检索结果-南通市图书馆

作者：蒋震泸州医学院

学位级别：硕士

目的:探讨两种中药方剂对SLE患者PBMC的凋亡率、IFN-γ、IL-6、IL-10及sFas水平的影响及意义。方法:采用密度离心法分离SLE患者PBMC,在药物干预下培养48小时,用AnnexinV-FITC流式细胞仪技术检测PBMC凋亡率的变化,用ELISA法检测上清液中I... 详细信息

目的:探讨两种中药方剂对SLE患者PBMC的凋亡率、IFN-γ、IL-6、IL-10及sFas水平的影响及意义。方法:采用密度离心法分离SLE患者PBMC,在药物干预下培养48小时,用AnnexinV-FITC流式细胞仪技术检测PBMC凋亡率的变化,用ELISA法检测上清液中IFN-γ、IL-6、IL-10、sFas水平的变化。结果:与空白对照组比较,中药方1高剂量组PBMC的凋亡率、IFN-γ、IL-6水平无明显差异(P>0.05),IL-10的水平明显升高(P0.05),凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:中药方1能使体外培养的SLE进行期患者PBMC的IL-10水平升高,sFas水平降低。中药方2能使体外培养的SLE缓解期患者PBMC的凋亡率降低。

关键词：中药方剂 SLE PBMC 凋亡 IFN-γ IL-6 IL-10 sFas

寻常型天疱疮LncRNA的差异性表达及生物信息学分析

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寻常型天疱疮LncRNA的差异性表达及生物信息学分析

作者：刘洋西南医科大学

学位级别：硕士

寻常型天疱疮(PV)是慢性发疱性皮肤病中的一种常见类型,其病因至今尚未明确,通常被认为是一种自身免疫反应[1]。当前对其治疗多采用糖皮质激素,长期应用存在副作用问题甚至滥用可危及生命。因而进一步探究PV的发病机制,寻找潜在的关键... 详细信息

寻常型天疱疮(PV)是慢性发疱性皮肤病中的一种常见类型,其病因至今尚未明确,通常被认为是一种自身免疫反应[1]。当前对其治疗多采用糖皮质激素,长期应用存在副作用问题甚至滥用可危及生命。因而进一步探究PV的发病机制,寻找潜在的关键性生物学调控位点显得尤为迫切。长链非编码RNA(LncRNA)已被证实可以在表观遗传、转录和转录后等水平调节基因的表达,与很多疾病的发生、发展有着密切的联系。有关LncRNA与PV的研究国内外未见报道。目的:本研究拟应用基因芯片技术对PV患者PBMC中LncRNA和mRNA的差异性表达情况进行检测,并进行初步的生物信息学分析。方法:采用基因芯片技术筛选PV患者和正常人PBMC中LncRNA和mRNA的差异性表达,并采用qRT-PCR的方法进行验证;对差异性表达的LncRNA进行Cis和Trans靶基因预测,间接推断Lnc RNA的生物学功能;对差异性表达的m RNA进行GO和KEGG富集分析,进一步了解其作用机制及生物学功能;将LncRNA靶基因和差异性mRNA功能富集的结果进行比较分析,找寻PV发生发展的可能作用机制或信号通路,为后续LncRNA功能验证打下基础。结果:共发现LncRNA 40343个,其中差异性表达的LncRNA219个,上调142个,占总数的0.35198%;下调77个,占总数的0.19086%;共发现mRNA 21422个,其中差异性表达的mRNA 74个,上调34个,占总数的0.15871%;下调40个,占总数的0.18672%;选取其中4个LncRNA进行qRT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果相符,证明芯片检测是准确、可靠的。共发现靶基因1484个,其中137个cis靶基因,1347个Trans靶基因。所得靶基因主要富集在以下以下生物学过程:p53信号转导通路/细胞内吞/溶酶体/细胞凋亡/氨基酸的代谢及降解/脂肪酸降解/核糖体的功能及调控/RNA转运/Toll样受体信号通路/T细胞受体信号通路/前列腺癌/过氧化物酶体/子宫内膜癌/慢性骨髓性白血病/B细胞受体信号通路/急性骨髓性白血病等;差异性表达的mRNA主要参与了调节PPARs信号传导,正向调节趋化因子分泌,正向调节耐受诱导,肝素的生物合成及代谢过程等生物学过程和核糖体、Jak-STAT信号通路、造血细胞谱系、细胞因子受体(Cytokine receptors)相互作用等信号通路。发现主要通路里的三个mRNA:RPL21、IDO1、CCR3,即是LncRNA的靶基因,也是差异表达的mRNA。结论:PV患者和正常人对比,外周血PBMC中存在LncRNA的差异性表达,qRT-PCR进一步验证了芯片结果的的准确性。LncRNA异常表达在PV的发生、发展中可能扮演了重要角色。这些LncRNA很有可能是通过Cis或者Trans调控靶基因,进而影响了核糖体、Jak-STAT信号通路、造血细胞谱系、细胞因子受体相互作用等信号通路,参与了PV的发生、发展。

关键词：天疱疮差异表达 PV LncRNA

特应性皮炎患者血浆中差异表达miRNA的筛选研究

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特应性皮炎患者血浆中差异表达miRNA的筛选研究

作者：王修勇泸州医学院

学位级别：硕士

背景与目的： miRNA(microRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的非编码小分子RNA，通过影响其靶基因的稳定性或抑制其翻译转录水平来调控细胞的分化、增殖和凋亡。目前现有的研究资料已证明miRNA在某些皮肤病的发生、发展起着重要作用，但... 详细信息

背景与目的： miRNA(microRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的非编码小分子RNA，通过影响其靶基因的稳定性或抑制其翻译转录水平来调控细胞的分化、增殖和凋亡。目前现有的研究资料已证明miRNA在某些皮肤病的发生、发展起着重要作用，但是对其在特应性皮炎发病机制中所起作用的研究很少。本课题采用Exiqon公司的miRCURYLNATM芯片技术筛选特应性皮炎(Atopic dermatitis，AD)患者和正常人血浆差异表达的miRNA;然后通过RT-qPCR验证芯片检测结果的准确性，寻找与AD相关的血浆中特异性miRNA，冀望作为AD疾病诊断的标志物，研究结果为探明miRNAs调控特应性皮炎发生的机制，及今后研究其临床诊断、病情评估、治疗评价提供理论指导和实验依据。材料与方法：收集9例AD患者及6例正常人外周静脉血5ml，无酶污染条件下提取总RNA，利用Exiqon公司的miRCUPY LNATM基因芯片对血浆中的miRNA进行筛查、分析。对特应性皮炎中的差异表达miRNA进行筛选，初步建立特应性皮炎患者miRNA异常表达谱，找出明显上调或下调表达的miRNA进行进一步的PCR验证和分析。结果： 1．在特应性皮炎患者血浆中筛选出上调表达的miRNA基因105个，下调表达的miRNA基因225个。 2．其中Fold chang上调大于2倍的为61个，上调大于3倍小于5倍为17个，上调大于5倍的为5个;Fold chang下调小于0.5倍的为170个（P＜0.05）。结论： 1．初步建立特应性皮炎患者血浆中的miRNA基因的异常表达谱，与正常健康人比较，初步筛选出61个上调表达的miRNA基因和170个下调表达的miRNA基因。 2．通过查阅文献结合本研究实验，最后选取在特应性皮炎血浆中显著性差异表达的miR-142-5p、miR-1237-3p和miR-4275、miR-5047进行后续RT-qPCR验证、分析。

关键词：特应性皮炎 miRNA 芯片检测

聚焦超声辐照右足三里的痛阈变化和治疗慢性腰背痛的初步临床研究

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聚焦超声辐照右足三里的痛阈变化和治疗慢性腰背痛的初步临床研究

作者：刘真珍重庆医科大学

学位级别：硕士

背景疼痛在临床中随处可见,尤其是慢性疼痛。疼痛为一种主观感受,在评估上具有一定的困难,目前疼痛的治疗方法虽然较多,但是疗效不佳。聚焦超声技术使超声波穿透到深部软组织时仍达到治疗剂量,可聚焦于人体穴位处,使人体产生酸麻... 详细信息

背景疼痛在临床中随处可见,尤其是慢性疼痛。疼痛为一种主观感受,在评估上具有一定的困难,目前疼痛的治疗方法虽然较多,但是疗效不佳。聚焦超声技术使超声波穿透到深部软组织时仍达到治疗剂量,可聚焦于人体穴位处,使人体产生酸麻胀痛等类似于中医针灸的得气感,同时超声本身可以改善局部血液循环和缓解肌肉痉挛,消除水肿和松解局部粘连,促进软组织损伤的修复。因此,聚焦超声可能在治疗疼痛上有更好的效果,因此本课题进行了聚焦超声辐照穴位的痛阈研究和治疗慢性腰背痛的初步临床研究。第一部分健康人的痛阈波动目的:观察用Electronic Von Frey测试人的痛阈随时间的变化。方法:10例健康人,用Electronic Von Frey测定机械痛阈。在0、10、20、30、40、50、60 min记录机械痛阈。结果:10名健康人在60min内的各测试点痛阈波动平均值不超过10%,对于每一位受试者来说,痛阈波动的平均值最大不超过30%。各个时间点之间没有显著性统计学意义（P=0.144）,时间与部位无交互效应（P=0.41）。结论:ElectronicVon Frey测定痛阈稳定、可行。第二部分聚焦超声辐照右足三里的痛阈变化目的:观察聚焦超声辐照健康人右足三里对痛阈的影响。方法:40例健康人,随机分成聚焦超声辐照组和安慰剂对照组,各20例。聚焦超声辐照右足三里30min,用Electronic Von Frey测定机械痛阈,测试部位为双侧足三里附近（距离足三里1 cm内的区域）和双侧外关附近（距离外关1 cm内的区域）。在聚焦超声辐照前和开始辐照后10、20、30、40、50、60 min记录机械痛阈。安慰剂对照组同时进行对比测量。结果:超声辐照组,4个测痛点在辐照前和辐照后即刻的痛阈值比较分别有显著性差异（P＜0.01）;对照组,痛阈值均无统计学意义（右侧足三里点P=0.274 ,左侧足三里点P=0.904,右侧外关点P=0.064,左侧外关点P=0.192）。4个测痛点随时间的变化曲线规律极其相似,自聚焦超声辐照开始,痛阈变化率呈上升趋势,在辐照后即刻达高峰。然后,因停止超声而下降。对照组的变化较为平缓,波动范围远小于±10%。经重复资料方差分析,聚焦超声辐照组,每个测痛点相邻时间水平有显著性差异;双侧不同部位之间差异没有统计学意义（双侧足三里P=0.176;双侧外关P=0.68）;远近端不同部位间差异有显著性统计学意义（ P＜0.01）,时间与部位交互效应有统计学意义（P＜0.05）结论:聚焦超声辐照单侧足三里后痛阈明显升高,从而具有一定的镇痛作用。第三部分聚焦超声治疗慢性腰背痛的临床初步研究目的:探讨聚焦超声辐照穴位治疗慢性腰背痛的有效性和安全性。方法:筛选40例慢性腰背痛患者,随机分成聚焦超声治疗组和安慰剂对照组,各20例。两组均取足三里、委中、腰夹脊穴,每个穴位辐照10 min/d,连续辐照5天为1个疗程,安慰剂组无能量输出。治疗前,治疗后即刻,随访1、7、14、21、28 d采用VAS评分。结果:聚焦超声治疗后即刻,治疗组的有效率为100%,优于安慰剂对照组的27.8%（P＜0.01）,随访中,两组的VAS评分差异均有显著性统计学意义（P＜0.01）。聚焦超声治疗组,治疗前后VAS评分差异均有显著性统计学意义（P＜0.01）;安慰剂对照组治疗后1天与治疗前对比VAS评分有显著性差异（P＜0.01）,第7天以后与治疗前相比,无统计学意义（P=0.33）。仅有1例有较轻副反应发生。结论:聚焦超声辐照穴位治疗慢性腰背痛是一种有效、安全的方法。

关键词：聚焦超声针刺痛阈慢性腰背痛足三里

Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中变化规律的研究

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Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中变化规律的研究

作者：蒋有让泸州医学院

学位级别：硕士

研究背景：特应性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一种慢性、瘙痒性、复发性的炎症性皮肤疾病，急性期AD皮疹呈多形性，并有渗出倾向。AD发病年龄大多在婴儿时期，病情大多反复，迁延不愈，其病因不明，目前考虑为多因素共同作用致病... 详细信息

研究背景：特应性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一种慢性、瘙痒性、复发性的炎症性皮肤疾病，急性期AD皮疹呈多形性，并有渗出倾向。AD发病年龄大多在婴儿时期，病情大多反复，迁延不愈，其病因不明，目前考虑为多因素共同作用致病，涉及环境、基因及免疫之间的相互作用。AD的发病机制目前也尚不完全清楚，尤其是功能紊乱的反应性T细胞是如何被活化和维持活化状态的机制尚不明确，临床医生对AD诊断、治疗及判断预后等遇到相当大的困难。目前为止，初始CD4+T淋巴细胞在接受抗原刺激的信号后，Th1、Th2、Th17和Treg（调节性T细胞）等至少4种不同的CD4+T细胞亚群被先后发现并被认知，它们各自执行不同的生物学功能，然而，其主要功能是在体内通过分泌不同的细胞因子来相互影响、制约，从而形成一个CD4+T细胞的免疫调节网络，在自身免疫性疾病以及炎症性疾病的病程中发挥重要的调节作用。研究目的：研究特应性皮炎外周血清Th1/Th2/Th17/Treg平衡的变化规律及相关细胞因子的变化规律，并比较其与疾病严重程度的关系，以进一步探讨特应性皮炎发病的免疫机制，为临床提供诊治依据。研究方法：收集47例AD患者及40例正常人，患者组全部完善临床资料，严格按AD患者严重程度（SCORAD评分）要求进行评分，分别收集患者及正常人外周静脉血5ml，无污染条件下采用流式荧光技术测定AD患者外周血清中的IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β含量并进行统计分析，从而分析Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中变化规律，同时与皮损的严重程度（SCORAD评分）比较，评价Th1/Th2/Th17/Treg相关细胞因子与AD病情的严重程度的关系。研究结果： 1在AD血清中统计分析显示， IL-4(P0.05);2Thl、Th2、Th17、Treg四类T细胞亚群相关细胞因子相关性分析：IFN-γ/IL-4显著降低（p0.05）。结论： 1、采用流式荧光技术检测了AD患者血清中Thl、Th2、Th17、Treg细胞相关因子，得出AD患者血清中IL-4、IL-10升高，IL-17、IL-23显著升高，而IL-21、IFN-γ和TGF-β未见明显改变。 2、证实了IL-17与AD严重程度成显著正相关，而IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-21、IL-23和TGF-β与AD严重程度无明显相关性。 3、探讨了Thl、Th2、Th17、Treg四类T细胞亚群相关因子的相互之间的关系，在AD病程中Th1/Th2、Th1/Th17降低而Th17/Treg升高，从而推测Thl/Th2/Th17/Treg平衡的漂移是AD发病的重要机制;4、在临床上，一方面IL-17有望成为诊断AD的重要检验指标;另一方面，治疗上我们不但要重点考虑靶向治疗IL-17，而且更重视调节Thl/Th2/Th17/Treg细胞平衡。

关键词：特应性皮炎细胞因子 Thl Th2 Th17 Treg 流式荧光技术

番茄红素灌胃对UVA致大鼠皮肤光老化干预作用的实验研究

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番茄红素灌胃对UVA致大鼠皮肤光老化干预作用的实验研究

作者：杨斌第三军医大学

学位级别：硕士

背景和目的：皮肤长期暴露于日光紫外线可出现光老化（photoaging）。皮肤光老化能导致严重的美容问题，并与多种皮肤病的发生密切相关，因而近年来倍受研究者关注。UVA是日光紫外线的主要成分，穿透性强，能产生多种与光老化密切相关... 详细信息

背景和目的：皮肤长期暴露于日光紫外线可出现光老化（photoaging）。皮肤光老化能导致严重的美容问题，并与多种皮肤病的发生密切相关，因而近年来倍受研究者关注。UVA是日光紫外线的主要成分，穿透性强，能产生多种与光老化密切相关的生物效应,在光老化发病中起重要的作用。研究发现UVA致皮肤光老化效应主要由活性氧簇（ROS）介导，目前认为使用抗氧化剂清除ROS是一种新的光老化预防策略。本课题观察了系统性应用天然抗氧化剂番茄红素对UVA相关生物效应的干预作用，旨在为寻找新的光老化预防方法提供实验依据。方法：Wistar大鼠分为三组：对照组（C）、UVA照射组（UV）、UVA照射+番茄红素灌胃组（UV+L）。UV组和UV+L组予UVA照射，UV+L组予番茄红素灌胃。采用HE染色、Verhoeff铁苏木素染色、硫代巴比妥酸盐反应物（TBRAS）分析、免疫组织化学和半定量逆转录多聚酶链式反应（sqRT-PCR）等技术方法，观察各组实验动物皮肤外观和组织形态变化;皮肤脂质过氧化反应终产物丙二醛（MDA）含量变化;皮肤中基质金属蛋白酶（MMPs）MMP-1、MMP-2和MMP-9的表达变化。结果： 1. 单次UVA照射后，各实验组皮肤组织形态基本正常，无明显组间差异;2. 反复UVA照射后，各实验组大鼠皮肤外观和组织形态基本正常，无明显组间差异;3. 单次UVA照射后，UV组和UV+L组皮肤MDA含量和MMP-2 mRNA及蛋白质表达水平较C组明显升高（p0.05）。结论： 1. 番茄红素灌胃对单次UVA照射引起的MDA含量升高和MMPs表达增加有抑制作用。 2. 番茄红素灌胃对反复UVA照射引起的MDA含量升高和MMPs表达增加有抑制作用。 3. 系统性应用番茄红素对UVA致大鼠皮肤光老化有拮抗作用。

关键词：光老化 ,番茄红素 ,长波紫外线 ,脂质过氧化 , 基质金属蛋白酶

TRAIL及其受体在系统性红斑狼疮中的作用研究

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TRAIL及其受体在系统性红斑狼疮中的作用研究

作者：王樱霖四川医科大学

学位级别：硕士

研究背景:系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫系统紊乱的慢性疾病,临床表现具有病程迁延、复发率高、死亡率高等特点。SLE的发病与某些环境、激素水平、感染、遗传等因素的相互作用下导致免疫活性细胞发生突变、失去自身耐受性从而使机... 详细信息

研究背景:系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫系统紊乱的慢性疾病,临床表现具有病程迁延、复发率高、死亡率高等特点。SLE的发病与某些环境、激素水平、感染、遗传等因素的相互作用下导致免疫活性细胞发生突变、失去自身耐受性从而使机体发生免疫调节的失常有关。TRAIL及其受体是凋亡路径调控中的关键因子,既往的研究显示TRAIL及其受体在SLE发病形成中具有多面性的调控作用,且作用机制复杂,需进一步深入系统地进行探讨。研究目的:检测SLE患者外周单个核细胞(Peripheral Blood Cells,PBMCs)中TRAIL及其五种受体的变化规律,以进一步探讨系统性红斑狼疮同凋亡有关的免疫发病机制以及病情发展中的作用提供理论依据。材料与方法:收集20例SLE患者及10例正常人外周静脉血并分离PBMCs,提取RNA后反转为c DNA,采用实时荧光定量PCR法,检测SLE患者和正常人PBMCs中TRAIL及其五种受体的表达水平。以β-actin为内参,采用2-ΔΔCT法计算TRAIL及其五种受体在红斑狼疮患者PBMCs中的相对表达量,分析系统性红斑狼疮发病中的关键性分子机制与TRAIL及其五种受体表达水平之间的关系。结果:***以及五种受体在大多数红斑狼疮患者和正常组PBMCs中均有表达。2.据统计分析显示,TRAIL-R1(P0.05),TRAIL-R5表达较正常组降低(P<0.05)。结论:***以及五种受体在大多数SLE患者以及正常对照组都同时表达。***-R2表达较其他几种基因表达显著增高,表明TRAIL诱导的SLE患者异常凋亡路径中,TRAIL-R2介导的通路可能发挥着重要的作用。***-R5对骨组织有保护作用,在本实验中TRAIL-R5较正常组降低,推测其和SLE患者骨代谢异常可能有关系。

关键词：系统性红斑狼疮实时荧光定量PCR TRAIL及其五种受体

芹黄素对人角质形成细胞氧化应激诱导的未折叠蛋白反应及CXCL16释放的抑制作用

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芹黄素对人角质形成细胞氧化应激诱导的未折叠蛋白反应及CXCL16释...

作者：张德利西南医科大学

学位级别：硕士

目的:1.建立过氧化氢诱导人角质形成细胞氧化应激模型。2.研究芹黄素(Apigenin,4’,5,7-三羟基黄酮)对氧化应激诱导的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)及CXCL16释放的影响及其可能机制。3.探讨芹黄素在白癜风治疗中的应... 详细信息

目的:1.建立过氧化氢诱导人角质形成细胞氧化应激模型。2.研究芹黄素(Apigenin,4’,5,7-三羟基黄酮)对氧化应激诱导的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)及CXCL16释放的影响及其可能机制。3.探讨芹黄素在白癜风治疗中的应用前景。方法:***法检测不同浓度HO(100、150、200、250、300、350μmol/L)、不同浓度芹黄素(5、10、25、50、100、200μmol/L)对Hacat细胞活性的影响。不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)预处理Hacat细胞,再加入HO(250μmol/L)作用,MTT法检测Hacat细胞活性。2.流式细胞术检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞ROS含量的影响。3.实时荧光定量PCR检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞totalXBP1(XBP1t)、spliced XBP1(XBP1s)及unspliced XBP1(XBP1u)mRNA表达水平的影响。*** Blot检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达水平的影响。***法检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞CXCL16水平的影响。结果:***可抑制Hacat细胞活性,随浓度增加抑制作用增强(P0.05)。当芹黄素浓度大于或等于50μmol/L时,随着芹黄素浓度上升,细胞活力逐渐下降(P0.05),说明芹黄素不引起Hacat细胞ROS含量升高。***可显著诱导Hacat细胞XBP1t、XBP1s、XBP1u mRNA表达升高(P<0.01),芹黄素对由HO诱导的Hacat细胞XBP1t、XBP1s、XBP1u mRNA表达的升高均有显著的抑制作用,并且随芹黄素浓度升高而抑制作用增强(P<0.01)。***可显著诱导Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB的表达升高(P<0.01),芹黄素以浓度依赖性显著下调HO诱导的Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB的表达(P<0.01)。***可显著诱导Hacat细胞CXCL16分泌水平升高(P<0.01),芹黄素可显著降低HO引起的Hacat细胞CXCL16分泌水平,并且CXCL16分泌水平随芹黄素浓度升高而降低(P<0.01)。结论:1.芹黄素可以抑制HO诱导的人角质形成细胞ROS生成,具有抗氧化作用。2.芹黄素可抑制HO诱导的人角质形成细胞未折叠蛋白反应和CXCL 16释放水平,芹黄素可能具有开发成为白癜风治疗药物的潜力。

关键词：芹黄素过氧化氢人角质形成细胞细胞氧化应激未折叠蛋白反应 CXCL16

人乳头瘤病毒16型感染特异性免疫治疗的实验及临床初步研究

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人乳头瘤病毒16型感染特异性免疫治疗的实验及临床初步研究

作者：黄伟峰第三军医大学

学位级别：硕士

人乳头瘤病毒（HPV）感染在人群中十分常见。已证明HPV感染与某些恶性肿瘤的发生有关系，慢性感染和反复发作患者的皮损局部易形成癌前病变或癌变。现已知HPV有100余种亚型，其中高危型HPV16可导致尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤和宫颈癌等疾... 详细信息

人乳头瘤病毒（HPV）感染在人群中十分常见。已证明HPV感染与某些恶性肿瘤的发生有关系，慢性感染和反复发作患者的皮损局部易形成癌前病变或癌变。现已知HPV有100余种亚型，其中高危型HPV16可导致尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤和宫颈癌等疾病。目前常用方法治疗后复发率高，病毒感染的持续存在是复发的主要原因。寻找一种确切有效的治疗方法，降低复发率及肿瘤发生十分必要。研究表明，反复发作和病程较长的HPV感染患者常有细胞免疫功能异常，尤其是感染局部抗原提呈障碍，难以建立有效的免疫应答反应，致使常规治疗后残存的病毒感染细胞难以清除。因此对HPV感染的治疗从提高HPV抗原提呈效率，加强局部免疫应答着手，达到对病毒感染细胞的有效清除，将最大限度地降低复发率和肿瘤形成。树突状细胞（DC）是体内最有效的专职抗原提呈细胞。近年来随着人们对DC在免疫应答中作用的深入研究，发展基于DC的生物治疗来防治肿瘤和病毒感染性疾病是重要的趋势。高危型HPV16 E7作为转化蛋白及肿瘤排斥抗原从感染早期到肿瘤形成期均可持续检测到其表达，是理想的免疫治疗靶抗原。因此本课题选取HPV16 E7为靶抗原，合成人类白细胞抗原A2（HLA-A2）限制性E7多肽，通过体外培养DC并负载HPV16 E7多肽，观察其诱导的抗原特异性细胞免疫应答。同时我们以感染HPV16的复发性HLA-A2+尖锐湿疣患者为研究对象，进一步通过临床实验，观察基于DC的生物治疗控制HPV感染的作用。主要结果及结论如下：一、HPV16 E749-57多肽合成、纯化与鉴定方法：根据表位预测所得HPV16 E7 HLA-A2限制性CTL表位RAHYNIVTF（49-57），运用标准Fmoc方案在ABI431A型多肽合成仪上进行合成，通过Delta 600型HPLC进行纯化和纯度分析，纯化后多肽在API2000型质谱仪上进行分子量测定。结果：合成的HPV16 E749-57多肽纯度为98.73%，分子量测定值1120.544，与理论值1120.290相符。结论：高纯度多肽的合成为HPV多肽疫苗的实验研究及临床应用奠定了基础。二、DC体外培养、抗原负载及生物学鉴定方法：密度梯度离心分离HLA-A2+健康人外周血单一核细胞（PBMC），在粒/巨＜WP=8＞细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素-4（IL-4）联合诱导下向DC定向分化，并负载HPV16 E749-57多肽。流式细胞仪检测DC特异性表面分子的表达。四唑盐比色法（MTT）法检测其在混合淋巴细胞反应（MLR）中刺激同种淋巴细胞增殖的能力。结果：经细胞因子诱导生成并负载抗原的DC光镜下具有典型形态;DC特异性表面分子的表达率（%）分别为：CD1a 58.4±6.7、CD83 71.2±5.4、HLA-DR 74.8±4.2、CD80 70.6±3.4;MTT法显示其对同种淋巴细胞有较强的促增殖作用。结论：通过细胞因子体外诱导并负载抗原的DC为成熟的、功能性DC。三、细胞毒性实验（LDH释放法）检测负载HPV16 E749-57多肽DC诱导抗原特异性细胞免疫反应方法：以负载HPV16 E749-57及乙型肝炎病毒核心抗原多肽18-27（HBC18-27）DC诱导的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和E749-57多肽直接诱导的淋巴细胞为效应细胞，以Caski细胞株为实验组靶细胞，SiHa及AN3CA细胞株为对照组靶细胞，运用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测在1:12.5、1:25、1:50效靶比下效应细胞对靶细胞的杀伤效应。结果：DC负载HPV16 E749-57多肽诱导的特异性CTL在各效靶比均能对HLA-A2+、HPV16+的Caski细胞产生特异性杀伤作用，而无关肽HBC18-27致敏DC后诱导的特异性CTL对Caski无明显的杀伤活性;同时DC负载HPV16 E749-57多肽诱导的特异性CTL对HLA-A2－、HPV16－肿瘤细胞SiHa 及HPV－肿瘤细胞AN3CA亦无明显杀伤作用。E749-57多肽直接诱导的淋巴细胞对Caski也无明显的杀伤作用。结论：负载HPV16 E749-57多肽的DC体外可诱导高效、特异性的CTL效应。四、HPV16 E749-57多肽DC治疗HLA-A2+、HPV16+复发性尖锐湿疣患者的观察方法：HLA-A2+、HPV16+复发性尖锐湿疣患者分治疗组、实验组。各组常

关键词：人乳头瘤病毒 E7抗原多肽树突状细胞细胞毒性T淋巴细胞尖锐湿疣

电刺激与超声刺激“关元穴”影响围绝经期大鼠卵巢卵泡发育的比较研究

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电刺激与超声刺激“关元穴”影响围绝经期大鼠卵巢卵泡发育的比较...

作者：欧洪琼重庆医科大学

学位级别：硕士

围绝经期妇女随着卵巢功能的衰退，卵巢内分泌功能出现紊乱、衰减，雌激素分泌减少，卵巢排卵逐渐趋于停止。很多妇女因机体不能适应这一变化而出现围绝经期综合征一系列症状，严重影响妇女的身心健康。现代医学主要采用对症及激素替代... 详细信息

围绝经期妇女随着卵巢功能的衰退，卵巢内分泌功能出现紊乱、衰减，雌激素分泌减少，卵巢排卵逐渐趋于停止。很多妇女因机体不能适应这一变化而出现围绝经期综合征一系列症状，严重影响妇女的身心健康。现代医学主要采用对症及激素替代方法防治围绝经期综合征，起到了积极的作用，但因出现不良反应大，禁忌证多，其应用受到了一定的限制。而针灸疗法作为一种操作简便、安全无毒副作用、疗效好、费用低的的物理疗法，在防治围绝经期综合征中发挥了显著的作用。关元穴在中医上作为与泌尿、生殖系统疾患相关的重要穴位，其在针灸临床研究中常被选取为主要作用穴位，相关应用取得了可喜的成效。本文基于针灸对人体卵巢内分泌调节作用，采用电和超声两种物理因子作用于围绝经期大鼠关元穴，探讨电刺激和超声刺激关元穴对围绝经期大鼠卵巢内分泌功能的调节作用，比较研究两种物理疗法对围绝经期大鼠卵巢内分泌功能和卵泡发育的影响作用，分析电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴以改善卵巢分泌雌激素功能及促进卵巢卵泡发育的可行性，并进一步探讨其可能作用机制，为临床的应用和研究提供基础资料，对拓展围绝经期治疗新途径具有意义。目的（1）分别采用电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴，通过观察大鼠卵巢组织结构变化和血清雌激素水平变化，探讨电刺激关元穴、超声刺激关元穴对围绝经期大鼠卵巢分泌雌激素功能和卵巢卵泡发育影响。（2）分别采用电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴，通过观察大鼠卵巢细胞雌激素受体β和细胞色素P450芳香化酶蛋白的表达，初步探讨电刺激和超声刺激关元穴影响围绝经期卵巢形态及卵泡发育的可能作用机制。方法（1）采用阴道涂片法筛选出围绝经期雌性SD大鼠60只，随机分为电刺激组（包括电刺激30min组，电刺激20min组，电刺激10min组）、超声刺激组（包括超声刺激10min组，超声刺激5min组）和模型对照组，每组10只。电刺激组：选用频率2.5Hz，强度2V，连续波输出，分别刺激30min/d、20min/d和10min/d;超声组：选择参数为输出声功率0.1W，工作频率9MHz，发射频率1000Hz，每次刺激30s,刺激间隔时间为5s,分别刺激10min/d和5min/d。电刺激组和超声刺激组连续作用10天后，摘除眼球取血，采用电化学发光免疫分析法检测大鼠血清雌激素水平。（2）采用电和超声对围绝经期大鼠关元穴连续刺激10天后，取血后断颈处死大鼠，摘除两侧卵巢作组织切片。HE染色后组织学方法观察卵巢组织学结构变化，计数卵巢原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数和闭锁卵泡数;采用免疫组化方法检测卵巢雌激素受体β和细胞色素P450芳香化酶蛋白的表达。结果（1）电刺激和超声刺激连续作用于大鼠关元穴10天后，电刺激30min组大鼠外周血E水平为78.83.18±28.12pg/mL，电刺激20min组大鼠外周血E水平为74.99.42±34.09pg/mL，电刺激10min组大鼠外周血E水平为54.00.±14.52pg/mL，超声刺激10min组大鼠外周血E水平为68.52±37.13pg/mL，超声刺激5min组大鼠外周血E水平为65.00±12.26pg/mL，模型对照组大鼠外周血E水平为42.75±10.02pg/mL。其中，电刺激30min组、电刺激20min组、超声刺激10min组和超声刺激5min组大鼠外周血E水平较模型对照组明显升高，存在统计学差异（P0.05）;电实验组和超声实验组血清E水平比较无显著性差异（P>0.05）。电刺激组、超声刺激组同一实验组组间分别比较，大鼠血清E水平差异无统计学意义（P>0.05）。（2）采用电和超声连续刺激围绝经期大鼠关元穴10天后，电刺激30min组大鼠卵巢原始卵泡数为9.9±6.5、初级卵泡数为9.1±3.0、次级卵泡数为7.8±3.8、闭锁卵泡数为4.5±2.3;电刺激20min组大鼠卵巢原始卵泡数为8.7±4.2、初级卵泡数为8.6±2.6、次级卵泡数为7.0±4.0、闭锁卵泡数为4.8±3.1;电刺激10min组大鼠卵巢原始卵泡数为8.1±3.8、初级卵泡数为6.1±2.4、次级卵泡数为5.4±2.2、闭锁卵泡数为6.0±2.0;超声刺激10min组大鼠卵巢原始卵泡数为7.9±4.5、初级卵泡数为7.1±2.0、次级卵泡数为6.8±1.8、闭锁卵泡数为4.3±2.2;超声刺激5min组大鼠卵巢原始卵泡数为6.7±2.2、初级卵泡数为7.6±2.6、次级卵泡数为7.1±3.0、闭锁卵泡数为5.0±1.4;模型对照组卵巢原始卵泡数为6.1±2.8、初级卵泡数为5.9±1.4、次级卵泡数为4.4±2.4、闭锁卵泡数

关键词：电刺激超声围绝经期卵泡雌激素