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PMOP患者血清HIF-1α、OPG、RANKL、VEGF变化及其与中医证型的相关研究

PMOP患者血清HIF-1α、OPG、RANKL、VEGF变化及其与中医证型的相...

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作者：王世浩广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨绝经后骨质疏松症患者血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF、骨转换指标及中医证型之间的关系。方法:选取83名符合纳排标准的绝经后女性,采集静脉血并分离血清,检测血清HIF-1 α、OPG、RANKL、VEGF蛋白水平与骨转换指标。入组者均... 详细信息

目的:探讨绝经后骨质疏松症患者血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF、骨转换指标及中医证型之间的关系。方法:选取83名符合纳排标准的绝经后女性,采集静脉血并分离血清,检测血清HIF-1 α、OPG、RANKL、VEGF蛋白水平与骨转换指标。入组者均采用DXA测量骨密度和T值,并按照T值的大小将患者分为非骨质疏松症组和绝经后骨质疏松症组,按照中医辨证分型标准,将绝经后骨质疏松症组分为肝肾阴虚组、脾肾阳虚组合肾虚血瘀组。比较两组间血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF及骨转换指标的差异性和各指标之间相关性;比较绝经后骨质疏松症组不同中医证型之间血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF及骨转换指标的差异性。结果:1.绝经后骨质疏松症组在在年龄方面大于非骨质疏松症组,在身高、体重、BMI方面均低于非骨质疏松症组,差异有统计学意义(P0.05)。2.绝经后骨质疏松症组血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF蛋白水平之间具有显著相关性(P0.05),HIF-1 α与CROSSL、OSTEOC水平之间呈正相关,相关系数(r)分别为0.032和0.010;HIF-1 α与TP1NP水平之间呈负相关,相关系数(r)为-0.048。3.绝经后骨质疏松症组不同中医证型间HIF-1 α、OPG、RANKL、VEGF蛋白水平比较:关于HIF-1 α指标,脾肾阳虚组和肾虚血瘀组水平均高于肝肾阴虚组,差异有统计学意义(p0.05);关于OPG指标,脾肾阳虚组和肾虚血瘀组水平均高于肝肾阴虚组,差异有统计学意义(p0.05);关于VEGF指标,脾肾阳虚组和肾虚血瘀组水平均高于肝肾阴虚组,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1.绝经后骨质疏松症组血清HIF-1 α、OPG、RANKL、VEGF蛋白水平均高于非骨质疏松症组。2.绝经后骨质疏松症组血清HIF-1 α与OPG、RANKL、VEGF蛋白水平均呈正相关。3.绝经后骨质疏松症组不同证型间血清HIF-1 α、OPG、RANKL、VEGF蛋白水平表达有差异。

关键词：绝经后骨质疏松症中医证型 HIF-1α

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基于Wnt/β-catenin信号通路研究肉苁蓉苷A调控成骨细胞自噬的机制

基于Wnt/β-catenin信号通路研究肉苁蓉苷A调控成骨细胞自噬的机制

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作者：陈桐莹广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:明确肉苁蓉苷A对成骨细胞分化、矿化的影响;明确自噬对成骨细胞分化矿化的作用;探索肉苁蓉苷A通过Wnt/β-catenin信号通路对成骨细胞自噬的影响。方法:1.体外分离SD大鼠成骨细胞原代细胞,电镜下观察和碱性磷酸酶染色鉴定,分别将不... 详细信息

目的:明确肉苁蓉苷A对成骨细胞分化、矿化的影响;明确自噬对成骨细胞分化矿化的作用;探索肉苁蓉苷A通过Wnt/β-catenin信号通路对成骨细胞自噬的影响。方法:1.体外分离SD大鼠成骨细胞原代细胞,电镜下观察和碱性磷酸酶染色鉴定,分别将不同浓度的肉苁蓉苷A与成骨细胞共培养1,3,5天,通过CCK-8法筛选出最佳浓度。2.碱性磷酸酶染色,茜素红染色筛选肉苁蓉苷A干预成骨细胞最佳分化矿化浓度。3.采用免疫蛋白印迹法、免疫荧光,透射电子显微镜等方法检测成骨细胞的自噬水平,并用碱性磷酸酶染色,茜素红染色检测,结合自噬促进剂:雷帕霉素Rapa、自噬抑制剂3-MA,进一步明确肉苁蓉苷A通过自噬影响成骨细胞的分化矿化作用。4.用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1干预,碱性磷酸酶染色,茜素红染色,免疫印迹,免疫荧光法检测成骨细胞的自噬水平和分化矿化情况,阐明肉苁蓉苷A通过Wnt/β-catenin信号通路对成骨细胞自噬调控作用。结果:***-8法显示当肉苁蓉苷A浓度为10μM时,对SD大鼠成骨细胞的无明显增殖作用,但碱性磷酸酶染色,茜素红染色检测表明此浓度下细胞分化和矿化能力最强;2.碱性磷酸酶染色,茜素红染色检测表明SD大鼠成骨细胞发生自噬时促进分化矿化,免疫荧光显示肉苁蓉苷A浓度为10μM、干预时间为5天时,具有促进成骨细胞的自噬功能(P=0.000<0.001);3.免疫蛋白印迹法显示肉苁蓉苷A能促进自噬标志蛋白LC3(P=0.016<0.05),Beclin-1(P=0.022<0.05)和成骨蛋白 Runx2 的表达(P=0.002<0.05);4.免疫荧光、电镜检测结果显示肉苁蓉苷A促成骨细胞发生自噬的能力强于自噬促进剂Rapa(P=0.000<0.001),免疫蛋白印迹法显示,在引起自噬时,GSK-3β蛋白受抑制(P=0.047<0.05),而β-catenin 蛋白上升(P=0.017<0.05)。结论:肉苁蓉苷A能促进成骨细胞矿化分化,还能促进自噬的发生,且其促进自噬的能力强于自噬促进剂。Wnt/β-catenin信号通路可能是肉苁蓉苷A调控成骨细胞自噬促进分化与矿化的有效通路。

关键词：骨质疏松症肉苁蓉苷A 成骨细胞自噬 Wnt/β-catenin信号通路

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PMOP慢性疼痛与中医证型、神经肽的相关性研究

PMOP慢性疼痛与中医证型、神经肽的相关性研究

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作者：刘树华广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨绝经后骨质疏松症伴慢性疼痛患者的疼痛性质和中医证型;探讨神经肽与绝经后骨质疏松症及其引起的慢性疼痛的相关性。方法:本研究病例来自于2022年5月至2023年1月在广州中医药大学第三附属医院江南西院区门诊和住院治疗的患者,... 详细信息

目的:探讨绝经后骨质疏松症伴慢性疼痛患者的疼痛性质和中医证型;探讨神经肽与绝经后骨质疏松症及其引起的慢性疼痛的相关性。方法:本研究病例来自于2022年5月至2023年1月在广州中医药大学第三附属医院江南西院区门诊和住院治疗的患者,选取符合纳入标准和排除标准的156名绝经后女性,收集入组患者的基本信息,包括年龄、身高、体重、既往病史和骨转换指标,入组患者使用双能X线骨密度仪检测腰椎骨密度,收集患者外周静脉血同时分离血清,通过酶联免疫吸附法检测血清中CGRP、SP、VIP和NPY的蛋白水平。根据骨质疏松症、慢性疼痛和神经病理性疼痛的诊断标准进行分组,对不同组间各项数据进行统计学分析。结果:1.在本研究的156例绝经后女性中,骨质疏松伴慢性疼痛患者86例,占总纳入人数的75.4%,根据S-LANSS和ID pain的评分,慢性疼痛患者中可能存在神经病理性疼痛有21例,占绝经后骨质疏松伴慢性疼痛患者的24.4%。绝经后骨质疏松伴慢性疼痛组与绝经后骨质疏松不伴慢性疼痛组的证型构成比不具有统计学差异(P>0.05),而存在神经病理性疼痛组与不存在神经病理性疼痛组的证型构成比存在统计学差异(χ2=19.0563,P0.05),而肾虚血瘀组神经病理性疼痛的发生率高于肝肾阴虚组和脾肾阳虚组,差异具有统计学意义(P0.05),绝经后骨质疏松症组年龄、CGRP和NPY的蛋白水平高于非骨质疏松症组,差异有统计学意义(P0.05)。4.慢性疼痛伴神经病理性疼痛组的腰椎平均骨密度低于慢性疼痛不伴神经病理性疼痛组,差异具有统计学意义(P0.05)。5.相关性分析显示:CGRP蛋白水平与腰椎平均骨密度(r=-0.301,P<0.001)呈负相关,与P1NP(r=0.166,P=0.038)呈正相关;NPY蛋白水平与腰椎平均骨密度(r=-0.476,P<0.001)呈负相关。NRS 评分与 CGRP(r=0.357,P<0.05)和NPY(r=0.242,P=0.025)呈正相关,与腰椎平均骨密度(r=-0.703,P<0.001)呈负相关。6.以是否发生绝经后骨质疏松症为因变量,纳入年龄、CGRP和NPY构建多因素 Logistic 回归方程,结果显示 NPY(OR=1.181,95%CI1.109-1.258,P<0.001)是PMOP的危险因素。纳入NPY构建ROC曲线,显示NPY对绝经后骨质疏松症具有良好的预测价值(P<0.001),NPY的AUC值、临界值、灵敏度和特异度分别为 0.862,37.925pg/ml,62.3%和 97.6%。结论:1.绝经后骨质疏松伴慢性疼痛的患者中神经病理性疼痛的发生率约为24.4%,肾虚血瘀证的慢性疼痛患者神经病理性疼痛的发生率更高;2.与非骨质疏松症患者相比,绝经后骨质疏松症患者年龄、CGRP和NPY的蛋白水平较高;与慢性疼痛不伴神经病理性疼痛的患者相比,慢性疼痛伴神经病理性疼痛的患者的CGRP和NPY的蛋白水平较高、腰椎平均骨密度较低;***和NPY的蛋白水平与腰椎平均骨密度呈负相关,CGRP与P1NP呈正相关;NRS评分与CGRP和NPY的蛋白水平呈正相关,与腰椎平均骨密度呈负相关;***蛋白水平是绝经后骨质疏松症的危险因素,而且对绝经后骨质疏松症的发生具有良好的预测价值。

关键词：绝经后骨质疏松症神经肽神经病理性疼痛中医证型

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