检索结果-南通市图书馆

作者：何迎周南京农业大学

学位级别：硕士

植物内生真菌长期与植物共同生活、协同进化,在生态系统中发挥着重要作用。很多内生真菌有促进宿主植物生长、增强植物抵御病害和其他各种生物和环境胁迫的能力。为了解西瓜内生真菌的多样性及区系变化,对采自北京、河北廊坊不同生育期... 详细信息

植物内生真菌长期与植物共同生活、协同进化,在生态系统中发挥着重要作用。很多内生真菌有促进宿主植物生长、增强植物抵御病害和其他各种生物和环境胁迫的能力。为了解西瓜内生真菌的多样性及区系变化,对采自北京、河北廊坊不同生育期、不同品种、不同栽培条件的60株西瓜植株和采自廊坊的黄瓜和甜瓜等植株各5株进行了内生真菌的分离、培养和鉴定。经形态学观察和rDNA-ITS序列分析,分离到西瓜内生真菌754株,有559株分属于11属的39个种,剩余195株分属于24属;黄瓜145株,甜瓜68株。其中Cladosporium、Alternaria和Fusarium为优势类群。作为西瓜内生真菌,Panaeolus和Lichtheimia类真菌尚未见报道。多数西瓜内生真菌为稀有类群,这些类群并非是由于随机侵染宿主或操作污染造成的,可能是严格意义上的真正内生真菌,应与深入分析。几乎所有西瓜内生真菌类群也分布于其它宿主植物上,不符合Petrini提出的“平均每种宿主有4-5种专性内生真菌”的观点。因此,这一观点仍有疑问。对北京大兴西瓜内生真菌区系分析表明,随着西瓜植株的生长,内生真菌类群不断增加。Fusarium普遍分布于苗期西瓜植株中,为苗期西瓜的优势类群,其中Fusarium solani的相对频率达39.2%;Monosporascus cannonballus为伸蔓期的优势类群,Alternaria则广泛出现于开花结果期,占分离菌株总数的19.4%。还有些内生真菌只在特定生育期有分布。绝大多数内生真菌有一定的器官特异性或偏好性。Cladosporium在茎叶中有广泛分布,Ceratorhiza和Fusarium在根中有广泛分布,Alternaria则只分布在叶中。内生真菌的类群组成在一定程度上受地理位置的影响,Cladosporium oxysporum普遍出现在朝阳京欣西瓜中,Fusarium solani则在大兴京欣西瓜中有广泛分布。同一条件下种植的不同瓜类植物其内生真菌的类群组成存在差异,表现出一定的宿主偏好性。露地栽培西瓜中内生真菌种类明显多于大棚栽培西瓜,表明西瓜内生真菌和栽培方式也有一定关系。对峙培养的结果显示,在供试967株瓜类内生真菌中,对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum ACCC36081)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani ACCC36124)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum ACCC37438)和瓜类炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare ACCC30016)拮抗指数≥20%的菌株分别有106、106、158和215株,占供试菌株的11.0%、11.0%、16.3%和22.2%;拮抗指数≥50%的菌株分别有19、26、49和92株,占供试菌株的2.0%、2.7%、5.1%和9.5%,表明内生真菌对瓜类常见病害有一定的影响。拮抗类型以由菌丝接触引起生长停滞(A)和由菌丝体分泌活性物质引起生长停滞(B)为主。预接种处理初步试验表明,内生真菌Aspergillus terreus JFLu-3-1、Aspergillus ochraceus CSu-9和Penicillium oxalicum WSu-9孢子悬浮液预处理黄瓜(品种：津研四号)发芽种子减轻了黄瓜枯萎病(病菌：Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum ACCC37438)发病,用无菌发酵液预处理的效果优于其相应菌种的孢子悬浮液预接种处理的效果,暗示着这种效果可能是由培养滤液中的活性物质介导的。接种黄瓜枯萎病菌30天后,对照组黄瓜绝大多数萎蔫,病情指数达86.3%,而预先经Aspergillus terreus JFLu-3-1无菌发酵液处理的黄瓜其病情指数仅为38.9%,显示了其潜在的生防价值。研究结果初步揭示了西瓜内生真菌多样性和区系变化情况,对其生物学功能及其与植物间的关系有了初步认识,为西瓜内生真菌资源的进一步研究和利用奠定了基础。

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中国小麦条锈菌主要流行小种DNA多态性分析

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作者：贾瑞祥中国农业大学

学位级别：硕士

小麦条锈病是由小麦条锈菌(Puccinia striformis f. sp. tritici)引起的小麦叶部病害,该病害发生面积广,流行频率高,危害严重。中国是世界上最大的小麦条锈病流行区,小麦条锈菌流行体系是一个相对独立的体系。目前,防治小麦条锈病主要... 详细信息

小麦条锈病是由小麦条锈菌(Puccinia striformis f. sp. tritici)引起的小麦叶部病害,该病害发生面积广,流行频率高,危害严重。中国是世界上最大的小麦条锈病流行区,小麦条锈菌流行体系是一个相对独立的体系。目前,防治小麦条锈病主要是使用抗病品种和化学防治,但不论是利用抗病品种还是化学防治,都必须快速及时了解小麦条锈菌生理小种的动态或毒性变异趋势,从而为选育优良的抗病品种提供基础。本研究利用12对SSR引物和30对MseⅠ/PstⅠ的AFLP引物组合对我国小麦条锈菌主要流行小种从毒性谱的角度进行了DNA多态性分析,结果表明12对SSR引物中除了RJ12外剩余11对都具有多态性;30对MseⅠ/PstⅠ引物组合中,26对存在多态性,其中12对组合多态性最好。具体研究结果如下: 1.利用SSR引物RJ17对11个小麦条锈菌生理小种12个菌系进行DNA多态性分析,在CY24小种上获得了长度约为285bp的特异性片段。在原有11小种12菌系的基础上再增加2个小种6个菌系,进一步对该片段进行了验证,发现该片段仍仅存在于CY24小种上,初步结果表明RJ17引物可以用于CY24的检测。 2.利用SSR引物RJ21引物对11个小种12个菌系进行DNA多态性分析,在CY31上获得约为182bp的特异片段。增加1个小种6个菌系的进一步验证发现,该片段能够在CY31稳定存在,初步表明RJ21引物可以用于CY31的检测。 3.使用30个MseⅠ/PstⅠ的引物组合对供试30个小麦条锈菌菌系进行了筛选,结果发现有12个组合多态性较好,获得小种特异片段的是利用M18/P26引物组合对10个小麦条锈菌小种进行的筛选,其中在CY29小种上获得了约为650bp的特异性片段。 4.利用引物RJ20对11个小麦条锈菌生理小种进行筛选时获得长度约为310bp的可能与Yr9毒性谱相关的特异带。增加1个小种7个菌系的验证后发现该片段能够稳定存在,对研究毒性变异提供了一些参考。 5.利用引物RJ3对10个小种筛选,获得可能与水源11系列毒性谱相关的长度约为308bp的特异带,在增加3个小种5个菌系验证后,该片段能够稳定存在,对研究水源系列致病类型的的分子提供一定信息。从以上实验结果来看,本研究获得的一些有关小麦条锈菌群体毒性和小种的信息,可能会对以后研究小麦条锈菌的毒性变异和群体进化提供一些帮助。

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小麦农家品种赤壳（苏1900）中一个主效抗条锈病基因的微卫星标记和定位

小麦农家品种赤壳（苏1900）中一个主效抗条锈病基因的微卫星标记...

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作者：刘方慧安徽农业大学

学位级别：硕士

小麦条锈病是一种世界性病害,也是危害我国小麦生产的最重要病害之一。由于该病害具有流行频率高、暴发性强、发生范围广和危害损失大等特点,严重威胁着小麦的高产和稳产。培育和应用抗病品种是防治小麦条锈病最经济、安全、有效的方法... 详细信息

小麦条锈病是一种世界性病害,也是危害我国小麦生产的最重要病害之一。由于该病害具有流行频率高、暴发性强、发生范围广和危害损失大等特点,严重威胁着小麦的高产和稳产。培育和应用抗病品种是防治小麦条锈病最经济、安全、有效的方法。长期以来,由于大面积种植抗病基因相对单一的品种以及条锈病菌的高度变异性,小麦品种抗病性屡屡“丧失”,成为小麦条锈病防治中的突出问题。因此,发掘新抗源,引入多个抗病基因,选育综合抗病品种,将有助于逐步实现小麦品种抗病基因多样化、改变小麦条锈病防治中的被动局面。小麦农家品种赤壳(苏1900)对当前流行的条锈菌优势小种条中32号有较好的抗性。在我国抗病资源相对匮乏的情况下,对赤壳进行抗条锈性遗传分析、基因的染色体定位和分子标记研究有着十分重要的意义。本研究采用小麦感病品种Taichung29和农家品种赤壳制备了一系列杂交后代材料,通过温室内人工接种具有代表性的我国小麦条锈菌主要生理小种,对赤壳的抗条锈性进行了遗传分析,采用微卫星(microsatellite或simple sequencerepeat,SSR)多态性分析技术结合缺体分析对赤壳中抗小麦条锈菌条中32号小种的一个主效抗条锈病基因进行了染色体定位和分子标记研究,取得了以下主要结果: 1.用小麦条锈菌条中32号小种接种Taichung29、农家品种赤壳及二者的杂交F代、F代、BC、F代,抗条锈性遗传分析发现,赤壳对条中32号小种的抗性是由一对显性基因控制的。 2.用SSR多态性分析方法,筛选了400多对引物,找到了5个与赤壳中的主效抗条锈基因YrChk连锁的标记,分别是Xwmc44、Xgwm259、Xwmc367、Xcfa2292、Xbarc80,它们均位于染色体1BL上。 3.用Mapmaker3.0软件计算各个标记及其与目的基因间的遗传距离并绘出了遗传连锁图,其中Xwmc44位于目的基因靠近着丝点一侧,与目的基因的遗传距离是8.3cM,Xgwm259、Xwmc367、Xcfa2292、Xbarc80位于目的基因远离着丝点的一侧,与目的基因的遗传距离分别是9.1 cM、17.2 cM、20.6 cM、31.6cM。 4.对与抗条锈基因连锁的SSR标记Xwmc44、Xgwm259、Xwmc367、Xcfa2292、Xbarc80用全套中国春缺-四体小麦材料进行了分析,它们均位于小麦1B染色体上,进一步确认了SSR标记与抗病基因的连锁性分析结果。最终确定了小麦抗条锈病基因YrChk位于小麦1BL染色体上。 5.通过对小麦1B染色上的抗条锈基因YrChk、Yr3(Yr3a、Yr3b、Yr3c)、Yr9、Yr21、Yr29的载体品种接种条中32号小种进行抗病性鉴定发现,含有YrChk的赤壳品种对条中32号小种表现抗病(表现型0～0;型),其它几个已知基因的载体品种Clement(Yr9)、洛夫林10(Yr9)、Vilmorin23(Yr3a)、Hybrid46(Yr3b)、Lemhi(Yr21)、Lalbahadur(Yr29)对条锈病菌条中32号小种均表现感病(反应型为3—4型)。综合前人和本研究对上述基因的研究结果,推测小麦抗条锈病基因YrChk可能是一个新抗病基因。 6.用AFLP多态性分析方法,筛选了100多对AFLP引物,但由于时间有限,在本论文完成之际,未找到与目的基因连锁的AFLP多态性标记。

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小麦抗条锈病基因Yr5分子标记的鉴定

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作者：陈晓红东北农业大学

学位级别：硕士

小麦条锈病是一种世界性病害，严重威胁着小麦生产。在抗病育种中应用分子标记辅助选择有利于实现抗条锈病多基因积累，加速持久抗病品种的培育进程。以小麦抗条锈病基因Yr5的供体亲本Triticum spelta album作为对照，对近等基因系... 详细信息

小麦条锈病是一种世界性病害，严重威胁着小麦生产。在抗病育种中应用分子标记辅助选择有利于实现抗条锈病多基因积累，加速持久抗病品种的培育进程。以小麦抗条锈病基因Yr5的供体亲本Triticum spelta album作为对照，对近等基因系Yr5／6×Avocet S和感病亲本Avocet S进行RAPD分析。扩增产物用4％变性PAGE分离，银染显色。可以检测到50～100条带，是琼脂糖凝胶电泳的5倍以上。本研究筛选了240个随机引物，发现23条稳定的多态性DNA片段。可见，该方法显著提高了小麦RAPD分析的多态性水平。而且，由于PAGE能够稳定检出低拷贝的扩增片段，也改善了RAPD分析的重复性。对23条多态性DNA片段与Yr5基因的遗传连锁性进行初步检测，确定了分别由5条引物扩增的S1320、S1348、S1476、S1476、S1397、S1380共6条多态性片段与Yr5基因有连锁性。将其中连锁性好的多态性片段S1320、S1348、S1476进行克隆、测序，并根据序列设计特异性引物。用121株Avocet S和Yr5／6×Avocet S杂交制备的F代分离群体进一步进行遗传连锁性检测。特异扩增产物SC-S1320与Fr5基因完全连锁;标记SC-S1348与Yr5基因紧密连锁(交换率0.008)，表明已经成功转化为Yr5基因的SCAR标记。对小麦抗条锈病基因Yr5的近等基因系材料，提取接种后12h、24h、48h叶片的总RNA，制备三个时间段的cDNA模板。根据已克隆R基因普遍具有的NBS结构域的P-loop、Kinase-2a、Kinase-3a、EGF区设计5条RGA简并引物，组成5对引物组合。用相同的模板与引物，在低严谨条件下扩增，获得4条多态性片段;在高严谨条件下扩增，发现1条多态性片段D-4。将引物组合N-E扩增抗病和感病材料的产物分别回收作为模板，用引物组合K-E和Touch down程序再扩增，检测到1条550bp左右差异DNA带，记为RD-1;将引物组合K-E扩增抗病和感病材料的产物分别回收作为模板，用引物组合KS-E和Touch down程序再扩增，检测到1条470bp左右差异DNA带，记为RD-2。用巢式PCR两次扩增目的DNA片段，提高了特异性，更有利于目的DNA片段检出。

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小麦农家品种红麦（京2747）中主效抗条锈病基因的分子标记

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作者：巫娟安徽农业大学

学位级别：硕士

小麦是我国第二大粮食作物,条锈病(Puccinia striiformis West. f. sp. tritici)是小麦上的主要病害之一,是一种世界性的小麦病害。多年来,我国所培育出的小麦抗条锈病品种利用的抗源大多是来自美国、意大利、智利、罗马尼亚和前苏联等... 详细信息

小麦是我国第二大粮食作物,条锈病(Puccinia striiformis West. f. sp. tritici)是小麦上的主要病害之一,是一种世界性的小麦病害。多年来,我国所培育出的小麦抗条锈病品种利用的抗源大多是来自美国、意大利、智利、罗马尼亚和前苏联等国,而我国的小麦农家品种数量繁多、类型丰富,但因其多数农艺性状较差,而在小麦育种中很少被利用。小麦农家品种是长期自然选择和人工选择的产物,对不良环境具有较强的适应性和抗耐性,其中可能存在着新的抗条锈病基因。研究利用农家品种中的抗条锈病基因,挖掘我国自己的抗病品种资源,对于改善我国小麦生产品种中抗条锈病基因较为单一的状况具有着重要意义。小麦农家品种红麦(京2747)是在田间成株期对多种病害抗性鉴定基础上,又经苗期人工控制条件下接种小麦条锈菌多个生理小种进行抗病性鉴定,确定可抗小麦条锈菌多个生理小种的抗病品种。本研究采用F代分离群体建立抗、感DNA池、RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA)和SCAR(Sequence Characterized Amplified Regions,序列特异性扩增区域)分析方法,对我国小麦农家品种红麦(京2747)中的主效抗条锈病基因进行分子标记研究。主要获得结果如下: 1.本研究用条锈菌条中19号小种接种铭贤169×红麦(京2747)的亲本及各世代群体,根据分离群体抗病性鉴定结果,确定可以排除红麦(京2747)对条中19号小种的抗性由一显一隐基因型控制的情况,推定,红麦(京2747)对条中19号小种的抗性由一对显性基因控制。 2.利用铭贤169×红麦(京2747)F分离群体建立抗、感DNA池,用RAPD方法进行DNA多态性分析。共筛选了236个10碱基随机引物,其中S1134、B18、H7、H8等30条引物初次扩增可得到多态性片段,经过多次重复,引物S1167能稳定扩增出1条约242bp的多态性DNA片段,该片段只出现在抗病DNA池和抗病亲本红麦(京2747)中,而不出现在感病DNA池和感病亲本铭贤169中。 3.经用201株杂交F代植株对多态性DNA片段S1167与目的基因的遗传连锁性进行分析,在164株抗病单株中有156株可稳定扩增出该特异DNA片段,而在37株感病单株中则有34株不能扩增出该特异DNA片段,经统计共有11株发生了交换,标记S1167与目的抗病基因间的遗传距离为6.1 cM。 4.对获得的RAPD片段进一步标记转化与验证,获得多态性DNA片段S1167序列。本研究利用F代抗病性鉴定结果对F代抗病性鉴定结果进行验证,可以应用于F代抗病性鉴定结果偏离分离比例理论值的情况,以充分确定抗病主效基因的基因型。本研究中得到的RAPD标记S1167表现稳定、重复性强,建立该品种中主效抗条锈基因的分子标记,可用于小麦抗锈育种中的标记辅助选择,促进红麦(京2747)中抗条锈基因在小麦抗病育种的利用。可用于小麦抗锈育种中的标记辅助选择,促进红麦(京2747)中抗条锈基因的利用。

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小麦条锈菌异核现象研究及SSR分子标记建立

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作者：裴静宇吉林农业大学

学位级别：硕士

小麦条锈病是由小麦条锈菌引起的小麦叶部病害，该病害发生面积广，流行频率高，危害严重。我国小麦条锈病流行体系是一个相对独立的体系。目前，防治小麦条锈病主要是使用抗病品种和化学防治，但不论是利用抗病品种还是化学防治，都必... 详细信息

小麦条锈病是由小麦条锈菌引起的小麦叶部病害，该病害发生面积广，流行频率高，危害严重。我国小麦条锈病流行体系是一个相对独立的体系。目前，防治小麦条锈病主要是使用抗病品种和化学防治，但不论是利用抗病品种还是化学防治，都必须快速及时了解小麦条锈菌生理小种的动态或毒性变异趋势。关于体细胞重组(异核作用)前人有了一些初步研究，但到底是否可通过体细胞重组导致毒性变异没有确切的理论依据。本研究利用10个菌系以及白化菌进行了体细胞重组产生新菌系的筛选。并利用24对SSR引物对异核菌系和我国小麦条锈菌主要流行小种进行了DNA多态性分析。 1．在进行异核菌系筛选过程中，有四个组合筛选出了异核菌系。即1号菌系、2号菌系、3号菌系、4号菌系。新菌系的毒性特征明显不同于对应原始菌系。在利用SSR引物RJ24对稳定的4号异核菌系进行分析后，获悉新菌系是通过核的重新组合分配后体细胞杂交(即菌系融合、异核作用)的结果。从分子水平上进一步证实了该新菌系是由两个原始菌系经过异核作用产生的。 2．利用RJ3引物对所选取的15个小麦条锈菌生理小种和三个国外菌系进行了DNA多态性的分析，可以得到白化菌系不同于其它供试小种的170bp左右的特异性扩增片段，经过参试菌系的重复验证，该特异性片段能稳定清晰再现。为后期研究颜色变异或无毒基因提供了参考。 3．利用SSR引物RJ18对17个小麦条锈菌生理小种21个菌系进行DNA多态性分析，在CY26小种上获得了300bp左右特异性扩增片段。进一步对该片段进行了验证，发现该片段仍仅存在于CY26小种上，初步结果表明RJ18引物可以用于CY26的检测。 4．利用SSR引物RJ4引物对17个小种23个菌系进行DNA多态性分析，获得了CY29小种的210bp左右的特异性谱带，经过参试菌系的重复验证发现，该片段能够在CY29上稳定存在，初步表明RJ4引物可以用于CY29的检测。 5．利用引物RJ20对11个小麦条锈菌生理小种进行筛选时获得长度约为310bp的可能与Yr9毒性谱相关的特异带。经过参试菌系的重复验证发现，该片段能够稳定存在，对研究毒性变异提供了一些参考。本研究获得的有关小麦条锈菌群体毒性变异和小种的信息，可以为未来研究小麦条锈菌的毒性变异和群体进化及监测提供一些参考和帮助。

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我国北方部分地区主要禾本科杂草病原真菌资源研究

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作者：赵杏利中国农业科学院

学位级别：硕士

于2007年至2008年杂草生长季节,从北京、河北、青海、河南、陕西、山西、吉林、辽宁8省市的农田、草坪和荒地采集了6种常见禾本科杂草狗尾草、马唐、牛筋草、虎尾草、稗草和画眉草的病害样品254份,分离获得病原真菌菌株434株,其中332株... 详细信息

于2007年至2008年杂草生长季节,从北京、河北、青海、河南、陕西、山西、吉林、辽宁8省市的农田、草坪和荒地采集了6种常见禾本科杂草狗尾草、马唐、牛筋草、虎尾草、稗草和画眉草的病害样品254份,分离获得病原真菌菌株434株,其中332株产生孢子。经形态学观察并结合其中183株典型菌株的rDNA ITS区域序列测定和分析结果,共鉴定到9属26种真菌:Alternaria alternata, A. astragali, A. citri, A. compacta, A. longipes, Bipolaris australiensis, B. maydis, B. peregianensis, B. sacchari, B. setariae, B. sorokiniana, Cladosporium cladosporioides, Colletotrichum gloeosporioides, Curvularia affinis, C. cymbopogonis, C. heteropogonicola, C. heterostrophus, C. lunata, Exserohilum monoceras, E. fusiforme, E. rostratum, Fusarium equiseti, F. incarnatum, F. proliferatum, Nigrospora oryzae, Phoma glomerata.。其中,链格孢属Alternaria和平脐孺孢属Bipolaris在6种杂草上均曾分离到,为优势属。国内有关于某一地区农田常见单子叶和双子叶杂草上的病原真菌调查、或针对一种杂草有潜在生防价值的病原真菌菌株筛选的报道,尚未见有专门进行较大地域范围内禾本科杂草上病原真菌资源的调查研究报道。本研究对我国北方八省市主要禾本科杂草上的病原真菌资源进行了较全面的调查和研究,初步探明了此类真菌资源的种类和分布,为进一步研究利用此类资源提供了资料和依据。在控制条件下,用人工接种方法对常见禾本科杂草和常见作物幼苗进行了部分菌株的致病性试验和寄主范围测定。对包括平脐孺孢菌、链格孢菌、弯孢菌和突脐孺孢菌在内的62个菌株接种了5种禾本科杂草,有11个菌株在不同植物上引起了程度不同的明显症状,其中7个菌株是在狗尾草上、2个菌株是在马唐上、1个菌株是在牛筋草上、1个菌株是在虎尾草上具有致病性。经对该11个菌株增加接种植物种类进行致病性重复试验,发现其中分离自河南南阳发病稗草的新月弯孢菌株ZXL07289a对虎尾草致病性强,而对供试其它杂草和作物只表现轻微致病性或不致病,表现一定的寄主专一性。分离自河南南阳发病狗尾草的狗尾草平脐孺孢菌株ZXL07290a表现出对狗尾草、虎尾草和马唐均有很强致病性,对谷子、高粱等禾本科单子叶作物也有显著致病性,但对大豆、棉花等双子叶作物不致病,寄主范围相对较广。初步试验表明,新月弯孢菌株ZXL07289a和狗尾草平脐孺孢菌株ZXL07290(aNY1)具有作为杂草生防菌株进一步开发成为微生物除草剂的潜力。致病性测定的62个菌株中有19株狗尾草平脐孺孢,结果表明,来自不同寄主植物的狗尾草平脐孺孢菌株对狗尾草的致病性存在明显差异,来自狗尾草的菌株比来自其它寄主植物的菌株对狗尾草致病性强,分离自野燕麦的菌株YS1对狗尾草无致病性,分离自不同地区不同狗尾草样品的菌株其致病性有显著差异。

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常见瓜类植物内生真菌多样性及对病害影响的初步研究

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作者：薛庆婉中国农业科学院

学位级别：硕士

葫芦科中很多瓜类植物为人们提供日常水果和蔬菜，是重要的经济作物。葫芦科植物内生真菌资源丰富，有些内生真菌具有生防潜力。目前，关于葫芦科植物内生真菌多样性的研究很少。本文通过采样、分离培养和鉴定对常见瓜类植物的内生真菌... 详细信息

葫芦科中很多瓜类植物为人们提供日常水果和蔬菜，是重要的经济作物。葫芦科植物内生真菌资源丰富，有些内生真菌具有生防潜力。目前，关于葫芦科植物内生真菌多样性的研究很少。本文通过采样、分离培养和鉴定对常见瓜类植物的内生真菌多样性进行了研究，并通过对峙培养和人工接种等方法对内生真菌对4种常见病害的影响进行了初步研究，为内生真菌资源的进一步开发利用奠定基础。从北京的海淀、大兴和延庆、江苏无锡、河南原阳、山东滨州6个地点采集了不同品种、不同生育期和不同生长环境的瓜类植物样本9种76株，采用组织分离法共分离到633株内生真菌。根据形态学和ITS序列分析，将539个菌株鉴定为58个属，Colletotrichum、Fusarium、Chaetomium、Alternaria、Rhizophycnis、Aspergillus、Plectosphaerella和Thielavia为优势类群。Colletotrichum主要存在于植株地上部，Fusarium主要存在于根部和下茎部，Rhizopycnis主要存在于根部，表现出明显的部位差异。河南原阳不同瓜类植物样品中主要内生真菌类群的相对多度和内生真菌的多样性存在明显差异，蛇瓜中Colletotrichum的相对多度达44.7%，显著高于丝瓜中Colletotrichum的相对多度8.0%;黄瓜中Fusarium的相对多度达32.4%，远高于在其它瓜类植物中Fusarium的相对多度，而在南瓜中Fusarium的相对多度最低，仅为3.0%。13株Thielavia和8株Diaporthe属内生真菌仅分离自北京大兴区的样本，7株Botryosphaeria仅分离自河南原阳的样本。江苏无锡和河南原阳的丝瓜样品中内生真菌类群的物种丰富度和多样性指数有很大差异，温室黄瓜与露地黄瓜内生真菌群落也有明显差异。表明植株生长的地区和栽培条件对于瓜类植物内生真菌的组成和多样性具有显著影响。对分离到的全部内生真菌与4种病原真菌进行了对峙培养，对Rhizoctonia solani J. G. Kühn、Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary、 Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum Owen和Colletotrichum orbiculare (Berk．&Mont．) Arx的拮抗指数≥80%的内生真菌分别有20株、4株、18株和5株，产生抑菌带的内生真菌分别有1株、58株、16株和15株。选择了25株产明显抑菌带的内生真菌进行发酵培养，发酵液经过滤除菌或高压灭菌后对病原真菌生长的抑菌活性实验表明，19株对S. sclerotiorum表现出显著抑制作用，3株对F. oxysporum f. sp. cucumerinum表现出显著抑制作用，4株对C. orbiculare表现出显著抑制作用。选择对峙培养中产明显抑菌带的20株代表菌株进行盆栽促生实验，有11株内生真菌在接种40天后显著增加了黄瓜苗的株高、最大叶面积、湿重或（和）干重，其中菌株Xf1对幼苗的4个指标均有较大增长。15株对峙培养中对病菌R. solani的拮抗指数较大的内生真菌经接种实验，菌株Wgl1、K2ls1和H3ls1对黄瓜立枯病的相对防效分别为54.0%、57.1%和64.3%。

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小麦抗条锈病基因YrSp的分子标记研究

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作者：王丽娟中国农业科学院

学位级别：硕士

我国小麦条锈病危害普遍而严重,培育和应用抗病品种是防治小麦条锈病最经济、安全、有效的方法。由于条锈病菌的高度变异性以及生产品种中抗条锈基因较为单一,品种抗病性“丧失”成为小麦条锈病防治中的突出问题。小麦品种Spaldings Pro... 详细信息

我国小麦条锈病危害普遍而严重,培育和应用抗病品种是防治小麦条锈病最经济、安全、有效的方法。由于条锈病菌的高度变异性以及生产品种中抗条锈基因较为单一,品种抗病性“丧失”成为小麦条锈病防治中的突出问题。小麦品种Spaldings Prolific是欧洲小麦条锈菌鉴别寄主,其所具有的抗条锈病基因YrSp具有较好的抗性,可抗当前我国大多数小麦条锈菌生理小种,但在我国小麦育种中还很少应用。因此,开展抗条锈病基因YrSp的分子标记研究,将促进YrSp基因在小麦抗锈育种中的应用,并有助于实现多基因聚合育种,对于逐步实现小麦生产品种抗病基因多样化具有重要意义。本研究采用AFLP分析方法,以小麦抗条锈病基因YrSp的供体亲本Spaldings Prolific、近等基因系YrSp/6 x Avocet S、轮回亲本Avocet S及由Avocet S和YrSp/6 x Avocet S杂交制备的F代分离群体为材料,开展了小麦抗条锈病基因YrSp的分子标记研究,取得了如下主要结果: 1.采用225对AFLP引物组合,对Spaldings Prolific、YrSp/6 x Avocet S、Avocet S三组材料进行分析,发现12条稳定出现的多态性DNA片段。经用10株感病F代单株和10株抗病F代单株进行遗传连锁性初步检测,确定了分别由4条引物扩增的P34M54、P70M62、P70M62、P32M59、P32M59、P36M53共6条多态性片段与YrSp基因有连锁性。 2.将多态性片段P34M54、P70M62、P70M62、P32M59、P32M59、P36M53分别进行克隆、测序,并根据序列设计特异性引物。将其中的P34M54、P32M59、P36M53成功转化成了SCAR标记,即SC-P34M54、SC-P32M59和SC-P36M53。 3.用208株Avocet S和YrSp/6 x Avocet S杂交制备的F代分离群体,对获得的3个SCAR标记和YrSp的SSR标记Xwmc441之间的遗传关系进行了检验。用MAPMAKER 3.0b软件计算各个标记与目的基因间及各个标记间的遗传距离及相互关系,绘出了4个标记的遗传连锁图,4个标记位于目的基因的一侧,其中SC-P34M54与目的基因相距最近(2.9cM),其余3个标记由近到远依次是SC-P32M59(3.8cM)、SC-P36M53(3.8cM)和Xwmc441(18.6cM)。

来源：

同方学位论文库评论

小麦抗条锈基因Yr15分子标记的鉴定

引用

作者：王荃东北农业大学

学位级别：硕士

我国小麦条锈病危害普遍而严重,由于条锈病菌的高度变异性,导致很难对小麦条锈病进行持续有效的控制。在抗病育种中应用分子标记辅助选择有利于实现抗条锈病多基因积累,从而加速持久抗病品种的培育进程。在1910 年Yr15 基因发现于以色... 详细信息

我国小麦条锈病危害普遍而严重,由于条锈病菌的高度变异性,导致很难对小麦条锈病进行持续有效的控制。在抗病育种中应用分子标记辅助选择有利于实现抗条锈病多基因积累,从而加速持久抗病品种的培育进程。在1910 年Yr15 基因发现于以色列北部野生小麦Triticum dicoccoide s 中,大量研究证明该基因对当前流行小种抗性良好。因而,以小麦抗条锈病Yr15 基因为研究对象,对于抗条锈基因的分子标记辅助选择、图谱克隆和基于抗病基因同源序列克隆抗条锈病基因有重要价值。 RGA 标记技术是利用抗病基因具有保守结构域的特性,通过人工合成引物对基因组DNA 进行定点扩增,在全基因组水平上检测DNA 变异。在本实验中,首先以小麦抗条锈病基因Yr15 的近等基因系Yr15/6×Avocet S 和感病亲本Avocet S 为材料进行RGA 分析。扩增产物用4%变性聚丙烯酰氨分离,银染显色。可以检测到30～70 条带,是琼脂糖凝胶电泳检测的5 倍以上。本研究根据已克隆R 基因普遍具有的NBS 结构域的P-loop、Kinase-2a、Kinase-3a 和LRR 区设计49 条RGA 引物,组成442 对引物组合,发现2 条稳定的多态性DNA片段。而且,由于PAGE 能够稳定检出低拷贝的扩增片段,大大地改善了RGA 分析的重复性。其次,对2 条多态性DNA 片段与Yr15 基因的遗传连锁性进行初步检测,确定了由引物XaILR-F 和PtoFen-S 扩增的Yr15-R1,以及由引物XaILR-R 和Pto-kin2IN 扩增的Yr15-R2 两条多态性片段都与Yr15 基因有连锁性。经用214 株Avocet S 和Yr15/6×Avocet S 杂交制备的F 代分离群体进行遗传连锁性检测,特异扩增产物Yr15-R1 与Yr15 基因完全连锁。用Mapmaker 3.0b 软件分析确定Yr15-R2 与抗条锈基因Yr15 紧密连锁,遗传距离2.0cM。最后,对这两条连锁的多态性片段Yr15-R1 和Yr15-R2 进行克隆、测序,并进一步对测得的序列进行了比较分析。

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