的关系

作者：李渤南通大学

学位级别：硕士

目的探索DNA氧化损伤清除基因谷胱甘肽S-转移酶M3(glutathione S-transferase Mu 3,GSTM3)在年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)患者晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)和晶状体皮质中的表达及甲基化状态与组蛋白修饰的改变,并分析其表达变化与表观遗传修饰的关系。方法采用临床病例对照研究和细胞生物学研究。病例组为2014年9月-2015年9月在南通大学附属医院眼科诊断为ARC,LOCSⅢ分级晶状体混浊程度≥C4,并接受白内障手术的患者,共120例120眼;对照组为本院眼科诊断为玻璃体视网膜疾病(如特发性黄斑前膜、特发性黄斑裂孔等),且同时在玻璃体切除手术中行透明晶状体摘除者,以及来源于南通市红十字眼库新鲜眼球中的透明晶状体,年龄、性别匹配,共40例40眼。于手术中取得晶状体前囊膜及皮质,提取DNA、RNA和蛋白质。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)分析GSTM3 m RNA和蛋白质表达水平,甲基化特异性PCR法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)及焦磷酸测序法(pyrosequencing)检测GSTM3 DNA甲基化状态。用不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)处理人晶状体上皮细胞株SRA01/04和HLEB3,构建氧化损伤模型,检测SRA01/04和HLEB3中GSTM3的表达量变化及甲基化状态,染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)分析GSTM3组蛋白甲基化和乙酰化修饰状态,对HLEB3分别进行5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)去甲基化处理和曲古霉素(trichostatin A,TSA)抑制组蛋白去乙酰化酶处理后检测GSTM3蛋白质表达量变化。凝胶电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测GSTM3启动子区与转录因子的结合能力。SPSS17.0统计软件分析数据。结果晶状体组织q RT-PCR及Western Blot结果表明,与对照组相比,三种类型ARC患者晶状体LECs及皮质中GSTM3表达量均下降(m RNA:F=308.90,P<0.01;F=198.42,P<0.01;蛋白质:F=219.74,P<0.01;F=195.77,P<0.01)。BSP分析及焦磷酸测序表明在ARC患者晶状体LECs及皮质中GSTM3启动子区Cp G岛呈现高甲基化(晶状体LECs对照组:2.00±1.36,ARC-C:20.11±1.23,ARC-N:25.17±1.18,ARC-P:17.94±1.51,F=1138.44,P<0.01;晶状体皮质对照组:4.72±1.49,ARC-C:19.80±1.26,ARC-N:26.75±1.02,ARC-P:20.03±1.36,F=1035.63,P<0.01)。细胞生物学实验结果表明:与SRA01/04相比,HLEB3中GSTM3表达量下降(t=14.48,P<0.01;t=16.32,P<0.01),相应地,HLEB3中GSTM3启动子区Cp G岛呈现高甲基化(SRA01/04:1.25±0.67,HLEB3:20.58±1.07,t=26.51,P<0.01)。与SRA01/04相比,HLEB3的H3K9三甲基化增高而H3乙酰化下降(t=19.21,P<0.01;t=6.16,P<0.01)。对HLEB3进行5-Aza-d C或TSA处理后,GSTM3蛋白质表达量升高(t=7.24,P<0.01;t=10.94,P<0.01)。EMSA提示GSTM3启动子区高甲基化阻碍转录因子结合。在人晶状体上皮细胞株氧化损伤模型中GSTM3表达水平降低(m RNA:F=54.43,P<0.01;F=66.82,P<0.01;蛋白质:F=7.44,P<0.01;F=30.62,P<0.01),GSTM3启动子区Cp G岛甲基化水平升高(F=989.04,P<0.01;F=595.94,P<0.01)。结论GSTM3表达的下降可能与ARC的发生发展相关。GSTM3启动子区Cp G岛的DNA甲基化及组蛋白修饰可能调节其表达。结果提示调节表观遗传学的变化可作为ARC防治的新靶点。

关键词：谷胱甘肽S-转移酶M3 年龄相关性白内障表观遗传学氧化损伤