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肾损伤分子-1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及雷帕霉素对其表达的影响

肾损伤分子-1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及雷帕霉素对其...

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作者：陈兰河北医科大学

学位级别：硕士

目的：肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）是所有慢性肾脏病的共同结果，同时也是造成肾功能不可逆性损害的原因之一，延缓甚至逆转肾间质纤维化对于延缓慢性肾脏病的进展、延长患者寿命意义重大。肾损伤分子（kidney in... 详细信息

目的：肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）是所有慢性肾脏病的共同结果，同时也是造成肾功能不可逆性损害的原因之一，延缓甚至逆转肾间质纤维化对于延缓慢性肾脏病的进展、延长患者寿命意义重大。肾损伤分子（kidney injury molecule1, KIM-1）是一种新型的Ⅰ型跨膜糖蛋白，在正常大鼠肾组织仅有极微量的表达，而在多种急性肾损伤模型中，如缺血再灌注损伤、中毒性肾损伤、造影剂肾病等中表达明显增加，且随肾脏结构和功能的修复其表达消退，因其在急性肾损伤诊断中灵敏性和特异性较高，目前成为一种较好的急性肾损伤的生物学标记物。同时也有研究发现KIM-1在慢性肾脏病（chronic kidney disease, CKD）时也有表达，已在蛋白超负荷肾病模型、阿霉素肾病、血管紧张素Ⅱ诱导纯合子Ren2大鼠肾损伤及多囊肾模型中得到证实，然而在CKD中KIM-1表达的具体分子机制及病理生理学意义尚不清楚。国内有学者分别观察了KIM-1和缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor1alpha, HIF-1α）在造影剂肾病大鼠模型和人近端肾小管上皮细胞（HK2）缺氧复氧过程中的表达情况及相互关系，结果均提示二者之间可能存在一定联系，KIM-1可能作为HIF-1α的下游靶点参与肾脏损伤和修复过程。本课题拟通过建立单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction, UUO）大鼠肾间质纤维化模型，观察肾组织的病理改变，结合免疫组织化学、PCR等检测手段，观察KIM-1、HIF-1α及α-SMA在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达变化以及应用HIF-1α抑制剂雷帕霉素后对其表达的影响，并进一步探讨KIM-1与HIF-1α、α-SMA的相互关系以及雷帕霉素对UUO大鼠的肾脏保护作用，为临床防治慢性肾脏病的进展提供实验性理论依据。方法：健康清洁级雄性SD大鼠72只，体重200±20g，随机分为假手术组（Sham组），模型组（UUO组），治疗组（Rap组），每组24只。UUO组和Rap组行左侧输尿管结扎并剪断，建立UUO模型;Sham组仅游离左侧输尿管，但不结扎和剪断。各组于手术前1天开始给药，根据体重调整药量，Rap组以雷帕霉素2mg/kg/d灌胃，Sham组与UUO组以等容积生理盐水灌胃，直至术后第14天。各组分别于术后1、4、7、14天随机处死6只大鼠，取左侧肾组织，一部分置于4%多聚甲醛中，用于HE染色观察病理改变，免疫组化染色法检测KIM-1、HIF-1α及α-SMA蛋白的表达，另一部分置于液氮中快速冷冻，随后转至-80℃冰箱中保存，用于RT-PCR法检测各因子的mRNA水平，然后分别采用图像分析系统和凝胶成像系统进行半定量分析。应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，P<0.05为有统计学意义。结果：1实验大鼠肾组织形态学变化Sham组大鼠两侧肾脏大小相当，外观无明显差别;UUO组和Rap组梗阻侧肾脏体积大于对侧，且随梗阻时间的延长体积逐渐增大，可见肾实质较对侧明显变薄，颜色变浅，肾盂肾盏扩张变形，肾内积水，尤以术后14天最为显著。光镜下观察发现Sham组肾小球和肾小管结构均未见明显异常，UUO组和Rap组术后1天肾组织病理改变不明显，从术后4天病变较明显，开始出现肾小管扩张，肾小管上皮细胞刷状缘脱落，炎症细胞浸润，肾间质水肿，且随着梗阻时间延长，病变逐渐加重。与UUO组相比，Rap组大鼠肾组织病理学变化较轻。2免疫组织化学结果KIM-1在Sham组各个时间点均无明显表达，在UUO组于术后1天表达即开始增加，主要表达于近端肾小管上皮细胞，且随着时间推移表达明显升高，各时间点比较差异有统计学意义（P<0.05）;与同期UUO组相比，Rap组KIM-1表达均降低（P<0.05）。HIF-1α在Sham组肾小管上皮细胞偶见表达，肾小球内无阳性表达，各时间点比较差异无统计学意义（P<0.05）;与同期Sham组相比，UUO组术后1天表达开始增加，且随着时间推移，表达呈上升趋势，14天时表达最强，各时间点比较差异有统计学意义（P<0.05）;与同期UUO组相比，Rap组HIF-1α表达均受到明显抑制（P<0.05）。α-SMA在Sham组肾间质内未见明显表达，仅在肾小动脉高表达，UUO组术后1天表达开始增加，且随着时间推移，表达明显增高，除血管壁平滑肌细胞表达外，肾间质和部分肾小管上皮细胞周围均有表达，各时间点比较差异有统计学意义（P<0.05）;与同期UUO组相比，Rap组α-SMA表达均降低（P<0.05）。3RT-PCR结果与同期Sham组相比，术后1、4、7、14天UUO组大鼠肾组

关键词：肾间质纤维化肾损伤分子-1 缺氧诱导因子-1α 雷帕霉素单侧输尿管梗阻

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肝细胞生长因子对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化调节作用的研究

肝细胞生长因子对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化调节作用的研究

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作者：叶凡河北医科大学

学位级别：硕士

目的:肾间质纤维化是导致肾功能衰竭的主要决定因素。肾间质纤维化的发生发展是一个复杂的过程,涉及多种细胞因子及细胞内信号转导通路。肾小管间质病变及其严重程度往往决定着肾脏疾病的预后。因此,探讨肾小管间质纤维化的发病机制及... 详细信息

目的:肾间质纤维化是导致肾功能衰竭的主要决定因素。肾间质纤维化的发生发展是一个复杂的过程,涉及多种细胞因子及细胞内信号转导通路。肾小管间质病变及其严重程度往往决定着肾脏疾病的预后。因此,探讨肾小管间质纤维化的发病机制及防治措施具有重要的临床意义。转化生长因子β1(Transforming growth factor TGF-β1)在多种纤维化疾病中均发挥强效的致纤维化作用。TGF-β1通过促进足细胞、内皮细胞、小管上皮细胞及间质成纤维细胞产生大量的基质成份,以及肾小管上皮细胞转分化,导致肾小球硬化及小管间质纤维化,最终发展成为终末期肾衰竭。活化素受体样激酶(Activin Receptor-like Kinase)家族,属于丝氨酸/苏氨酸激酶,特别是ALK5对于活化的TGF-β1发挥其生物学活性至关重要。提示ALK5与慢性肾间质纤维化的发生发展密切相关。ALK5受体能够活化其下游的Smad及P38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase P38 MAPK)信号通路,将TGF-β1信号传导至细胞内,促进细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)沉积。肝细胞生长素(Hepatocytegrowth factor HGF)作为一种多效性因子,对于肾损伤后肾小管的修复与再生至关重要。HGF通过抑制TGF-β1的表达;抑制成纤维细胞活化及细胞外基质的过度生成;加速细胞外基质降解;阻断肾小管上皮—肌成纤维细胞转分化;抑制细胞凋亡;促进细胞增殖等方面,发挥肾脏保护作用。注射用促肝细胞生长素(Hepatocyte Growth-promoting Factors forⅠnjection)是从动物肝脏中提取的小分子多肽类活性物质,目前主要应用于重症肝炎和早期肝硬化的临床治疗。迄今为止,国内外尚未见促肝细胞生长素对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral occlusion,UUO)大鼠模型肾组织HGF、TGF-β1、ALK5表达影响的研究。本实验以UUO大鼠模型为研究对象,观察肾脏组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测HGF、TGF-β1、ALK5的表达情况,同时应用促肝细胞生长素进行干预,探讨肾间质纤维化中HGF、TGF-β1、ALK5的表达变化及促肝细胞生长素对其影响,为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。方法:选择清洁级健康雄性Wistar大鼠54只,体重(200±10)克,随机分为三组:假手术组(正常对照组,A组),单侧输尿管结扎组(UUO组,B组),促肝细胞生长素干预组(C组),每组各18只。每组又因于术后第3、7、14天分批处死而分为N3、N7、N14组,每组各6只。将B、C组大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后,行左侧耻骨上切口,沿左肾下极寻找到左侧输尿管,在中上1/3处用4号线上下结扎两处,然后从中剪断输尿管,以防逆行性感染。A组除不结扎和剪断输尿管外,其他手术过程同前。C组大鼠以促肝细胞生长素0.5mg/(Kg·d)腹腔注射,1次/日;A和B组大鼠用等容积生理盐水腹腔注射,1次/日,三组均于术前一天开始注射至术后第3天、第7天和第14天,实验期间自由进食水。术后第3天、7天、14天各组随机选取6只大鼠分三批颈椎离断处死,后立即取出大鼠左肾组织,分别用苏木素伊红(HE)、Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,应用图像分析系统进行半定量分析。采用免疫组织化学方法测定肾问质HGF、TGF-β1、ALK5的表达,结果应用图像分析系统进行半定量分析。实验结果均以均数±标准差((?)±s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用t检验,应用SPSS11.5统计分析软件对实验数据进行统计学处理,P＜0.05为有统计学意义。结果:光镜下观察,HE及Masson染色A组未见异常。HE染色可见B组及C组各时相点大鼠肾脏肾小球均无明显变化。B组术后3天肾小管扩张不明显,可见肾间质炎症细胞局灶浸润,肾间质宽度增加;第7天肾小管扩张明显,上皮细胞变性、水肿、甚至坏死,肾间质大量炎症细胞浸润,间质宽度明显增加,偶见萎缩肾小管;第14天上述病变加重,可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,小管基底膜不同程度断裂,皮质及外髓萎缩的肾小管较多,间质中大量淋巴单核细胞浸润,纤维化较明显。Masson染色可见B组术后3天肾小管扩张,肾间质宽度增加,胶原纤维增加,染色加深;此后,病变逐渐加重。C组与B组平行相比肾小管间质病变程度明显减轻,肾间质相对面积明显减少(P＜0.05)。三组间比较均有统计学差异(P＜0.05)。免疫组织化学结果显示:TGF-β1在A组在肾小管间质、肾小球微量表达。在B组各时相点TGF-β1的表达随时间呈进行性升高,且随梗阻时间

关键词：肾间质纤维化肝细胞生长因子活化素受体样激酶5 转化生长因子-β1 促肝细胞生长素

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NGAL在单侧输尿管结扎大鼠肾脏的表达及促肝细胞生长素对其影响

NGAL在单侧输尿管结扎大鼠肾脏的表达及促肝细胞生长素对其影响

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作者：张珊珊河北医科大学

学位级别：硕士

目的：肾间质纤维化在慢性肾功能衰竭的发生发展过程中起着重要作用。众多错综复杂的细胞因子及信号转导通路参与了肾间质纤维化发生和发展的过程，探讨其具体机制可为防治肾间质纤维化提供理论依据。已有研究发现肝细胞生长因子（Hepat... 详细信息

目的：肾间质纤维化在慢性肾功能衰竭的发生发展过程中起着重要作用。众多错综复杂的细胞因子及信号转导通路参与了肾间质纤维化发生和发展的过程，探讨其具体机制可为防治肾间质纤维化提供理论依据。已有研究发现肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）是内源性的逆转或延缓肾间质纤维化进程的因子，它可能通过多种途径发挥其生物活性，既往的研究多集中于其对转化生长因子（Transforming growth factor-β，TGF-β）的表达和信号转导的干预方面。最近研究发现肾小管上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）在肾间质纤维化发生发展中起到关键作用，而HGF可能阻断EMT，使生成间质成分的肌成纤维细胞来源减少，从而减轻甚至逆转纤维化。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）最初发现是急性肾损伤的标志物，近来越来越多的文献报道可能参与了肾间质纤维化过程，而且参与肾小管上皮细胞EMT，不但可以早期预测肾间质纤维化，同时能够维持肾小管上皮细胞的表型，阻止其向间质细胞转化。应用“微点阵分析（microarray）”发现HGF可诱导肾髓质集合管细胞NGAL的表达。而在动物实验中，HGF是否可以通过诱导肾脏NGAL的表达，实现对EMT，或者纤维化其他途径的干预，目前未见文献报道。本实验通过检测NGAL在单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠肾脏中的表达;并应用外源性HGF给予干预，研究HGF、NGAL与E-钙粘蛋白（E-cadherin，E-cad）之间的关系，探讨HGF及NGAL与“肾脏损伤-修复-纤维化”的相关机制，从而为治疗肾脏纤维化提供新的思路。方法：选择清洁级健康雄性SD大鼠72只，体重200±20g，随机将其分为3组，每组24只：（1）.假手术组（Sham组）。游离左侧输尿管但不结扎，每日腹腔注射生理盐水;（2）.输尿管结扎组（UUO组）。行左侧输尿管结扎，每日腹腔注射生理盐水;（3）.促肝细胞生长素干预组（pHGF组），行左侧输尿管结扎，每日腹腔注射促肝细胞生长素pHGF0.5mg/（Kg·d）。三组均于术前1天开始给药，其中Sham组和UUO组给予等容积生理盐水，直至术后第14天。实验期间自由进食水。术后第1、4、7、14天各组随机选取6只大鼠，获取左侧肾脏，制作切片。分别用苏木素伊红（HE）和Masson染色，在光镜下观察大鼠肾组织病理变化;采用免疫组织化学方法检测肾脏NGAL、E-cad及HGF的表达，结果应用图像分析系统IPP（Image-Pro Plus）进行半定量分析。实验数据用均数±标准差（x±S）表示，各组间比较采用单因素方差分析（满足正态性和方差齐性），两组间比较采用两独立样本t检验，不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验，应用SPSS17.0统计分析软件处理实验数据，以P＜0.05为具有统计学意义。结果：光镜下观察各组肾脏组织HE和Masson染色,显示随着输尿管梗阻时间的延长，肾间质占小管间质的相对面积及肾间质胶原纤维的含量逐渐增加，提示肾间质纤维化程度逐渐加重;和UUO组相比，对应的pHGF组肾脏组织病理学变化较轻。结合IPP图像分析系统分析免疫组织化学染色结果显示：NGAL主要表达于近端肾小管胞浆中;NGAL在Sham组各时期均未见阳性表达;UUO组和pHGF组中NGAL于术后第1天即均有表达，在UUO组第4、7天逐渐升高，至第14天表达下降;NGAL在pHGF组第4天表达最高，第7、14天逐渐下降;第14天NGAL在UUO组和pHGF组仅有极少量表达;第4、7天NGAL在pHGF组高于UUO组同期的表达。E-cad主要表达于远端肾小管上皮细胞的细胞膜上;E-cad在Sham组各时期均有明显表达，在第4、7、14天三组之间的表达水平比较为：Sham组＞pHGF组＞UUO组（P＜0.05）;随着输尿管梗阻时间延长UUO组和pHGF组的表达逐渐降低。HGF主要表达于肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞，在Sham组各时期表达微弱，在UUO组和pHGF组的表达随着输尿管梗阻时间延长逐渐升高，同期三组之间表达水平比较为：pHGF组＞UUO组＞Sham组（P＜0.05）。NGAL和HGF的IOD值之间存在直线相关性（r=0.726，P＜0.05）。结论：单侧输尿管结扎大鼠肾脏早期HGF和NGAL表达升高;pHGF能够上调肾脏HGF的水平，维持E-cad的表达及促进NGAL的表达，减轻单侧输尿管结扎大鼠肾脏间质纤维化的程度;NGAL积极参与了HGF对肾脏损伤的修复。

关键词：肾间质纤维化(RIF) 肝细胞生长因子(HGF) 促肝细胞生长素(pHGF) 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL) 上皮间质转化(EMT)

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白三烯受体拮抗剂对UUO大鼠JAK2、STAT3、IL-6及Ⅲ型胶原表达的影响

白三烯受体拮抗剂对UUO大鼠JAK2、STAT3、IL-6及Ⅲ型胶原表达的影...

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作者：曹宇河北医科大学

学位级别：硕士

目的:肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种病因所致慢性肾脏病(chronic kidney diseases,CKD)发生发展的共同病理表现,是发展至终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的关键过程。肾间质纤维化的病理过程包括肾... 详细信息

目的:肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种病因所致慢性肾脏病(chronic kidney diseases,CKD)发生发展的共同病理表现,是发展至终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的关键过程。肾间质纤维化的病理过程包括肾小管间质纤维化和晚期的肾小球硬化,表现为炎症细胞浸润、细胞因子激活,肾小管上皮间充质转分化,成纤维细胞增殖,细胞外基质沉积,细胞凋亡,最终导致终末期肾衰竭。随着对CKD研究的不断发展,发现许多细胞因子和生长因子与CKD的病理生理过程有关,如转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1),基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP),瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)等,不同程度的参与了CKD的发病过程。而JAK/STAT(The Janus kinase family/signal transducers and activators of transcription)通路是一条由多种细胞因子和生长因子介导的信号转导通路,对疾病的发生发展有重要的调控作用,其激活能促进各种疾病的进展,如淋巴瘤、白血病及各种炎症性疾病。已有研究表明,JAK/STAT信号通路与糖尿病肾病、梗阻性肾病、多囊肾等肾脏疾病的病理生理过程有着密切的联系。已证明,JAK/STAT信号通路与炎症的进展关系密切,既可以调控自身下游炎症相关基因的表达,又可通过参与不同的信号通路发挥其生物学功能,如转化生长因子β(TGF-β)和核因子κB(NF-κB)等通路。同时,巨噬细胞通过JAK/STAT通路的信号转导作用可诱导多种炎症因子的激活。因此JAK/STAT信号通路对机体炎症反应过程的调节作用尤为关键。白三烯(Leukotrienes,LTs)是一类拥有高度生物活性的炎症介质,在体内由炎性细胞产生,与其相关的受体也是重要的炎症介质,大量存在于炎性细胞颗粒蛋白中。目前研究发现,多种病理因素刺激可诱导LTs在肾脏中的表达增强,从而在肾损害中发挥重要作用。因此,抑制LTs的过度表达可能对肾脏病的治疗起到有益的作用。孟鲁司特(montelukast,MON,商品名:顺尔宁)是一种高选择性半胱氨酰白三烯(Cys-LT)受体拮抗剂,在临床作为预防和治疗哮喘的一种非激素类抗炎药物被推广应用。本实验的目的是观察白三烯受体拮抗剂是否可延缓单侧输尿管梗阻(unilateralureteralocclusion,uuo)大鼠肾间质纤维化的进展,及其对uuo大鼠jak2,stat3,il-6及Ⅲ型胶原蛋白表达的影响,探究其是否通过jak/stat信号通路发挥抗肾间质纤维化作用,为肾间质纤维化的临床治疗提供新的理论基础及治疗靶点。方法:采用单侧输尿管梗阻模型,54只清洁级sd大鼠(雄性210±20g),随机分为a、b、c三组,假手术组(a组,sham组)18只,模型组(单侧输尿管结扎组,b组,uuo组)18只,治疗组(孟鲁司特干预组,c组,mon组)18只,适应性喂养7天,按分组不同建立单侧输尿管梗阻模型。各组大鼠均于术前24小时开始给药,治疗组每天给予孟鲁司特10mg/kg/d灌胃,同时sham组和uuo组给以等容生理盐水灌胃。自由进食饮水,分别于术后3、7、14天,每组各取6只大鼠,取左肾组织后处死,用0.9%的生理盐水反复冲洗,取中间1/4组织块于多聚甲醛中固定,用于病理切片,进行he、masson染色及免疫组织化学染色,其余肾组织放于液氮中迅速冷冻,以防止蛋白降解,并保存于-80℃冰箱中,行westernblot实验。使用spss20.0统计分析软件对所得的实验数据进行统计学分析,以均数±标准差(x±s)表示统计结果,使用单因素方差分析对数据进行分析,p<0.05表示结果有统计学意义。结果:1肾脏组织病理学染色1.1光镜下he染色:a组:第3、7、14天,肾小球、肾小管及间质未见明显异常。b组:术后3天,肾小管发生轻度扩张,间质中可见少量炎症细胞浸润;术后7天肾小管管腔扩张程度和间质炎症细胞浸润程度加重,肾小管上皮细胞脱落,空泡样变性;术后14天可观察到大量肾小管萎缩,肾小管基底膜增厚,皱缩,失去正常结构。c组:与同时期b组相比,病变程度较轻,但仍明显重于a组。1.2光镜下masson染色:a组:第3、7、14天肾小球、肾小管及间质未见异常。b组:肾小管广泛扩张,肾间质较前增宽,可见胶原纤维沉积,随梗阻时间的延长,胶原纤维逐渐向肾小管周围延伸,交织成网状“结构”。c组:与同期b组相比,肾间质胶原纤维沉积程度减轻,但仍明显重于a组。2肾组织免疫组织化学染色2.1p-jak2

关键词：肾间质纤维化白三烯受体拮抗体孟鲁司特 P-JAK2 P-STAT3 IL-6 Ⅲ型胶原蛋白

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昆明烟区生态因子与烤烟质量特征分析

昆明烟区生态因子与烤烟质量特征分析

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作者：田斌湖南农业大学

学位级别：硕士

以昆明烟区9个植烟县的土壤数据、烟区的气象数据和烟叶数据为基础,以昆明烟区烤烟作为研究对象对种植烤烟的气候、土壤及烟叶的质量进行系统的分析研究。运用数学统计方法及典型相关分析方法对烟区的气象环境、植烟土壤肥力、烟叶质量... 详细信息

以昆明烟区9个植烟县的土壤数据、烟区的气象数据和烟叶数据为基础,以昆明烟区烤烟作为研究对象对种植烤烟的气候、土壤及烟叶的质量进行系统的分析研究。运用数学统计方法及典型相关分析方法对烟区的气象环境、植烟土壤肥力、烟叶质量分县域分类型的作全面的系统分析。主要结果如下： 1、气候、海拔因子与昆明烟区烤烟的化学成分关系紧密。随着七、八月的温度升高、日照时数增加以及降水的减少,烤烟中、上部叶氯的含量、中部叶硫及上部叶石油醚提取物的含量表现出增加的趋势;随着五月降水增加,中部叶烟碱、上部叶氯及石油醚提取物的含量表现出增加的趋势;随着海拔升高,烤烟中部的总糖、还原糖及镁的含量表现出增加的趋势。 2、气候、海拔因子对烤烟的感官评吸质量有着一定的影响。五月的日照时数与烤烟中、上部叶的香气质以及上部叶的刺激性、余味得分呈显著正相关;五月的降水与烤烟中、上部叶的香气质、刺激性得分以及上部叶的杂气、余味得分呈显著负相关;海拔高度与烤烟上部叶的香气质得分呈极显著正相关,而与杂气及刺激性得分呈显著正相关。 3、土壤理化性质与昆明烟区烤烟的化学成分关系紧密。随着土壤中锰、全氮的含量增加、铁的含量降低,烤烟中、上部叶的总糖、还原糖含量表现出增加的趋势;随土壤的pH值、交换性钙的含量增加及全钾、铁的含量降低,烤烟中、上部叶中的氯含量及上部叶中的总糖、还原糖、淀粉的含量表现出增加的趋势;随土壤中氯的含量增加及铁的含量降低,烤烟中、上部叶中钙的含量表现出增加的趋势;随土壤中交换性钙的含量增加及硼的含量降低,中部叶钙、硫的含量表现出增加的趋势。 4、所有土壤养分指标中,土壤硫的含量的变化对烤烟中部叶的感官质量评吸得分影响最大,与刺激性得分呈显著正相关,与杂气得分呈极显著正相关。土壤中的各物质含量与烤烟上部叶的感官质量评吸得分相关性不显著。

关键词：烤烟生态因子烟叶品质昆明烟区相关性分析

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经皮腔内血管成形术与动静脉内瘘重建术治疗动静脉内瘘成熟不良的疗效分析

经皮腔内血管成形术与动静脉内瘘重建术治疗动静脉内瘘成熟不良的...

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作者：于涵河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨经皮腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplast y,PTA)和动静脉内瘘重建术治疗动静脉内瘘(Arteriovenous fistula,AVF)成熟不良的疗效,比较两种术式的远期通畅率及术后并发症的差异。方法:回顾性分析2020年5月至2... 详细信息

目的:探讨经皮腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplast y,PTA)和动静脉内瘘重建术治疗动静脉内瘘(Arteriovenous fistula,AVF)成熟不良的疗效,比较两种术式的远期通畅率及术后并发症的差异。方法:回顾性分析2020年5月至2022年1月因动静脉内瘘成熟不良就诊于我院,并接受经PTA术或AVF重建术的44例患者的住院病历、门诊复查记录及血液透析记录单。根据患者所接受手术方式的不同分为两组,其中PTA组25例,AVF重建组19例。临床指标主要包括两组患者的术后初级和次级通畅率、成熟时间、肱动脉收缩期峰值流速(PSV)、初次透析时最大泵控血流量、术后并发症的发生率等。结果:44例患者的技术及临床成功率为100%。PTA组患者,在第3、6、9个月的初级通畅率分别为84.0%、68.0%、60.0%,次级通畅率分别为92.0%、84.0%、80.0%。AVF重建组患者,在第3、6、9个月初级通畅率分别为89.5%、73.7%、68.4%,次级通畅率分别为100.0%、94.7%、94.7%,两组在通畅率方面没有显著差异(p>0.05)。对于内瘘成熟的患者,PTA组术后内瘘成熟时间平均为19.36±13.94天,AVF重建组术后内瘘成熟时间平均为58.63±18.95天(p0.05)。PTA组术后初次透析时的最大泵控血流量为232.60±16.72ml/min,明显高于重建组的197.11±10.45ml/min(p0.05)。结论:PTA手术治疗AVF成熟不良的疗效与重建术相似,但PTA能显著缩短AVF成熟时间,增加血液透析时的最大泵控血流量。

关键词：经皮腔内血管成形术动静脉内瘘重建术成熟不良血管通路开放血液透析

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细胞增殖及凋亡在自体动静脉内瘘狭窄发生机制中的研究

细胞增殖及凋亡在自体动静脉内瘘狭窄发生机制中的研究

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作者：田咏竹河北医科大学

学位级别：硕士

目的:血液透析是终末期肾脏病患者不可或缺的治疗手段。良好功能的血管通路是充分透析的重要保障。其中自体动静脉内瘘(Autogenous Arteriovenous Fistula,AVF)是终末期肾脏病患者血液透析的首选血管通路。但AVF1年通畅率通常仅在60-65... 详细信息

目的:血液透析是终末期肾脏病患者不可或缺的治疗手段。良好功能的血管通路是充分透析的重要保障。其中自体动静脉内瘘(Autogenous Arteriovenous Fistula,AVF)是终末期肾脏病患者血液透析的首选血管通路。但AVF1年通畅率通常仅在60-65%的范围内。已知狭窄是AVF最常见的并发症,有研究发现AVF并发症中,狭窄的发生率高达90%以上,而其中近吻合口狭窄的发生率最高,达71%。AVF狭窄主要是由内膜增生所致。内膜增生的机制方面,目前普遍接受的理论是血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs)增生、迁移,炎症细胞浸润,外膜和内膜中大量的细胞外基质沉积和新生血管生成。Yukihiro Hayakawa等人的研究表明在AVF桡动脉内膜增生中存在细胞增殖与细胞凋亡失衡,而关于AVF静脉段内膜增生中细胞凋亡的研究却很少。本研究的目的是通过检测自体动静脉内瘘静脉段狭窄部分血管壁细胞增殖及凋亡相关的因子PCNA、Bcl-2、Bax的表达,进一步探讨细胞增殖及细胞凋亡在AVF狭窄发生机制中的作用,为AVF狭窄的防治提供理论证据。方法:收集河北医科大学第三医院2017年11月至2018年11月终末期肾脏病患者行AVF成形术及重建术术中废弃静脉血管组织:1)留取行AVF重建术患者狭窄及邻近狭窄段的非狭窄血管组织分别设为实验组A(n=10)及实验组B(n=10);2)留取首次行AVF成形术术中需结扎静脉远心端血管组织设为对照组(n=10)。用苏木素-伊红染色(HE)方法观察血管组织形态学变化,免疫组织化学染色方法检测各组血管壁PCNA、Bcl-2、Bax的表达。所得实验数据采用SPSS 21.0统计软件进行分析,结果用均数±标准差(x±s)表示,P0.05)。HE染色:光镜下观察实验组A及实验组B内膜及中膜可见不同程度增厚,内膜增厚程度较中膜显著,实验组A内膜增厚较实验组B明显,且实验组A内膜增厚不均匀,部分凸向管腔,管腔变窄;实验组B内膜增厚程度相对较小,未见明显凸出管腔,管腔不窄。对照组内膜无明显增厚。免疫组织化学染色:应用Image profession plus 6.0图像分析软件对图像进行光密度分析。PCNA在实验组A呈强阳性表达(58.37±20.76),与实验组B(32.78±8.65)及对照组(10.94±2.30)相比,差异具有显著性意义(P均0.05)。Bax在对照组呈弱阳性表达(10.06±2.20),实验组与对照组相比,差异均具有显著性意义(P均<0.01)。Bax/bcl-2比值试验组A(0.71±0.21)与试验组B(1.09±0.36)相比,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:AVF狭窄是AVF成熟后失功的主要原因,与血管内膜增生相关。细胞增殖与细胞凋亡均参与内膜增生的发生。AVF建立后细胞增殖与凋亡均增加,内膜增厚,血管良性重塑,内瘘成熟可用于血液透析。当细胞增殖进一步增加,而细胞凋亡相对减弱,内膜过度增厚,血管恶性重塑,进而导致内瘘狭窄。

关键词：自体动静脉内瘘狭窄内膜增生细胞增殖细胞凋亡

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舒洛地特对膜性肾病大鼠肾脏中podocin、CD2AP、nephrin表达的影响

舒洛地特对膜性肾病大鼠肾脏中podocin、CD2AP、nephrin表达的影响

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作者：吝娜河北医科大学

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目的：膜性肾病(membranons nephropathy，MN)是成人性肾病综合征的常见病因,其病理特点为局限于肾小球上皮下免疫复合物沉积。临床表现为大量蛋白尿。本研究通过注射阳离子化牛血清白蛋白的方法，建立SD大鼠膜性肾病模型，并应用舒洛... 详细信息

目的：膜性肾病(membranons nephropathy，MN)是成人性肾病综合征的常见病因,其病理特点为局限于肾小球上皮下免疫复合物沉积。临床表现为大量蛋白尿。本研究通过注射阳离子化牛血清白蛋白的方法，建立SD大鼠膜性肾病模型，并应用舒洛地特进行干预，观察大鼠24小时尿蛋白定量以及膜性肾病肾小球podocin、CD2AP、nephrin表达的变化，从而探讨舒洛地特对膜性肾病干预的新靶点，为人类防治膜性肾病提供新的理论依据。方法：选择8周龄清洁级健康雄性SD大鼠40只，体重160±20g，普通饲料适应性饲养1周后，测24小时尿蛋白均为正常，采用随机法将其分为4组，正常对照组、模型组、高剂量舒洛地特组、低剂量舒洛地特组，每组10只。除正常对照组外，其余组应用自备阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）预免疫1周后，隔日尾静脉注射C-BSA复制膜性肾病大鼠模型。正常对照组尾静脉注射等体积生理盐水，连续4周后代谢笼中留取各组大鼠24小时尿液，检测24小时尿蛋白定量。造模成功后高剂量舒洛地特组给予舒洛地特20mg/kg灌胃，低剂量舒洛地特组给予舒洛地特10mg/kg灌胃。模型组和正常对照组灌服等体积生理盐水，各组大鼠自由进食、饮水。连续给药4周后，再次留取各组大鼠的24小时尿液，检测24小时尿蛋白定量，随后将大鼠处死，留取肾组织，应用光镜、电镜观察大鼠肾小球病变情况，采用免疫组织化学方法检测podocin、CD2AP、nephrin的表达情况，结果应用图像分析系统IPP(Image-Pro Plus)进行半定量分析。结果：1.实验大鼠的一般情况正常对照组的大鼠饮食、尿量均正常，反应灵敏，眼睛有神，肌肉丰满。其余三组大鼠经尾静脉注射C-BSA后，出现饮食减少、精神萎靡、毛发脱落、少动抱团，大部分大鼠出现阴囊水肿。实验最后一周时，与正常对照组相比，造模各组大鼠体形较小，毛发脱落（腹部为重）。2.24小时尿蛋白定量24小时尿蛋白定量，在连续尾静脉注射C-BSA4周后，模型组、高剂量舒洛地特组、低剂量舒洛地特组与正常对照组比较均显著升高（P均<0.05），连续舒洛地特灌胃4周后，高剂量舒洛地特组与低剂量舒洛地特组24小时尿蛋白较前均有所降低，与模型组相比有显著性差异（P均<0.05），与低剂量舒洛地特组相比，高剂量舒洛地特组24小时尿蛋白降低更明显（P<0.05）。3.肾组织病理形态学观察光镜：正常对照组大鼠肾小球形态基本正常，毛细血管袢开放良好，无固有细胞增多，无基底膜增厚;模型组大鼠肾小球固有细胞增多，基底膜明显增厚;高剂量舒洛地特组和低剂量舒洛地特组大鼠的肾小球固有细胞轻度增多，基底膜增厚较模型组减轻。电镜：正常对照组大鼠的足细胞结构清晰，足突排列整齐;模型组大鼠的肾小球基底膜弥漫增厚，上皮下电子致密物沉积，足细胞足突广泛融合或消失;低剂量舒洛地特组大鼠肾小球基底膜不规则增厚，上皮下电子致密物沉积，足突部分融合;高剂量舒洛地特组大鼠基底膜轻度增厚，上皮下少量电子致密物沉积，足突部分融合。4.免疫组化结果从免疫组化染色中可以观察到podocin、CD2AP、nephrin三种蛋白表达于肾小球上皮下。该三种蛋白在正常对照组肾小球上均有大量表达，模型组、低剂量舒洛地特组及高剂量舒洛地特组肾小球上也均有表达，但较正常对照组表达降低，有统计学意义（P均<0.05），模型组中podocin、CD2AP、nephrin的表达较低剂量舒洛地特组及高剂量舒洛地特组表达均降低，有统计学意义（P均<0.05），低剂量舒洛地特组与高剂量舒洛地特组相比，podocin、CD2AP、nephrin表达较低，具有统计学意义（P均<0.05）。结论：1.膜性肾病大鼠足细胞nephrin、podocin及CD2AP表达下降，并与足细胞足突融合程度及蛋白尿程度变化一致。提示nephrin、podocin及CD2AP可能参与膜性肾病肾小球足细胞损伤和蛋白尿产生。2.舒洛地特可以降低膜性肾病大鼠24小时尿蛋白含量。3.舒洛地特可以上调膜性肾病大鼠肾组织中podocin、CD2AP、nephrin的表达，提示舒洛地特对膜性肾病的肾脏保护作用可能与维持足细胞裂隙隔膜结构和肾小球滤过功能的完整性有关。4.舒洛地特治疗大鼠膜性肾病尿蛋白及肾脏保护作用具有剂量依懒性。

关键词：膜性肾病(MN) 阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA) 舒洛地特 podocin CD2AP nephrin

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雷帕霉素对UUO大鼠模型肾组织肥大细胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1表达的影响

雷帕霉素对UUO大鼠模型肾组织肥大细胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1...

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作者：李华河北医科大学

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目的：肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展到终末期共同的病理改变，其发生发展过程中肾小管上皮间质转分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)、肌成纤维细胞激活等机制，起到了重要作用。纤维化是一个多因子多细胞参与的复杂... 详细信息

目的：肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展到终末期共同的病理改变，其发生发展过程中肾小管上皮间质转分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)、肌成纤维细胞激活等机制，起到了重要作用。纤维化是一个多因子多细胞参与的复杂的动态过程，炎性细胞及其分泌的各种炎性因子发挥了重要的作用，尤其是肥大细胞（mast cell，MC）在其中的作用是不可忽略的。当受刺激时，MC以胞吐方式大量释放颗粒内的物质，如类胰蛋白酶（Tryptase，Try）、白三烯、前列腺素、血小板活化因子、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及多种白细胞介素(IL)等，这些物质能促进成纤维细胞增生、细胞外基质积聚、导致肾组织纤维化。Try是公认的肥大细胞特异性标志物，对成纤维细胞、平滑肌细胞、支气管上皮细胞具有促进有丝分裂的作用。Try能增加微血管的通透性，刺激炎症细胞移行，促进其成熟和细胞因子释放。IgA肾病、急慢性间质性肾炎时Try可以激活肾小管上皮细胞PAR-2，从而分泌TGF-β1，使Ⅰ型胶原纤维生成增多，细胞外基质增多。雷帕霉素对肥大细胞所致的食物过敏反应大鼠模型有治疗作用，还有研究报道对于肥大细胞增生症也有一定的作用。在UUO模型中，肥大细胞的浸润是否也起到一定的作用、雷帕霉素对肥大细胞及其分泌的炎性因子有何影响，还不太明确，因此，我们通过动物模型，进行相关的研究，寻找雷帕霉素治疗肾纤维化的另一有力证据。本课题拟通过建立单侧输尿管梗阻（unilateralurethral obstruction，UUO）的大鼠肾间质纤维化模型，结合HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色等检测手段，观察雷帕霉素对肾间质纤维化大鼠肾组织中肥大细胞Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达的影响，探讨雷帕霉素对肾间质纤维化的保护作用，为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。方法：选择清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠54只，雄性，健康，体重(200±20)克，适应性喂养1周后，随机分为三组：假手术组(Sham组)、输尿管结扎组(UUO组)、雷帕霉素干预组(Rapa组)，每组各18只。每组又分别于术后第4、7、14天分批取出梗阻侧肾组织，分别为D4、D7、D14组，每组各6只。UUO组、Rapa组大鼠结扎左侧输尿管，Sham组仅游离左侧输尿管。各组于手术前1天开始给药，每天灌胃1次，每周复查体重，调整给药量。Rapa组以雷帕霉素2mg/kg/d灌胃，Sham组及UUO组以等容的生理盐水灌胃，实验期间自由进食水。各组分别于术后第4天、7天、14天随机选取6只大鼠分三批取出梗阻侧肾组织，置于固定液中，包埋、制成切片（1）分别采用苏木素伊红(HE)染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化;（2）采用免疫组织化学方法测定肾间质肥大细胞特异标志物Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达。结果应用图像分析系统IPP(Image-Pro Plus)进行半定量分析。实验数据用均数±标准差(x±S)表示，各组间比较采用单因素方差分析（满足正态性和方差齐性），不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验，相关性分析各变量之间的相关性用Pearson或Spearman检测。应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，以PRapa组>Sham组（P<0.05）。结论：（1）UUO大鼠模型中，肥大细胞的浸润与肾间质纤维化的严重程度有密切关系，提示肥大细胞可能参与了肾间质纤维化的发生;（2）UUO术后大鼠肾脏Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达逐渐升高;提示肥大细胞可能通过肥大细胞-Tryptas

关键词：肾间质纤维化单侧输尿管梗阻(unilateral urethral obstr-uction) 雷帕霉素肥大细胞类胰蛋白酶(Tryptase) 蛋白酶激活受体(PAR-2) 转化生长因子-β1(TGF-β1)

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炼苗时间对烤烟生长及品质影响研究

炼苗时间对烤烟生长及品质影响研究

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作者：杨继周湖南农业大学

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经过近几年的研究,建阳的漂浮育苗技术已经比较成熟,但是关于漂浮育苗的炼苗措施在实践中并没有完全贯彻下去,且对建阳地区合理的炼苗时间没有针对性的研究。为了寻求建阳地区最适的炼苗时间,提高烟苗质量,同时在当地宣传炼苗的重要性,... 详细信息

经过近几年的研究,建阳的漂浮育苗技术已经比较成熟,但是关于漂浮育苗的炼苗措施在实践中并没有完全贯彻下去,且对建阳地区合理的炼苗时间没有针对性的研究。为了寻求建阳地区最适的炼苗时间,提高烟苗质量,同时在当地宣传炼苗的重要性,本实验选用K326为供试品种,研究不同炼苗时间对烟叶成苗素质、生长发育、植物学性状、农艺性状、经济性状、化学成分、外观质量及感官质量的影响。主要结果如下： 1合理的炼苗时间能有效提高烟苗的成苗素质移栽前5-10天左右进行科学、合理的炼苗处理,能提高烟苗的成苗素质。烟苗茎秆粗壮,根系发达,移栽后成活率最高,后期大田生长期,烟株较为清秀,长势好。 2合理的炼苗时间对烟株大田生长发育有促进作用移栽前5-10天左右进行科学、合理的炼苗处理,烟株团棵期比没有经过炼苗处理的提前了3-4天,现蕾期提前了2-3天;从大田长势看,经过炼苗处理的烟苗移栽后返苗的速度明显快于没有炼苗处理的烟苗;进入成熟期后,各处理烟株的生育期没有明显差别;从烟株的整齐度和生长势来看,经过炼苗处理的烟株表现都较好。 3合理的炼苗时间能优化烟株大田生长期的生物学性状和农艺性状移栽前10-15天左右进行科学、合理的炼苗处理,烟株在茎高、茎围、株高、有效叶片数、最大叶面积、地上部鲜重、地上部干重、干鲜比、不定根数量等生物学性状和农艺性状方面,均优于未进行炼苗处理的对照。但炼苗与否对打顶后7天烟株的农艺性状影响不大。 4合理的炼苗时间能提高烤后烟叶的经济性状不同处理间在每项经济性状上的差异虽然都没有达到显著水平,但比较而言,在产量、产值、均价、中上等烟比例上,经过炼苗的处理要高于没有炼苗的处理。其中以炼苗15天的处理表现较优。 5合理的炼苗时间能进一步优化烤后烟叶的综合质量移栽前10天左右进行科学、合理的炼苗处理,烟叶的成熟度、颜色、叶片结构、油分、身份等外观质量均有一定程度的提高;经过炼苗处理后,烟叶内在化学成分含量合理、协调,且各指标基本达到特色优质烟叶所要求的指标范围。经炼苗处理的烟叶,烟叶香气量较足,烟气细腻,杂气较轻,灰色较白,口感较干净湿润,评吸结果均优于未作处理的对照。综合农业生产实际和工业企业的原料质量需求,以在移栽前7-10天开始断水炼苗较为适宜。

关键词：炼苗时间烤烟生长发育产质量

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