电刺激与超声刺激“关元穴”影响围绝经期大鼠卵巢卵泡发育的比较研究

作     者：欧洪琼 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：白晋;刁庆春

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：电刺激 超声 围绝经期 卵泡 雌激素 

摘      要：围绝经期妇女随着卵巢功能的衰退，卵巢内分泌功能出现紊乱、衰减，雌激素分泌减少，卵巢排卵逐渐趋于停止。很多妇女因机体不能适应这一变化而出现围绝经期综合征一系列症状，严重影响妇女的身心健康。现代医学主要采用对症及激素替代方法防治围绝经期综合征，起到了积极的作用，但因出现不良反应大，禁忌证多，其应用受到了一定的限制。而针灸疗法作为一种操作简便、安全无毒副作用、疗效好、费用低的的物理疗法，在防治围绝经期综合征中发挥了显著的作用。关元穴在中医上作为与泌尿、生殖系统疾患相关的重要穴位，其在针灸临床研究中常被选取为主要作用穴位，相关应用取得了可喜的成效。本文基于针灸对人体卵巢内分泌调节作用，采用电和超声两种物理因子作用于围绝经期大鼠关元穴，探讨电刺激和超声刺激关元穴对围绝经期大鼠卵巢内分泌功能的调节作用，比较研究两种物理疗法对围绝经期大鼠卵巢内分泌功能和卵泡发育的影响作用，分析电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴以改善卵巢分泌雌激素功能及促进卵巢卵泡发育的可行性，并进一步探讨其可能作用机制，为临床的应用和研究提供基础资料，对拓展围绝经期治疗新途径具有意义。 目的 （1）分别采用电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴，通过观察大鼠卵巢组织结构变化和血清雌激素水平变化，探讨电刺激关元穴、超声刺激关元穴对围绝经期大鼠卵巢分泌雌激素功能和卵巢卵泡发育影响。 （2）分别采用电刺激、超声刺激围绝经期大鼠关元穴，通过观察大鼠卵巢细胞雌激素受体β和细胞色素P450芳香化酶蛋白的表达，初步探讨电刺激和超声刺激关元穴影响围绝经期卵巢形态及卵泡发育的可能作用机制。 方法 （1）采用阴道涂片法筛选出围绝经期雌性SD大鼠60只，随机分为电刺激组（包括电刺激30min组，电刺激20min组，电刺激10min组）、超声刺激组（包括超声刺激10min组，超声刺激5min组）和模型对照组，每组10只。电刺激组：选用频率2.5Hz，强度2V，连续波输出，分别刺激30min/d、20min/d和10min/d;超声组：选择参数为输出声功率0.1W，工作频率9MHz，发射频率1000Hz，每次刺激30s,刺激间隔时间为5s,分别刺激10min/d和5min/d。电刺激组和超声刺激组连续作用10天后，摘除眼球取血，采用电化学发光免疫分析法检测大鼠血清雌激素水平。 （2）采用电和超声对围绝经期大鼠关元穴连续刺激10天后，取血后断颈处死大鼠，摘除两侧卵巢作组织切片。HE染色后组织学方法观察卵巢组织学结构变化，计数卵巢原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数和闭锁卵泡数;采用免疫组化方法检测卵巢雌激素受体β和细胞色素P450芳香化酶蛋白的表达。 结果 （1）电刺激和超声刺激连续作用于大鼠关元穴10天后，电刺激30min组大鼠外周血E水平为78.83.18±28.12pg/mL，电刺激20min组大鼠外周血E水平为74.99.42±34.09pg/mL，电刺激10min组大鼠外周血E水平为54.00.±14.52pg/mL，超声刺激10min组大鼠外周血E水平为68.52±37.13pg/mL，超声刺激5min组大鼠外周血E水平为65.00±12.26pg/mL，模型对照组大鼠外周血E水平为42.75±10.02pg/mL。其中，电刺激30min组、电刺激20min组、超声刺激10min组和超声刺激5min组大鼠外周血E水平较模型对照组明显升高，存在统计学差异（P0.05）;电实验组和超声实验组血清E水平比较无显著性差异（P0.05）。电刺激组、超声刺激组同一实验组组间分别比较，大鼠血清E水平差异无统计学意义（P0.05）。 （2）采用电和超声连续刺激围绝经期大鼠关元穴10天后，电刺激30min组大鼠卵巢原始卵泡数为9.9±6.5、初级卵泡数为9.1±3.0、次级卵泡数为7.8±3.8、闭锁卵泡数为4.5±2.3;电刺激20min组大鼠卵巢原始卵泡数为8.7±4.2、初级卵泡数为8.6±2.6、次级卵泡数为7.0±4.0、闭锁卵泡数为4.8±3.1;电刺激10min组大鼠卵巢原始卵泡数为8.1±3.8、初级卵泡数为6.1±2.4、次级卵泡数为5.4±2.2、闭锁卵泡数为6.0±2.0;超声刺激10min组大鼠卵巢原始卵泡数为7.9±4.5、初级卵泡数为7.1±2.0、次级卵泡数为6.8±1.8、闭锁卵泡数为4.3±2.2;超声刺激5min组大鼠卵巢原始卵泡数为6.7±2.2、初级卵泡数为7.6±2.6、次级卵泡数为7.1±3.0、闭锁卵泡数为5.0±1.4;模型对照组卵巢原始卵泡数为6.1±2.8、初级卵泡数为5.9±1.4、次级卵泡数为4.4±2.4、闭锁卵泡数