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甲状旁腺激素通过Orai1介导的钙信号促进人脐静脉内皮细胞迁移和增殖

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甲状旁腺激素通过Orai1介导的钙信号促进人脐静脉内皮细胞迁移和...

作者：王淑豪安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:继发性甲状旁腺亢进(SHPT)是患者心血管事件(CVD)和死亡的独立危险因素,严重影响患者的生存率和生活质量。甲状旁腺激素(PTH)是细胞外钙和磷水平的主要内分泌调节因子。钙库操纵性钙离子进入(Stored-Operated Calcium Entry,SOCE)... 详细信息

背景:继发性甲状旁腺亢进(SHPT)是患者心血管事件(CVD)和死亡的独立危险因素,严重影响患者的生存率和生活质量。甲状旁腺激素(PTH)是细胞外钙和磷水平的主要内分泌调节因子。钙库操纵性钙离子进入(Stored-Operated Calcium Entry,SOCE)主要在非兴奋细胞中调节Ca的进入,Orai1是SOCE的主要组成成分。SOCE在CVD的发生和发展中起着关键作用,SHPT相关的内皮功能障碍可能与钙稳态紊乱有关,具体机制仍不清楚。目的:主要研究PTH对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用和相关机制,以及钙库操纵性钙离子进入(SOCE)和NFAT通路对内皮功能障碍的影响。充分认识SHPT相关心血管疾病发病机制,发现新的预防和治疗靶点。方法:(1)蛋白质印迹法(Western Blot)和CCK8细胞增殖毒性实验分别检测PTH对HUVECs中SOCE相关蛋白表达水平和增殖的影响(2)钙成像和CCK8细胞增殖毒性实验分别检测Orai1蛋白在SOCE介导的钙内流和PTH处理的HUVECs增殖活性中的作用(3)RNA测序技术(RNA-Seq)检测经PTH处理与未经PTH处理的HUVECs之间的差异表达基因。并用westernblot和定量RT-PCR对其中一些基因进行了确认。(4)Western blot和免疫荧光技术检测用BTP2、Cs A、W7和Orai1 si RNA转染处理HUVECs后,PTH对HUVECs NFAT核易位的影响。(5)Western blot检测用BTP2、Cs A、W7和Orai1 si RNA转染对PTH处理的HUVECs中COL1A1表达水平的影响。(5)细胞迁移和CCK8细胞增殖毒性实验分别检测COL1A1在PTH处理的HUVECs中是否调节细胞的迁移和增殖结果:(1)与对照组相比,PTH(100 p M)处理HUVECs 24小时后,Orai1和STIM1的蛋白表达水平显著升高,但Orai2、Orai3的蛋白表达水平不明显,HUVECs的增殖能力增加。(2)PTH通过调节Orai1增加了HUVECs的SOCE和增殖;(3)转录组测序发现PTH处理的HUVEC中有1655个差异表达基因(823个上调和832个下调),京都基因和基因组百科全书(KEGG)路径分析了粘附信号和两个关键基因COL1A1和NFATC1表达水平的变化,并通过免疫蛋白印迹和定量RT-PCR进行验证;(4)Orai1参与了PTH诱导的NFATC1核易位的调节;(5)PTH促进HUVECs中COL1A1的表达是通过钙调神经非依赖性信号和Orai1通道之间的相互作用来实现的;(6)PTH通过增强COL1A1表达来调节细胞迁移和HUVECs的增殖。结论:总之,本研究首次证明PTH增强了HUVECs中Orai1蛋白的表达和Orai1介导的SOCE活性,导致NFATC1的核移位,从而增强COL1A1的表达和COL1A1介导的HUVECs的迁移和增殖。我们的研究结果表明,Orai1及其下游的钙调素/钙调神经磷酸酶/NFATC1/COL1A1信号通路可能在PTH诱导的内皮功能障碍中发挥重要作用,可能是预防或治疗SHPT诱导的CVD的关键潜在治疗靶点。

关键词：继发性甲状旁腺功能亢进甲状旁腺激素钙库操纵的的Ca2+进入人脐静脉内皮细胞 COL1A1 NFAT

内镜辅助下改良环甲膜入路在支撑喉镜暴露困难患者喉手术中的应用

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内镜辅助下改良环甲膜入路在支撑喉镜暴露困难患者喉手术中的应用

作者：余建军安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨内镜辅助下改良环甲膜入路喉手术在困难气道患者中的应用价值,并对其有效性、安全性进行评估。方法:选取自2017年5月至2019年10月在安徽省舒城县人民医院耳鼻咽喉科头颈外科住院并进行喉部手术的患者为研究对象,包括声带息肉... 详细信息

目的:探讨内镜辅助下改良环甲膜入路喉手术在困难气道患者中的应用价值,并对其有效性、安全性进行评估。方法:选取自2017年5月至2019年10月在安徽省舒城县人民医院耳鼻咽喉科头颈外科住院并进行喉部手术的患者为研究对象,包括声带息肉、任克氏水肿、喉乳头状瘤及早期喉癌（T1、T2）等,共376例。术前对所有患者进行评估,包括测量上下切牙间距（CM）、颈围（CM）、头颈屈伸度、体质量指数（BMI）、下颏至甲状软骨间距离（CM）和Mallampati分级、Yamamoto分级及咬上唇试验,以及其他术前常规检查,将上下切牙间距小于4cm,颈围大于40cm,颈部后仰角小于30度,体质量指数BMI大于25,下颏至甲状软骨间距离小于6 cm,Mallampati分级III级或以上,Yamamoto分级III级或以上,咬上唇试验III级作为支撑喉镜暴露困难的危险因素并对其进行系统分析,将存在支撑喉镜暴露困难危险因素的患者进行重点准备与沟通,在常规支撑喉镜手术不能完成手术,且不适合纤维电子喉镜下切除的广基病变时,立即改用内镜辅助下改良环甲膜入路进行手术。376例患者全部采用全身麻醉,在足量肌松的条件下插入支撑喉镜进行手术,共有19例出现支撑喉镜下声门暴露困难,其中7例声带息肉患者,5例采用角度镜加压喉勉强暴露,用自行加工弯曲后的翘头钳切除息肉,2例较小息肉改为电子喉镜下切除,其余12例采用改良环甲膜入路完成手术,其中任克氏水肿3例,喉乳头状瘤2例,声带白斑3例,喉鳞状细胞癌2例,巨大声带息肉1例,声带囊肿1例。手术方法为支撑喉镜暴露失败后,给患者垫肩,使头轻度后仰（颈椎病患者不强求体位）,定位环甲膜后,平环甲膜上下正中横行切开皮肤及皮下组织,切口约2cm;暴露颈白线,于颈白线处正中切开,暴露环甲膜上颈深筋膜;处理环甲膜血管:于环甲膜水平正中线二侧0.5-1cm,缝扎环甲血管,同时于环状软骨上缘下部正中缝合一针,缝扎环甲血管与甲状腺血管形成交通支;切开环甲膜及完成手术:用电刀于正中线切开环甲膜表面的颈深筋膜,并沿环甲膜表面向两侧分离或切除部分颈深筋膜,暴露环甲膜,最后用刀片平环甲膜上下正中横行切开约1cm（根据需要可适当延长）,用两齿小号中耳乳突撑开器适当撑开切口,根据暴露情况选择45°或70°鼻内窥镜自下向上伸入,显像系统监视下用等离子或喉显微器械完成手术;切口缝合:术毕环甲膜缝合两针,皮肤及皮下组织可以不一期缝合,切口辅料加压包扎,一般一周后自愈,年轻患者可以在确定咳嗽不漏气后再对位缝合皮肤切口。结果:12例患者均顺利完成手术,术中视野暴露满意,术后无一例出现出血、窒息及声门、声门下狭窄,声音恢复满意。结论:支撑喉镜的暴露与上下切牙间距、颈围、头颈屈伸度、体质量指数（BMI）、下颏至甲状软骨间距离和Mallampati分级等有明显相关性,可以用于预测支撑喉镜手术发生困难的概率,环甲膜入路不作为喉部手术的常规选择,但对于常规入路暴露困难的困难气道患者,与软管镜、弧形镜及喉裂开等手术方式相比较,在声门及声门下广基病变的治疗上,明显优于其他手术方式,对于常规手术入路不能暴露的患者是一种良好的选择,值得临床推广。

关键词：环甲膜切开支撑喉镜声门暴露

以电刺激穴位治疗为主的序列疗法治疗慢性原发性耳鸣的临床疗效分析

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以电刺激穴位治疗为主的序列疗法治疗慢性原发性耳鸣的临床疗效分...

作者：袁锦锦安徽医科大学

学位级别：硕士

目的探讨以电刺激穴位治疗为主的序列疗法对慢性原发性耳鸣的治疗效果及影响疗效的可能因素。方法选择105例慢性原发性耳鸣患者,根据随机数表均分到各组中。A组用银杏叶片和甲钴胺胶囊治疗。B组在A组的基础上,同时予以自控无创电刺激穴... 详细信息

目的探讨以电刺激穴位治疗为主的序列疗法对慢性原发性耳鸣的治疗效果及影响疗效的可能因素。方法选择105例慢性原发性耳鸣患者,根据随机数表均分到各组中。A组用银杏叶片和甲钴胺胶囊治疗。B组在A组的基础上,同时予以自控无创电刺激穴位治疗仪治疗。C组在B组的基础上,第三周开始加用激素治疗1周。三组疗程均为1月。治疗前后均进行焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、睡眠状况自评量表(SRSS)、耳鸣致残量表(THI)、视觉模拟评分法(VAS)和耳鸣严重程度评估量表(TEQ)的评估。根据患者治疗前后各量表的评估情况及治疗结束后1个月和3个月的随访情况,评估疗效。结果1一般情况各组平均年龄、病程、声导抗分型、听力曲线类型、音调分级、耳鸣侧别、平均听阈分布差异均无统计学意义,P>0.05。2各量表评估情况2.1组间比较:⑴治疗前:THI、SDS、SAS、TEQ分级和VAS、SRSS得分在三组之间的差异均不具有统计学意义,P>0.05。⑵治疗后:A组与C组及B组与C组之间的TEQ分级差异具有统计学意义,P0.05。2.2组内比较:每组治疗前后TEQ、THI、SDS、SAS分级和SRSS、VAS得分差异均有统计学意义,P0.05。4随访情况A组治疗结束1个月总有效率为22.9%;治疗结束3个月,总有效率为20.7%。B组结束1个月、3个月总有效率均为42.7%。C组治疗结束1个月、3个月总有效率均为77.1%。可知,B组和C组治疗效果稳定,而A组疗效随时间进展逐渐下降。结论以电刺激穴位治疗为主的序列疗法治疗慢性原发性耳鸣是安全、有效的,具有进一步研究与实践的价值。此外,治疗疗效与患者性别、年龄段、耳鸣侧别、声导抗类型、平均听阈、听力曲线类型及耳鸣音调频率均无关。

关键词：慢性原发性耳鸣药物电刺激穴位治疗临床研究

术前颈胸增强CT和（或）CTA在颈根部不同肿瘤手术方式选择中的意义

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术前颈胸增强CT和（或）CTA在颈根部不同肿瘤手术方式选择中的意义

作者：吴钟凯安徽医科大学

学位级别：硕士

目的探讨术前颈胸增强CT和（或）CTA在颈根部不同肿瘤手术方式选择的意义,评估手术安全性,选择合适的手术入路,最大限度减少并发症。方法对于我科近15年来住院手术的51例侵犯颈根部的占位性病变病人的相关病例信息进行分析,其中良性病... 详细信息

目的探讨术前颈胸增强CT和（或）CTA在颈根部不同肿瘤手术方式选择的意义,评估手术安全性,选择合适的手术入路,最大限度减少并发症。方法对于我科近15年来住院手术的51例侵犯颈根部的占位性病变病人的相关病例信息进行分析,其中良性病变24例,恶性肿瘤27例。术前行增强CT和（或）CTA检查,了解肿瘤和/或复发灶或转移灶与颈根的无名动静脉、颈内动静脉、锁骨下动静脉、甲状颈干以及椎动脉的关系,根据术前增强CT和（或）CTA分别采用单纯颈部切口入路、内镜辅助下颈部切口入路、颈胸联合（胸锁关节切除、部分锁骨、胸骨柄切除或胸骨正中裂开）入路切除肿瘤。结果患者随访6个月到10年,24例良性病变全部完整切除。27例侵及颈根部的恶性占位有22例被完全切除,3例行次全切除术,2例姑息减瘤切除,无术中死亡病例;本组27例恶性肿瘤中术后出现发音较术前明显嘶哑2例;甲状旁腺因手术中误切至甲状旁腺激素分泌永久性减少1例,术后1年死于并发症;锁骨下静脉破损1例,锁骨下动脉损伤1例,术中缝扎封闭后无明显出血;乳糜漏2例,术后及时负压吸引和加压后痊愈;胸膜顶（颈胸膜）损伤1例,术中行缝合修复后未见气胸等并发症;臂丛神经和膈神经损伤各1例。1例胸骨正中裂开后纵膈感染,3个月治疗,痊愈。结论对不同性质、不同类型的颈胸交界处肿瘤应根据术前颈胸增强CT和（或）CTA的结果,采用恰当的径路完全暴露病变组织,分离并保护关键结构同时有效处

关键词：计算机断层扫描血管造影头颈部肿瘤颈根部

Orai3介导的钙库操纵性钙内流对继发性甲状旁腺功能亢进患者甲状旁腺激素释放的影响

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Orai3介导的钙库操纵性钙内流对继发性甲状旁腺功能亢进患者甲状...

作者：林章莹安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）是慢性肾脏病的常见并发症,主要表现为甲状旁腺激素（PTH）分泌过多和低钙血症。磷酸盐积累,FGF23水平的升高,活性维生素D产生的减少,以及低钙血症,PTH分泌增加是甲状旁腺增生的持续刺激因素。在... 详细信息

背景:继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）是慢性肾脏病的常见并发症,主要表现为甲状旁腺激素（PTH）分泌过多和低钙血症。磷酸盐积累,FGF23水平的升高,活性维生素D产生的减少,以及低钙血症,PTH分泌增加是甲状旁腺增生的持续刺激因素。在慢性肾脏病中晚期,1,25（OH）D3水平降低和PTH分泌过多,增加了心血管事件的发生和死亡率的增加。继发性甲旁亢症的机制复杂。甲状旁腺与钙互相影响,1,25（OH）D3缺乏间接引起PTH合成增多。PTH可作用于骨、肾及肠道,来介导血清钙的升高;然而PTH还增加了FGF23的产生,从而增强了磷尿,减少了肾中维生素D的产生。Orai3是Ca2+通道蛋白Orai家族的一员,由于其在介导钙库操纵的钙内流（store-operated calcium entry,SOCE）中的作用而受到广泛关注。Orai家族最早被认为是SOC或称钙释放激活钙离子通道（Ca2+release-activated Ca2+channel,CRAC）的构成蛋白,是4次跨膜蛋白,包括Orai1、Orai2和Orai3一种选择性钙通道,在肿瘤的发病、心血管疾病以及免疫疾病中发挥重要作用,而Orai3在继发性甲旁亢症中的作用尚不明确。目的:（1）观察甲状旁腺细胞中,Orai3是否介导钙库操纵性钙内流（2）观察Orai3对PTH合成和分泌的影响方法:（1）转录组测序（RNA-seq）对获得的对照组和实验组的甲状旁腺用高通量测序进行测序分析,反映出其RNA的表达水平。（2）蛋白免疫印迹用于检测SHPT患者甲状旁腺中Orai3的蛋白水平;用lip3000将特异性Orai3si RNA转染进入原代甲状旁腺细胞中后,检测Orai3 si RNA对Orai3蛋白的敲低效率。（3）钙成像用于检测Orai3通道对甲状旁腺细胞中钙信号的影响,以及用Orai3 si RNA敲低Orai3蛋白水平后钙信号的变化。（4）酶联免疫吸附实验人甲状旁腺激素相关蛋白（PTHr P）酶联免疫吸附测定试剂盒按双抗体夹心ELISA法检测PTH水平。（5）Orai3敲除鼠检测Orai3基因敲除大鼠血清PTH水平来验证Orai3表达减少对PTH水平的影响。结果:（1）从转录组测序及数据分析及western blot结果来看,SHPT患者的甲状旁腺细胞Orai3的表达明显高于对照组。（2）甲状旁腺细胞中,转染特异性小干扰RNA敲低Orai3,Orai3蛋白表达水平显著被抑制,钙库操纵性钙内流被显著抑制,（3）甲状旁腺细胞中,转染特异性小干扰RNA敲低Orai3,PTH释放明显减少。（4）Orai3敲除鼠血液中的PTH水平显著降低。结论:SHPT的甲状旁腺中,Orai3的表达水平升高。Orai3介导甲状旁腺细胞中的钙库操纵性钙内流且影响PTH的分泌。Orai3表达水平及其介导的钙信号是甲状旁腺激素释放的潜在机制,Orai3在继发性甲旁亢症的发生发展中可能发挥着重要作用。

关键词：继发性甲状旁腺功能亢进症 Orai3 钙信号甲状旁腺激素

术前NLR、PLR、CRP与甲状腺乳头状癌患者临床特征的关联及其对患者术后疗效的预判价值

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术前NLR、PLR、CRP与甲状腺乳头状癌患者临床特征的关联及其对患...

作者：赵小康安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:探索术前炎症相关指标(NLR、PLR、CRP)与甲状腺乳头状癌患者临床特征的关联及其对患者术后疗效的预判价值。方法:收集2010年1月—2011年12月间在本院手术治疗的200例甲状腺乳头状癌患者的病例资料,所有病例均通过纳入标准和排除标... 详细信息

目的:探索术前炎症相关指标(NLR、PLR、CRP)与甲状腺乳头状癌患者临床特征的关联及其对患者术后疗效的预判价值。方法:收集2010年1月—2011年12月间在本院手术治疗的200例甲状腺乳头状癌患者的病例资料,所有病例均通过纳入标准和排除标准的筛选,根据患者术前外周静脉血NLR、PLR、CRP值,采用ROC曲线,将病例资料分为低NLR组(NLR≤3.1)和高NLR组(NLR>3.1)、低PLR组(PLR≤135)和高PLR组(PLR>135)、低CRP组(≤23)和高CRP组(>23)。比较术前NLR、PLR、CRP三者值及高组和低组与甲状腺乳头状癌患者临床特征的关系;比较术前NLR、PLR、CRP三者值的高组和低组与患者术后无复发生存情况,绘制生存曲线,探究术前NLR、PLR、CRP是否为影响甲状腺乳头状癌患者术后无复发生存的独立危险因素,能否预判术后疗效。结果:1、在肿瘤>1cm、患者年龄≥45岁、有转移的甲状腺乳头状癌患者中,术前分别具有较高水平的NLR、PLR、CRP值;且术前具有较高水平NLR、PLR、CRP值的患者中,TNM分期III-IV期的比例较高。2、低NLR患者无复发生存率为78.1%,而高NLR患者的无复发生存率为56.8%,低NLR组术后无复发生存率明显高于高NLR无复发生存率,组间差异经Log-rank检验发现有统计学差异(X=8.65,P=0.004)。3、低PLR组患者无复发生存率为79.8%,而高PLR患者的无复发生存率为51%,低PLR组术后无复发生存率明显高于高PLR无复发生存率,组间差异经Log-rank检验发现有统计学差异(X=6.89,P=0.001)。4、低CRP组患者无复发生存率为78.5%,而高CRP患者的无复发生存率为50.2%,低CRP组术后无复发生存率明显高于高CRP无复发生存率,组间差异经Log-rank检验发现有统计学差异(X=9.12,P=0.005)。结论:术前NLR、PLR、CRP值分别与甲状腺乳头状癌患者的肿瘤大小、年龄、肿瘤转移等临床特征相关,且均与甲状腺乳头状癌患者肿瘤TNM分期相关,且三者值分别与以上临床特征呈正相关关系。术前NLR、PLR、CRP对甲状腺乳头状癌患者术后无复发生存具有预测价值,可预判术后疗效;术前低NLR、低PLR、低CRP值预示着患者预后良好,术后疗效更佳。

关键词：甲状腺乳头状癌 PLR NLR CRP 临床特征无复发生存率

TERT在喉癌组织中的免疫组化表达及其临床意义

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TERT在喉癌组织中的免疫组化表达及其临床意义

作者：沈海龙安徽医科大学

学位级别：硕士

目的喉癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤,喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)占喉癌的90%以上。喉癌的5年生存率在过去40年里从66%下降到63%,因此对于喉癌的早期诊断和治疗十分重要。喉癌的特定生物标志物有助于喉癌的... 详细信息

目的喉癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤,喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)占喉癌的90%以上。喉癌的5年生存率在过去40年里从66%下降到63%,因此对于喉癌的早期诊断和治疗十分重要。喉癌的特定生物标志物有助于喉癌的诊断、治疗及判断预后,但目前仍缺乏临床上广泛认可和使用的生物标志物。我们想要评估端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)在LSCC中的表达及其与肿瘤侵袭和淋巴结转移的关系,以求发现新的喉癌标志物。方法我们收集了从2011年3月5日至2013年12月20在安徽医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科手术的64位经病理确诊为喉癌患者的标本。我们共收集了64例喉癌组织及其对应的癌旁组织。通过免疫组织化学方法检测TERT蛋白在喉癌组织及癌旁组织中的表达状况,采用Image-Pro Plus 6.0软件计算细胞染色强度的平均光密度值,在选定的面积一定时,平均光密度值越大,表示蛋白表达越强。用SPSS19.0分析TERT在不同组别中的表达差异,并根据对患者的5年随访情况进行生存分析。结果我们发现TERT蛋白主要在细胞质中表达,表现为棕黄色颗粒弥漫性分布,同时在细胞核中也有少量表达。TERT在喉癌组织中的表达强度明显高于对应的癌旁组织,差异有统计学意义(t=16.58,p<0.05);喉癌组织中吸烟组TERT表达水平高于不吸烟组,差异具有统计学意义(t=2.06,p<0.05);喉癌组织中饮酒组TERT表达水平高于不饮酒组,差异具有统计学意义(t=2.66,p<0.05);喉癌组织中高分化组、中分化组和低分化组的TERT表达量逐渐增高,三个组别之间的差异具有统计学意义(F=20.50,p<0.05);喉癌组织中临床分期为III+IV期组的TERT表达量明显高于I+II期组,二者差异具有统计学意义(t=5.22,p<0.05);喉癌组织中淋巴结转移阳性组TERT表达水平明显高于淋巴结转移阴性组,二者差异具有统计学意义(t=6.88,p<0.05)。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,TERT表达≥P50的死亡率(78.18%)明显高于TERT表达

关键词：端粒酶逆转录酶喉鳞状细胞癌免疫组化生物标志物