检索结果-南通市图书馆

作者：吴建红浙江大学

学位级别：硕士

研究背景糖尿病是一种自身免疫缺陷和环境因素共同作用所致的内分泌代谢紊乱性疾病，原因是胰岛β细胞损坏造成胰岛素相对或绝对分泌不足，严重威胁着人们的健康和生命;糖尿病治疗已成为21世纪医学面临的最大挑战。虽然随着现代生物医... 详细信息

研究背景糖尿病是一种自身免疫缺陷和环境因素共同作用所致的内分泌代谢紊乱性疾病，原因是胰岛β细胞损坏造成胰岛素相对或绝对分泌不足，严重威胁着人们的健康和生命;糖尿病治疗已成为21世纪医学面临的最大挑战。虽然随着现代生物医学技术的发展，外源性胰岛素能非常有效的控制血糖，但由糖尿病引起的慢性并发症和外源性胰岛素注射所带来的低血糖现象仍然明显影响着患者生活质量。胰岛移植是治愈糖尿病最有效的方法，但移植时所需的大量胰岛是制约胰岛移植广泛应用于临床的最大障碍。研究目的探索如何获得足够数量、高纯度和具有活性的胰岛细胞方法;把用不同方法分离纯化得到的胰岛细胞移植于同种糖尿病大鼠肾被膜下，比较胰岛移植物起效时间，为胰岛移植应用于临床提供必要的实验基础。材料和方法在相同实验条件下，用不同方法分离纯化SD大鼠胰岛，A、B组各6只采用胆总管逆行Hank’s液(含1mg／ml胶原酶V和2.5％甘油)原位灌注法取胰腺，C组6只直接取胰腺后用胶原酶V消化。A、C组胰岛用Ficoll间断密度梯度离心法纯化，B组胰岛用孔径为100μm滤网过滤纯化。计数直径50um以上胰岛细胞团;双硫腙(DTZ)染色判别胰岛纯度;台盼蓝染色胰岛估计存活率;移植物切片后，在显微镜下观察胰岛生长情况以判定胰岛功能。把A、B组获取的胰岛分别移植于D、E组链尿菌素(STZ)诱导的同种糖尿病大鼠肾被膜下，每组6只，在不使用任何免疫抑制剂的情况下评价移植物起效时间和被排斥时间。结果胰岛分离后纯化前收获量(个)、胰岛纯度(％)和存活率(％)，A组分别为562±59、43.7±4.0、97.5±1.5;B组分别为600±62、43.9±3.2、97.0±1.2;C组分别为346±41、43.1±2.6、96.3±1.3。纯化后胰岛收获量(个)、胰岛纯度(％)和存活率(％)，A组分别为352±33、83.7±2.1、91.0±1.3;B组分别为494±56、53.0±3.7、94.7±1.9;C组分别为236±24、80.6±2.4、82.9±2.2。结果表明：A组和B组用同样分离方法获取的胰岛在数量、纯度、活性三方面比较差异无显著性，相比C组用不同方法分离胰岛在收获数量上明显较多，差异有显著性(P均＜0.01)，纯度和活性无差异;A组和B组用不同方法纯化后再比较，在胰岛收获的数量、活性方面B组明显高于A组，差异有显著性(P均＜0.01)，纯度A组高于B组，差异有显著性(P＜0.01);C组经与A组用相同方法纯化后，与A组比，收获的胰岛数量少、活性低，差异有显著性(P均＜0.01)，纯度A组高于C组(P＜0.05)，C组高于B组(P＜0.01)。胰岛移植结果，A、B组胰岛细胞分别移植于D、E组糖尿病大鼠。移植后D组分别在48-72小时后血糖开始下降至正常，平均为64±9.8小时;E组分别在36-48小时后血糖开始下降至正常，平均为42±6.6小时，在移植物起效时间上E组明显早于D组，差异有显著性(P＜0.01);平均排斥时间：D组为第10.7±2.0天后，E组为第6.8±1.9天后，D组存活时间长于E组，差异有显著性(P＜0.01)。移植物经石蜡包埋切片处理，在显微镜下可见移植物内有形态结构完整的胰岛细胞团，细胞团内有毛细血管生长，与正常大鼠胰腺的胰岛细胞团相似。结论1．胰岛分离的理想方法是：采用22号或24号套管针逆行插入胆总管，原位灌注Hank’s液(含1mg／ml胶原酶V和2.5％甘油)，待胰腺充分膨胀后分离胰腺。2．用滤网过滤纯化胰岛相比用Ficoll间断密度梯度离心法纯化胰岛，收获量和活性均要高，移植物存活早、降血糖早，可作为今后胰岛移植的参考方法。

关键词：大鼠胰岛细胞分离纯化同种异体移植

孕激素和雌激素对AD模型大鼠海马神经保护作用

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孕激素和雌激素对AD模型大鼠海马神经保护作用

作者：黄检英浙江大学

学位级别：硕士

目的研究孕酮等药物治疗的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、5-羟色胺2A (5-ht2A)受体的表达改变及神经细胞凋亡的影响,探讨孕酮等对AD模型大鼠神经系统的保护作用机制。方法wistar大... 详细信息

目的研究孕酮等药物治疗的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、5-羟色胺2A (5-ht2A)受体的表达改变及神经细胞凋亡的影响,探讨孕酮等对AD模型大鼠神经系统的保护作用机制。方法wistar大鼠海马注射淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)并卵巢切除术建立大鼠AD模型,然后给予孕酮等药物治疗1个月;利用Morris水迷宫、免疫组织化学、免疫印迹、tunel染色及尼氏染色等方法,分析孕酮等药物对AD大鼠海马GFAP、ChAT、5-ht2A受体等相关指标的改变及神经细胞凋亡的影响。结果***水迷宫结果显示,孕激素组、雌激素组、雌激素+孕激素组、假手术组潜伏期较对照组短,孕激素组、雌激素组、假手术组与对照组之间差异显著(P<0.05),孕激素组潜伏期小于雌+孕激素组,并组间差异显著,有统计学意义(P<0.05)。2.免疫组织化学结果可见,孕激素组、雌激素组、雌激素+孕激素组,假手术组GFAP海马区免疫阳性细胞较对照组少,表达量少;ChAT、5-ht2A海马区阳性细胞较对照组多(P<0.05),孕激素组、雌激素组阳性细胞较孕+雌激素组表达量多(P<0.05)。3.免疫印迹结果显示,孕激素组、雌激素组、雌激素+孕激素组,假手术组GFAP灰度比值较对照组降低,孕激素组、雌激素组阳性细胞较孕+雌激素组低;ChAT、5-ht2A灰度比值增高(P<0.05),孕激素组、雌激素组阳性细胞较孕+雌激素组高。4TUNEL染色结果显示,孕激素组、雌激素组、雌激素+孕酮组,假手术组海马区凋亡细胞较对照组减少(P<0.05),孕+雌激素较孕激素、雌激素组少。5.尼氏染色结果表明,孕激素组、雌激素组、雌激素+孕酮组,假手术组海马区神经元数目较对照组多(P<0.05),孕+雌激素较孕激素组、雌激素组少。结论孕激素、雌激素能降低GFAP、升高ChAT、5-ht2A在大鼠海马内的表达,减缓神经细胞凋亡,维持神经元的存活率,起到改善AD大鼠学习记忆的功能,可以推断孕激素、雌激素对AD的治疗是有效的;雌激素、孕激素单独治疗较联合治疗更能降低GFAP表达,升高ChAT、5-ht2A受体表达,联合治疗可以减少神经元细胞凋亡数,提示雌孕激素联合治疗可以延缓AD的进程,但效果不及单独用药好。

关键词：孕激素雌激素阿尔茨海默病胶质纤维酸性蛋白 5-羟色胺2A 免疫组织化学技术 TUNEL 免疫印迹

DAHP下调NOS通路和TP上调PI3K/Akt通路的抗炎抗凋亡作用对脑缺血的神经保护机制研究

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DAHP下调NOS通路和TP上调PI3K/Akt通路的抗炎抗凋亡作用对脑缺血...

作者：孙雅谊浙江大学

学位级别：硕士

第一部分DAHP下调MCAO模型中NOS通路的抗凋亡神经保护作用目的：BH4,作为NOS的辅因子,参与调节NO的合成,且GTPCH-I为BH4体内从头合成的关键限速酶。本实验使用DAHP, GTPCH-1的抑制剂,通过来抑制BH4从头合成来下调NOS和NO的产生,进而研究... 详细信息

第一部分DAHP下调MCAO模型中NOS通路的抗凋亡神经保护作用目的：BH4,作为NOS的辅因子,参与调节NO的合成,且GTPCH-I为BH4体内从头合成的关键限速酶。本实验使用DAHP, GTPCH-1的抑制剂,通过来抑制BH4从头合成来下调NOS和NO的产生,进而研究DAHP对缺血性中风的神经保护机制。方法：DAHP预保护12h,术后24h麻醉大鼠取脑,运用核磁共振成像(MRI)技术、TTC染色、TUNEL试验、免疫组化、免疫荧光、western blot和RT-PCR技术,检测抗凋亡关键蛋白和抗炎因子表达,以及评估损伤后脑梗死与水肿范围。结果：作为BH4从头合成关键酶GTPCH-I的抑制剂,DAHP可有效下调MCAO/R后损伤区GTPCH-I,iNOS和nNOS的表达,但BH4不涉及损伤后早期eNOS合成。与MCAO损伤组相比,DAHP治疗能减少脑梗死和水肿范围的。TUNEL数据以及凋亡相关关键蛋白表达量,说明DAHP有抗凋亡的作用;同时,免疫组化和Western Blot数据均反映TP有下调NF-kB/COX-2/iNOS抗炎作用。结论：本实验中,DAHP可以通过稀释iNOS和nNOS由MCAO/R损伤引起的表达上调,并可能通过下调NF-kB/COX-2/iNOS炎症相关通路,来实现其抗凋亡的神经保护作用。第二部分TP通过PI3K/Akt介导体内外脑缺血缺氧再灌注模型的抗炎神经保护作用目的：探讨雷公藤甲素(TP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型和离体PC12细胞的在缺氧条件下的抗炎保护作用方法：在体实验,30只SD大鼠分为三组：假手术组、MCAO损伤组、MCAO+TP治疗组。TP12h预保护,大鼠脑缺血1.5h再灌注24h后,利用MRI技术和TTC染色测定脑梗死的位置和范围,同时参照Longa神经功能评分法,进行行为学检测。另外,通过TUNEL试验、免疫组化、免疫荧光、Western Blot和RT-PCR技术进行指标检测。离体实验,通过MTT筛选合适的TP给药浓度范围;不同剂量TP预保护24h,PC12细胞缺氧2h,培养12h后检测炎症反应与凋亡坏死情况,研究TP在体外治疗的作用机制并筛选最优给药剂量。结果：在体实验中,与MCAO损伤组相比：TTC染色显示,TP治疗能减少梗死范围;神经症状行为学评分显示,TP治疗可以减轻神经功能损伤;TUNEL实验显示,TP有抗凋亡的作用;同时,免疫组化与荧光、western blot和RT-PCR数据均反映TP的抗炎作用;检测PI3K/AKT通路关键蛋白表达pAkt/Akt,发现TP可明显上调MCAO/R损伤后Akt的磷酸化,起到促进存活抗凋亡的神经保护作用。离体实验中,TP治疗组有明显的抗炎抗凋亡坏死作用(与损伤组比较,P<0.05)且综合分析0.4ng/ml可以作为日后体外研究的TP的给药剂量。结论：雷公藤甲素预保护对大鼠MCAO模型有抗炎保护作用,且通过PI3K/AKT通路抗凋亡。同时,其对PC12细胞缺氧模型同样具有抗凋亡作用,且0.4ng/ml可作为有效给药剂量用于日后TP治疗相关研究。

关键词：脑缺血 DAHP NOS信号通路 TP PI3K/Akt通路抗炎和抗凋亡

金鱼受到外伤性应激后的神经病理变化及其干预治疗

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金鱼受到外伤性应激后的神经病理变化及其干预治疗

作者：李燕浙江大学

学位级别：硕士

金鱼(Carassius auratus),现今作为一种模式生物已经被广泛应用于神经生理领域的结构与功能研究。然而,用金鱼建立损伤模型,其外伤性损伤与行为学的关系,以及损伤是否会引起特定脑区某些神经递质发生神经病理性变化,依然鲜有文献报道。... 详细信息

金鱼(Carassius auratus),现今作为一种模式生物已经被广泛应用于神经生理领域的结构与功能研究。然而,用金鱼建立损伤模型,其外伤性损伤与行为学的关系,以及损伤是否会引起特定脑区某些神经递质发生神经病理性变化,依然鲜有文献报道。本实验旨在探讨外伤性应激对金鱼造成的关于平衡和运动的神经病理性影响。建立金鱼剪鳍的外伤性损伤模型后,我们对金鱼的行为学状况进行定量,发现5-HT受体表达量在术后小脑区域显著增加,在这种简单的脊椎动物中,证实了5-羟色胺能系统与行为控制之间存在关联。同时,在剪鳍金鱼中发现有显著的伴随caspase-8增加的细胞凋亡加剧现象,可能会对金鱼应激后的自我调节机制提供新的线索,提示自我修复过程可能涉及细胞凋亡途径。另外,我们也观察到术后金鱼的c-fos蛋白表达升高。总的来说,这些结果表明剪鳍的确能够诱导行为学水平和神经病理上的变化,说明金鱼可以作为一种研究体系来探讨创伤后应激的潜在机制,而且这种创伤模型进一步优化建立成PTSD模型也是可行的。此外,为了评估中枢系统药物是否可以在创伤性损伤后发挥神经保护作用,以及其可能的作用机制,我们分别对术后金鱼给予doxepin和SSRI治疗,通过检测与损伤相关的5-羟色胺能和凋亡等指标,以观察其是否会对该模型产生神经保护作用。研究发现,5-HT受体的下调和5-HT受体的上调,BAD蛋白水平也下降,但是C-fos蛋白水平没有变化,显示创伤模型的行为学及神经病理变化可以同过CNS药物得以部分改善,而这主要基于5-羟色胺能以及细胞凋亡进程的调节。然而,对doxepin以及SSRI治疗作用的深入研究有待继续,尤其是在行为学水平。

关键词：外伤性损伤 5-HT2a受体 5-HT2c受体 c-fos caspase-8 BAD 细胞凋亡多虑平选择性5羟色胺再吸收抑制剂

雷公藤甲素对体外氧糖剥夺损伤细胞模型保护作用的机制研究

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雷公藤甲素对体外氧糖剥夺损伤细胞模型保护作用的机制研究

作者：霍雪浙江大学

学位级别：硕士

背景脑卒中又称缺血性脑意外,被评为世界三大致死性疾病之一,具有高发病率、高致残率、高复发率和高死亡率等特点。在发病人群中脑血管病患者多为中老年人,目前研究发现发病年龄有年轻化的趋势。缺血性脑卒中是致死和致残的主要疾病,已... 详细信息

背景脑卒中又称缺血性脑意外,被评为世界三大致死性疾病之一,具有高发病率、高致残率、高复发率和高死亡率等特点。在发病人群中脑血管病患者多为中老年人,目前研究发现发病年龄有年轻化的趋势。缺血性脑卒中是致死和致残的主要疾病,已严重危害人类的健康和生活质量。本研究所关注的缺血性脑卒在脑血管疾病中约占70-80%[16]。我国每年新发脑卒中有200万例病人,每年死于脑卒中的患者约150万,是仅次于心脏病和癌症的第三位致死疾病。据预计脑血管病在未来一段时间对家庭和社会带来的精神和经济负担也日趋严重。因此,研究脑缺血的发病机制,致力于寻找和开发有效的预防和治疗药物成为医学研究关注的热点。雷公藤甲素Tripterygium wilfordiiHook.f.属于卫矛科雷公藤属植物,又称雷公藤内酯、雷公藤内酯醇,是中国传统中药的一种。六年前一位化学生物学家刘钧(Jun ***)博士和他在约翰霍普金斯大学医学院的同事们发现,用化学方式把葡萄糖附着到雷公藤甲素分子上能大幅改善雷公藤甲素在人类细胞和小鼠中的溶解度,让这种分子更可溶从而把它变成了一枚能够自动寻找癌细胞的“巡航导弹”。这种结构上的变化还减少了该药物对患者的副作,从此以后雷公藤甲素(Triptolide,以下简称为TP)被视为良好应用前景的中药。本研究根据其保护神经系统,抗炎,免疫调节的作用探究该药对于缺血性脑卒的神经保护机制。目的本研究目的在于通过建立细胞氧糖剥夺(OGD)损伤模型来模拟体外脑缺血过程。通过氧糖剥夺损伤模型结合TP预处理明确TP对细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法1.通过开展PC12细胞培养(引种自中国科学院上海细胞所,浙江大学卫生部传染病重点实验室传代保存)建立细胞氧糖剥夺模型。2.采用MTT筛选最佳药物浓度。设置不同浓度TP以及对照组,通过预处理TP后OGD造模以及恢复并结合MTT细胞活性检测推测毒性最小的药物浓度。3.台盼蓝染色法检测细胞存活率。利用活细胞能够排斥台盼蓝染料,而丧失细胞膜完整性的死细胞可以被台盼蓝染色的原理,检测被TP预处理的细胞死亡率。4.通过Hoechst33342染色判断初步凋亡的情况。*** blotting定量测定炎症和凋亡相关蛋白的表达。6.免疫荧光测定目标凋亡蛋白和炎症蛋白的表达。7.初步诱导正常人成纤维细胞,使之转化为多能干细胞,从而为脑缺血体内模型研究做准备。结果***法显示TP预处理对氧糖剥夺损伤的PC12具有一定保护作用,但处理浓度和时间需要严格把握,否则也会对细胞造成不可逆的损伤。2.台盼蓝染色显示PC12死细胞数量减少。***33342染色检测细胞凋亡,研究表明氧糖剥夺损伤后PC12细胞细胞凋亡率明显上升,低浓度的TP预处理后细胞凋亡率和对照组相比显著降低。*** Blotting结果显示氧糖剥夺造模后低浓度TP预处理实验组有抗凋亡蛋白表达的上调以及凋亡蛋白下调的趋势从而验证了其神经保护作用,同时炎症反应在高浓度TP预处理组也有明显下调,同时低浓度自噬的升高和高浓度组自噬作用降低。5.免疫荧光染色显示iNOS和TNF-α蛋白在氧糖剥夺损伤造模后都有降低的趋势。6.初步成功诱导皮肤成纤维细胞细胞到多能干细胞,为体外药物筛选模型的建立提供建模基础。

关键词：雷公藤甲素氧糖剥夺损伤 PC12 细胞凋亡多能干细胞成纤维细胞

SIRT1在皮质酮诱导的细胞应激模型中调控自噬的机制研究

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SIRT1在皮质酮诱导的细胞应激模型中调控自噬的机制研究

作者：姜羽婷浙江大学

学位级别：硕士

现代生活中人们遭遇到各种应激性事件时,机体内的下丘脑-垂体-肾上腺轴会被激活,促使肾上腺释放一种重要的糖皮质激素——皮质醇(啮齿动物中主要是皮质酮)。慢性应激会诱导糖皮质激素的持续释放并且引起许多严重的健康问题,例如情绪障碍... 详细信息

现代生活中人们遭遇到各种应激性事件时,机体内的下丘脑-垂体-肾上腺轴会被激活,促使肾上腺释放一种重要的糖皮质激素——皮质醇(啮齿动物中主要是皮质酮)。慢性应激会诱导糖皮质激素的持续释放并且引起许多严重的健康问题,例如情绪障碍,心血管疾病和自身免疫疾病等。许多研究表明皮质酮的神经毒性作用是通过增加氧化应激和细胞凋亡介导的。尽管已有研究证实SIRT1能够通过启动自噬从而对氧化应激和DNA损伤起到保护作用,但它和自噬在皮质酮诱导的应激中的作用还需进一步研究。本研究首先利用不同浓度的皮质酮对脊髓前角运动神经元瘤细胞进行不同时间的处理,通过CCK-8检测细胞活力以确定最佳的处理条件,从而建立细胞应激模型。然后,通过转染过表达和敲减质粒调控细胞内SIRT1的表达水平,同时利用免疫印迹,荧光定量PCR等方法检测皮质酮处理后细胞内自噬相关蛋白的表达情况,从而检测SIRT1在细胞应激条件下是如何调控自噬的。我们还利用TUNEL染色,检测SIRT1过表达细胞在皮质酮处理后的细胞凋亡水平,从而明确SIRT1在应激条件下对细胞凋亡的影响作用。我们的研究发现随着皮质酮浓度的增加,细胞活力逐渐下降,SIRT1和LC3BⅡ/Ⅰ的水平分别呈现剂量依赖性降低和增加。而SIRT1过表达可以抑制皮质酮诱导的自噬并且促进细胞凋亡。抑制SIRT1的表达则可以促进皮质酮诱导的自噬水平。这些发现能够帮助我们更好的了解SIRT1和自噬在慢性应激中发挥的作用。

关键词：皮质酮应激 SIRT1 自噬

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孕酮对卵巢去势大鼠的神经保护作用

孕酮对卵巢去势大鼠的神经保护作用

作者：王静浙江大学

学位级别：硕士

目的：妇女在绝经期后,激素丧失会使认知能力减退,有研究提示激素替代治疗(HRT)能减少痴呆发病的风险,改善脑部功能退化、延缓或预防AD的发生。雌激素和孕酮的保护作用已被广泛用于各种实验模型。本研究的目的是探讨孕酮对卵巢去势(OVX... 详细信息

目的：妇女在绝经期后,激素丧失会使认知能力减退,有研究提示激素替代治疗(HRT)能减少痴呆发病的风险,改善脑部功能退化、延缓或预防AD的发生。雌激素和孕酮的保护作用已被广泛用于各种实验模型。本研究的目的是探讨孕酮对卵巢去势(OVX)大鼠学习记忆的作用及其机制。方法：3月龄健康雌性SD大鼠60只。随机分为六组：正常组、卵切组、卵切+孕酮组、卵切+芝麻油组、假手术+孕酮组及假手术+芝麻油组。孕酮组皮下注射孕酮20mg/kg.芝麻油组皮下注射等体积的无菌芝麻油;以后每7天给药1次,共4次。给药3周后采用Morris水迷宫进行学习记忆能力检测,用免疫组化和Western Blot方法检测caspase-3、Bcl-2、5-HT-2A、GFAP和NF-κ Bp65蛋白在海马神经元中的表达水平,同时,用透射电镜和TUNEL分别观察大鼠脑中海马神经细胞的超微结构和细胞凋亡情况。结果：***水迷宫潜伏期结果显示,卵巢切除去势后逃避潜伏期明显延长(P<0.01)、平台次数明显减少(P<0.01),外源性孕酮使逃避学习成绩明显提高(P<0.01)、找到平台的次数稍有改善(P<0.05)。2.免疫组织化学结果可见,正常组、卵切+孕酮组和假手术组的GFAP免疫反应强度比卵切组、卵切+芝麻油组弱(P<0.01),免疫反应阳性细胞数少于卵切组,卵切+芝麻油治疗组,有统计学意义。正常组、卵切+孕酮组和假手术组的Caspase-3免疫反应强度比卵切组,卵切+芝麻油治疗组弱(P<0.01)。正常组、卵切+孕酮治疗组和假手术组的5-HT-2A免疫反应强度比卵切组,卵切+芝麻油治疗组强(P<0.01)。正常组、卵切+孕酮治疗组和假手术组的Bcl-2免疫反应强度比卵切组、卵切+芝麻油治疗组强(P<0.05)。正常组、卵切+孕酮治疗组和假手术组的NFkBp65免疫反应强度比卵切组,卵切+芝麻油治疗组弱(P<0.01)。3. western结果显示,卵切组与正常组相比,GFAP灰度值较高(p=0.013),卵切+孕酮组与卵切组比较,灰度值明显低(p=0.012)。卵切组与正常组比较,Bcl-2的灰度值明显低(p=0.000),卵切+孕酮组与卵切组、卵切+芝麻油组比较,灰度值明显强,分别p=0.000和0.000。卵切组与正常组比较,caspase-3的灰度值明显高(p=0.000),卵切+孕酮组与卵切组、卵切+芝麻油组比较,灰度值明显低,分别p=0.001和0.016。卵切组与正常组比较,5-HT-2A的灰度值明显低(p=0.000),卵切+孕酮组与卵切组、卵切+芝麻油组比较,灰度值明显强,分别p=0.000和0.000。卵切组与正常组比较,NFkBp65的灰度值明显高(p=0.009),卵切+孕酮组与卵切组比较,灰度值低(p=0.002)。4. TUNEL染色显示卵切+孕酮,假手术组的凋亡细胞比卵切组明显少(p<0.01).5.电镜结果显示：正常组,非卵切+孕酮组和非卵切+芝麻油组：突触数量比较多,结构清晰(突触前膜和突触后膜清晰,两膜之间有明显的突触裂即突触间隙),突触后膜有致密的电子物质,还可见很多线粒体,并且细胞器结构完整。卵切组和卵切+芝麻油组：可见突触部分变性,数目减少,突触间隙增厚,突触后膜致密物质变弱,细胞器变形,突触前终末内线粒体混浊肿胀。卵切+孕酮组,突触后膜的致密电子物质增强,细胞器完整。结论：孕酮能明显缩短潜伏期,增强空间探索能力,降低GFAP、caspase-3和NFkBp65,升高Bcl-2、5-HT-2A在大鼠海马内的表达,减缓神经细胞凋亡,维持神经元的存活率,起到改善大鼠学习记忆的功能,提示孕酮在改善脑部功能退化、延缓或预防AD发生等方面具有治疗作用。

关键词：孕酮卵巢切除凋亡神经保护认知功能

大鼠急性肺损伤模型的肺纤维化、血管增生及VEGF表达的研究

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大鼠急性肺损伤模型的肺纤维化、血管增生及VEGF表达的研究

作者：吕寒冰浙江大学

学位级别：硕士

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)的早期阶段，是一种严重而迅速的肺微血管损伤。经过几十年的不懈努力，ARDS的死亡率有所改善，但仍有大约60％的病人在治疗一周后... 详细信息

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)的早期阶段，是一种严重而迅速的肺微血管损伤。经过几十年的不懈努力，ARDS的死亡率有所改善，但仍有大约60％的病人在治疗一周后病情毫无改善甚至恶化。几乎所有的这些病人在存活2周以上后用生化检测、组织学方法证实双肺有胶原蛋白沉积和纤维化。纤维化加重了缺氧并导致了多器官衰竭，并使这组病人的死亡率高达80％。所以，本实验采用大鼠急性肺损伤模型，研究其血管增生、肺纤维化情况及血清中血管内皮生长因子表达情况，以期为临床ARDS的治疗过程中早期抑制血管增生、预防肺纤维化提供依据。研究方法： 1．大鼠急性肺损伤模型的复制及评价：SD大鼠随机分为正常对照组和油酸损伤组，分别从股静脉注入生理盐水和油酸。油酸损伤组分别在损伤1天、4天、7天后各处死一批，留取血清，并将肺组织制成蜡块。肺组织切片HE染色后观察炎症反应。 2．肺纤维化评分：肺组织Masson改良法胶原染色后，进行肺纤维化评分。浙江大学硕士学位论文2(X)43.肺微血管密度测定:肺组织8因子相关抗原免疫组化染色后，在微血管染色阳性最密集的区域，200倍镜下连续选取5个视野，计数其内阳性微血管数。并以这5个数值的平均值作为该样本的微血管密度。4.血清VEGF含量测定:用ELISA法测定大鼠血清VEGF浓度。5.各组实验数据采用SPSSll.O统计软件进行t检验，方差检验的统计分析。结果:1.大鼠急性肺损伤模型的评价:油酸损伤组大鼠股静脉注入油酸后立即出现呼吸窘迫症状，动脉血氧分压下降，肺组织充血、水肿明显。2.肺纤维化评分:油酸损伤1天组肺组织无明显纤维化，但在肺泡间隔可见到少量的绿染物质。损伤4天组和7天组肺纤维化明显，两组间比较可发现7天组纤维化程度略轻，但无统计学上的差异。3.肺微血管密度:油酸损伤4天组微血管密度增加(P<住05)，损伤1天和7天组微血管密度无明显改变。4.血清VEGF含量:油酸损伤1天、7天组大鼠血清VEGF含量较正常对照组明显升高(P<0 .05)，损伤组之间及损伤4天组与正常对照组之间无明显差异。结论:1.急性肺损伤1天后即有胶原蛋白沉积;损伤4天后肺中度纤维化，纤维化灶大量形成;损伤7天时纤维化程度较损伤4天时略有减轻。2.急性肺损伤会引起血管增生，在损伤4天后微血管密度升高明显，损伤7天后下降。3.血清VEGF的含量在急性肺损伤早期(24小时内)即明显上升，24小时后至l周内仍有上升趋势，但非常缓慢。4.在急性肺损伤早期抑制血管和胶原纤维增生是治疗ARDS的一项新策略。

关键词：急性肺损伤 VEGF表达肺纤维化血管增生纤维化程度蛋白沉积 distress 呼吸窘迫症密度测定损伤组

SIRT1在氧糖剥夺/复供诱导的细胞损伤中调控自噬和凋亡的作用研究

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SIRT1在氧糖剥夺/复供诱导的细胞损伤中调控自噬和凋亡的作用研究

作者：任倩楠浙江大学

学位级别：硕士

缺血性脑卒中是因供血动脉狭窄或闭塞导致供血不足,而引起脑组织坏死的神经系统疾病。溶栓是当前治疗缺血性脑卒中较为有效的临床手段,而恢复血流引起的再灌注损伤是缺血性脑卒中炎症反应和神经元死亡的重要诱因。SIRT1作为去乙酰化酶,... 详细信息

缺血性脑卒中是因供血动脉狭窄或闭塞导致供血不足,而引起脑组织坏死的神经系统疾病。溶栓是当前治疗缺血性脑卒中较为有效的临床手段,而恢复血流引起的再灌注损伤是缺血性脑卒中炎症反应和神经元死亡的重要诱因。SIRT1作为去乙酰化酶,在再灌注损伤中发挥重要的神经调控作用,但它在氧糖剥夺/复供（OGD/R）模拟的缺血/再灌注（I/R）损伤中对自噬和凋亡的调控机制还需进一步研究。本研究先对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（PC12）进行不同时间氧糖剥夺处理,复供24小时后进行CCK8检测细胞活性以确定合适的氧糖剥夺时间。通过转染SIRT1过表达和敲减质粒来调控细胞内的SIRT1表达水平。利用免疫印迹法和免疫荧光法检测细胞内自噬相关蛋白的表达水平,从而明确SIRT1在细胞OGD/R损伤中对自噬的调控作用。利用TUNEL染色法和免疫印迹法检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白的表达水平,从而明确SIRT1在OGD/R损伤中是如何调节细胞凋亡的。本研究发现,氧糖剥夺4小时后复供24小时可成功构建OGD/R诱导的细胞损伤模型。上调SIRT1促进OGD/R诱导的自噬相关蛋白（Beclin-1和LC3）表达,降低TUNEL 阳性细胞数,抑制细胞凋亡;下调SIRT1显著抑制OGD/R诱导的自噬相关蛋白（P62、Atg5和LC3）表达,促进细胞凋亡。这些发现表明了 SIRT1在OGD/R诱导的细胞损伤中可能通过调控自噬和凋亡发挥神经保护作用,帮助我们更深入地理解SIRT1、自噬和凋亡在OGD/R诱导的细胞损伤中的作用,从而为I/R脑损伤的临床治疗提供新的研究思路。

关键词：氧糖剥夺/复供缺血/再灌注损伤 SIRT1 自噬凋亡

雷公藤甲素对局灶性脑缺血—再灌注损伤大鼠的抗炎保护作用

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雷公藤甲素对局灶性脑缺血—再灌注损伤大鼠的抗炎保护作用

作者：白石浙江大学

学位级别：硕士

目的：探讨雷公藤甲素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。方法：采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型。取80只雄性SD大鼠,随机分为5组：正常对照组、假手术组、DMSO溶剂对照组、MCAO组和雷公藤甲素治疗组;大鼠脑缺血... 详细信息

目的：探讨雷公藤甲素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。方法：采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型。取80只雄性SD大鼠,随机分为5组：正常对照组、假手术组、DMSO溶剂对照组、MCAO组和雷公藤甲素治疗组;大鼠脑缺血90min再灌注24h后,利用核磁共振成像确定脑梗死的部位和面积。同时参照Longa的方法对SD大鼠做神经功能评分,用TTC染色来确定脑梗死体积。同时采用TUNEL染色来检测神经元凋亡情况,免疫组化法测定GFAP、COX-2、iNOS、NF-κB的表达情况,同时利用RT-PCR测定各组大鼠iNOS, COX-2mRNA表达量的变化,分析雷公藤甲素治疗对大鼠脑缺血的神经保护作用机制。结果：与MCAO组相比,雷公藤甲素治疗能够降低脑水肿,减少梗死体积,减轻神经功能损伤。TUNEL染色结果显示雷公藤甲素可以减少脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡。雷公藤甲素能够抑制胶质细胞活化。免疫组织化学结果显示,MCAO组大鼠可见大量COX-2、iNOS以及NF-κB染色阳性的细胞,而雷公藤甲素治疗组的COX-2、iNOS以及NF-κB的阳性细胞数显著降低。RT-PCR结果也显示雷公藤甲素治疗组的COX-2、iNOS mRNA的表达水平比MCAO组显著下降。结论：雷公藤甲素对大鼠脑缺血-再灌注损伤有抗炎保护作用

关键词：雷公藤甲素脑缺血 TUNEL 神经炎症环氧合酶-2 诱导型一氧化氮合酶核转录因子