雷帕霉素对UUO大鼠模型肾组织肥大细胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1表达的影响

作     者：李华 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王保兴

授予年度：2013年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：肾间质纤维化 单侧输尿管梗阻(unilateral urethral obstr-uction) 雷帕霉素 肥大细胞 类胰蛋白酶(Tryptase) 蛋白酶激活受体(PAR-2) 转化生长因子-β1(TGF-β1) 

摘      要：目的：肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展到终末期共同的病理改变，其发生发展过程中肾小管上皮间质转分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)、肌成纤维细胞激活等机制，起到了重要作用。纤维化是一个多因子多细胞参与的复杂的动态过程，炎性细胞及其分泌的各种炎性因子发挥了重要的作用，尤其是肥大细胞（mast cell，MC）在其中的作用是不可忽略的。当受刺激时，MC以胞吐方式大量释放颗粒内的物质，如类胰蛋白酶（Tryptase，Try）、白三烯、前列腺素、血小板活化因子、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及多种白细胞介素(IL)等，这些物质能促进成纤维细胞增生、细胞外基质积聚、导致肾组织纤维化。Try是公认的肥大细胞特异性标志物，对成纤维细胞、平滑肌细胞、支气管上皮细胞具有促进有丝分裂的作用。Try能增加微血管的通透性，刺激炎症细胞移行，促进其成熟和细胞因子释放。IgA肾病、急慢性间质性肾炎时Try可以激活肾小管上皮细胞PAR-2，从而分泌TGF-β1，使Ⅰ型胶原纤维生成增多，细胞外基质增多。雷帕霉素对肥大细胞所致的食物过敏反应大鼠模型有治疗作用，还有研究报道对于肥大细胞增生症也有一定的作用。在UUO模型中，肥大细胞的浸润是否也起到一定的作用、雷帕霉素对肥大细胞及其分泌的炎性因子有何影响，还不太明确，因此，我们通过动物模型，进行相关的研究，寻找雷帕霉素治疗肾纤维化的另一有力证据。本课题拟通过建立单侧输尿管梗阻（unilateralurethral obstruction，UUO）的大鼠肾间质纤维化模型，结合HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色等检测手段，观察雷帕霉素对肾间质纤维化大鼠肾组织中肥大细胞Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达的影响，探讨雷帕霉素对肾间质纤维化的保护作用，为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。 方法：选择清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠54只，雄性，健康，体重(200±20)克，适应性喂养1周后，随机分为三组：假手术组(Sham组)、输尿管结扎组(UUO组)、雷帕霉素干预组(Rapa组)，每组各18只。每组又分别于术后第4、7、14天分批取出梗阻侧肾组织，分别为D4、D7、D14组，每组各6只。UUO组、Rapa组大鼠结扎左侧输尿管，Sham组仅游离左侧输尿管。各组于手术前1天开始给药，每天灌胃1次，每周复查体重，调整给药量。Rapa组以雷帕霉素2mg/kg/d灌胃，Sham组及UUO组以等容的生理盐水灌胃，实验期间自由进食水。各组分别于术后第4天、7天、14天随机选取6只大鼠分三批取出梗阻侧肾组织，置于固定液中，包埋、制成切片（1）分别采用苏木素伊红(HE)染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化;（2）采用免疫组织化学方法测定肾间质肥大细胞特异标志物Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达。 结果应用图像分析系统IPP(Image-Pro Plus)进行半定量分析。实验数据用均数±标准差(x±S)表示，各组间比较采用单因素方差分析（满足正态性和方差齐性），不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验，相关性分析各变量之间的相关性用Pearson或Spearman检测。应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，以PRapa组Sham组（P0.05）。 结论： （1）UUO大鼠模型中，肥大细胞的浸润与肾间质纤维化的严重程度有密切关系，提示肥大细胞可能参与了肾间质纤维化的发生;（2）UUO术后大鼠肾脏Tryptase、PAR-2、TGF-β1表达逐渐升高;提示肥大细胞可能通过肥大细胞-Tryptas