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十枣汤急性毒性及抗肿瘤疗效评价

Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2024年第4期33卷 329-338页

作者：马立威陈哲施国善王玉静陈颂倪世宇李京葛鹏玲刘吉成齐齐哈尔医学院医药科学研究所(博士后工作站) 黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江中医药大学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040 齐齐哈尔医学院公共卫生学院黑龙江齐齐哈尔161006 贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳550025 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第五医院黑龙江大庆163001 齐齐哈尔医学院附属第三医院黑龙江齐齐哈尔161099

本研究旨在评价十枣汤(SZD)对KM小鼠的急性毒性及抗肿瘤活性,为安全用药提供参考,并对抗肿瘤效应进行初步评价。试验中,SPF级KM小鼠分别ig给予一定量的生理盐水(空白对照)和SZD,测定其半数致死量(LD_(50)),评价其对小鼠的毒性。另选取SP... 详细信息

本研究旨在评价十枣汤(SZD)对KM小鼠的急性毒性及抗肿瘤活性,为安全用药提供参考,并对抗肿瘤效应进行初步评价。试验中,SPF级KM小鼠分别ig给予一定量的生理盐水(空白对照)和SZD,测定其半数致死量(LD_(50)),评价其对小鼠的毒性。另选取SPF级SD大鼠,ig给予SZD,制备SZD含药学清(MS);MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)活力检测,甲基纤维素克隆形成实验,流式细胞术等检测SZD-MS对肿瘤细胞增殖抑制及诱导凋亡情况。毒性测试结果显示,小鼠无死亡,无法得出SZD的LD_(50)。与空白对照组比较,血液的生化学指标显示,差异有统计学意义(P研究表明,SZD经口最大给药量为每只小鼠0.8 m L/d,约相当于成人日剂量的120倍,毒性较小,安全性良好;且有较好的抗腹水瘤活性。

关键词：十枣汤急性毒性增殖抑制抗肿瘤活性

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超声辅助高凝固点低共熔溶剂提取黄芪黄酮

中国饲料 2024年第1期 58-65页

作者：孟悦潘旭张鑫艺袁帅刘婷婷袁橙刘吉成齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔医药科学研究所博士后科研工作站黑龙江齐齐哈尔161000 黑龙江中医药大学博士后流动站黑龙江齐齐哈尔161000

为将新型绿色溶剂应用于传统中草药活性成分的提取,同时改善低共熔溶剂在提取领域的限制因素,本试验使用超声辅助低共熔溶剂提取黄芪中的五种黄酮类化合物。共合成了10种不同的低共熔溶剂,单因素试验考察了超声温度、超声时间、液固比... 详细信息

为将新型绿色溶剂应用于传统中草药活性成分的提取,同时改善低共熔溶剂在提取领域的限制因素,本试验使用超声辅助低共熔溶剂提取黄芪中的五种黄酮类化合物。共合成了10种不同的低共熔溶剂,单因素试验考察了超声温度、超声时间、液固比、含水量和超声功率对五种黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上,以五种黄酮的总得率为指标使用响应面优化法优化提取工艺。结果表明:低共熔溶剂氯化胆碱-草酸(摩尔比1:2)为最佳提取溶剂,优化后的提取条件为:超声时间43 min,超声温度44℃,含水量54%,在此条件下五种黄酮的总得率为1.70 mg/g,高于传统的甲醇提取法。因此,超声辅助低共熔溶剂提取法可有效提高黄芪黄酮的得率。

关键词：低共熔溶剂黄芪黄酮响应面优化法超声辅助

羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯通过调控线粒体凋亡途径诱导HepG2细胞凋亡

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现代药物与临床 2024年第3期39卷 549-556页

作者：卜明王璐罗然徐天赐林宇葛鹏玲刘吉成齐齐哈尔医药科学研究所博士后科研工作站黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江中医药大学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006

目的探究羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯对HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法采用0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L的羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯作用于HepG2细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性。采用0、4、8、16μmol/L的羽扇豆醇-... 详细信息

目的探究羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯对HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法采用0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L的羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯作用于HepG2细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性。采用0、4、8、16μmol/L的羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯作用于HepG2细胞48 h后,AO/EB染色法和Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡率;JC-1染色法观察HepG2细胞的线粒体膜电位变化;DCFH-DA染色法观察细胞的活性氧(ROS)水平。Western blotting法检测各组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白表达变化。结果羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯呈时间和浓度相关性地抑制HepG2细胞增殖(P<0.01)。与对照组相比,羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯组细胞的ROS水平、总凋亡率、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C、裂解半胱氨酸蛋白酶9(cleaved-Caspase-9)、cleaved Caspase-3蛋白水平呈浓度相关性升高(P<0.01、0.001);线粒体的膜电位、Bcl-2蛋白表达则显著降低(P<0.01)。结论羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯可能通过调控线粒体凋亡途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,进而发挥抗肝癌作用。

关键词：羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯肝癌细胞凋亡活性氧线粒体 Bcl-2相关X蛋白细胞色素C 半胱氨酸蛋白酶9

乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达

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解剖学报 2024年第2期55卷 196-202页

作者：郝经伟潘婷李月朱文斌段文博刘立琨岳丽玲刘云龙高秀丽齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院医药科学研究院肿瘤分子生物学研究室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第二医院肿瘤外科黑龙江齐齐哈尔161006

目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制... 详细信息

目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。

关键词：乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化定点突变蛋白质组学人

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

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实用医学杂志 2024年第2期40卷 133-139页

作者：李萍汤拓郑皑雪张鲁平王涛洪鲜邓志会齐齐哈尔医学院医药科学研究院黑龙江齐齐哈尔161006

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)... 详细信息

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

关键词：微小染色体维持蛋白2 基因敲除宫颈癌 HeLa细胞 DNA复制

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兔抗人FAM21多克隆抗体的制备与鉴定

中国免疫学杂志 2024年

作者：汤拓卢彦基李文龙王涛洪鲜邓志会齐齐哈尔医学院医学技术学院齐齐哈尔医学院医药科学研究院蛋白质结构与功能研究室

目的：制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法：以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板，PCR扩增其2431-3006碱基的核苷酸序列，连接至pGEX-6p-1原核表达载体，构建表达FAM21第811-1002氨基酸片段的pGEX6p-1-FAM21重组表达... 详细信息

目的：制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法：以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板，PCR扩增其2431-3006碱基的核苷酸序列，连接至pGEX-6p-1原核表达载体，构建表达FAM21第811-1002氨基酸片段的pGEX6p-1-FAM21重组表达质粒。将重组质粒转化至BL21（DE3）感受态大肠杆菌中并进行诱导表达，用GST融合蛋白纯化磁珠纯化蛋白。将纯化后的GST融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔，收集的抗血清经过含GST蛋白的琼脂糖柱进行纯化。在FAM21基因沉默的HeLa细胞中，通过Western blot和免疫荧光实验检测抗体的特异性。结果：成功构建pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒，并在BL21（DE3）大肠杆菌中成功诱导表达，纯化后的GST融合蛋白分子量约为50kDa，免疫新西兰兔后纯化的抗体滴度大于1：128 000，并且具有较高的特异性。结论：成功构建了pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒，并制备了可用于Western blot和免疫荧光检测的兔抗人FAM21多克隆抗体。

关键词： FAM21 原核表达蛋白表达与纯化多克隆抗体

Ⅰ类α-甘露糖苷酶诱导HIV-1包膜糖蛋白降解及机制研究

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中国艾滋病性病 2024年第10期 1007-1012页

作者：刘笑辰王绍清王立平吴桐于秀文王俊苹张晓杰张英博樊丽李鸿梅齐齐哈尔医学院病理学院齐齐哈尔医学院精神卫生学院齐齐哈尔医学院医药科学研究院漳州卫生职业学院医学技术学院/转化医学检测应用技术协同创新中心

目的探究Ⅰ类α-甘露糖苷酶诱导HIV-1包膜糖蛋白（HIV-1 Env）的降解及其机制。方法将携带红色荧光表达Ⅰ类α-甘露糖苷酶的质粒与携带绿色荧光表达HIV-1 Env的质粒共转染293T细胞，Western Blot检测Ⅰ类α-甘露糖苷酶对HIV-1 Env表... 详细信息

目的探究Ⅰ类α-甘露糖苷酶诱导HIV-1包膜糖蛋白（HIV-1 Env）的降解及其机制。方法将携带红色荧光表达Ⅰ类α-甘露糖苷酶的质粒与携带绿色荧光表达HIV-1 Env的质粒共转染293T细胞，Western Blot检测Ⅰ类α-甘露糖苷酶对HIV-1 Env表达水平的影响；激光共聚焦成像系统观察Ⅰ类α-甘露糖苷酶的亚细胞定位及Ⅰ类α-甘露糖苷酶与HIV-1 Env之间的相互作用；内质网相关蛋白质降解（ERAD）途径抑制剂探讨Ⅰ类α-甘露糖苷酶诱导HIV-1 Env降解的可能途径。结果 Ⅰ类α-甘露糖苷酶可显著降低HIV-1 Env的表达水平，降低幅度达25%至68%；敲低Ⅰ类α-甘露糖苷酶的表达水平后，HIV-1 Env表达水平升高；ERAD抑制剂可显著升高HIV-1 Env的表达水平；激光共聚焦显微镜观察结果显示，Ⅰ类α-甘露糖苷酶与HIV-1 Env之间存在相互作用；激光共聚焦显微镜观察结果显示Ⅰ类α-甘露糖苷酶定位于内质网和高尔基体，与其行使生物学功能的部位相同。结论 Ⅰ类α-甘露糖苷酶可能通过ERAD途径诱导HIV-1 Env降解。

关键词： Ⅰ类α-甘露糖苷酶 1型艾滋病病毒包膜糖蛋白激光共聚焦内质网相关蛋白质降解途径

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类黄酮化合物纳米递送系统研究进展

食品安全质量检测学报 2024年第13期15卷 49-58页

作者：董征于振东王倩周上倾程宇刘吉成齐齐哈尔医学院公共卫生学院齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院医药研究所博士后工作站齐齐哈尔161006 黑龙江中医药大学博士后流动站哈尔滨150006

类黄酮是植物中特有的化学物质,在自然界中广泛存在,具有抗氧化、抗炎、抗癌等生物学作用。然而,其作用效果一直受到生物利用度低和药代动力学差的影响,限制了体内生物学作用。解决这些问题的方法之一是通过纳米载体改善类黄酮在体内... 详细信息

类黄酮是植物中特有的化学物质,在自然界中广泛存在,具有抗氧化、抗炎、抗癌等生物学作用。然而,其作用效果一直受到生物利用度低和药代动力学差的影响,限制了体内生物学作用。解决这些问题的方法之一是通过纳米载体改善类黄酮在体内的稳定性和生物利用度,减少有效成分在体内运输过程中分解,纳米载体的应用使类黄酮在体内的运输具有靶向性,能够将类黄酮准确递送至相应靶点,减少其毒性和不良反应,提高其作用效果。本文结合近几年类黄酮化合物纳米递送系统的研究进展,重点对类黄酮纳米载体类型及其在疾病中的应用进行了归纳总结,以期为深入开发应用类黄酮化合物提供新的思路。

关键词：类黄酮纳米载体递送系统疾病

基于超高效液相色谱/四级杆-静电场轨道阱质谱的芩百清肺浓缩丸质量控制方法研究

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中草药 2024年第20期 6889-6901页

作者：辛杨于洋王海军杨清竹王伟明黑龙江省中医药科学院齐齐哈尔大学化学与化学工程学院齐齐哈尔医学院全科医学与继续教育学院齐齐哈尔大学生命科学与农林学院

目的建立芩百清肺浓缩丸（Qinbai Qingfei Concentrated Pills,QQCP）的质量控制方法。方法正交试验优化QQCP中总生物碱、总黄酮、总皂苷的提取工艺;采用超高效液相色谱/四级杆-静电场轨道阱质谱（UHPLC/Q-Exactive Orbitrap MS）检测... 详细信息

目的建立芩百清肺浓缩丸（Qinbai Qingfei Concentrated Pills,QQCP）的质量控制方法。方法正交试验优化QQCP中总生物碱、总黄酮、总皂苷的提取工艺;采用超高效液相色谱/四级杆-静电场轨道阱质谱（UHPLC/Q-Exactive Orbitrap MS）检测,分别对液相色谱流动相、柱温、梯度洗脱条件,质谱分辨率、喷雾电压等条件进行优化,确定3类成分的检测条件,依据色谱保留时间、精确质荷比、串联质谱数据,实现化学成分定性检测;对13个经对照品验证结构的化学成分进行定量方法学考察,并测定其在3批次QQCP中的含量。结果总生物碱的最优提取工艺为料液比1:10、40℃、60%乙醇、超声提取4次、每次40 min,总黄酮的最优提取工艺为料液比1:400、70℃、50%乙醇、超声提取1次、50 min,总皂苷的最优提取工艺为料液比1:30、60℃、40%甲醇、超声提取1次、50 min;按最优工艺获得的QQCP提取液中,共定性检测到72个化学成分,其中对叶百部碱、芥酸酰胺、硬脂酰胺、白杨素、槲皮素、汉黄芩素、千层纸素A、黄芩苷、野黄芩苷、葛根素、去芹糖桔梗皂苷D、桔梗皂苷D、去芹糖桔梗皂苷D3实现了定量检测,线性关系曲线的R2均大于0.995;以上成分在3批次QQCP中的质量分数分别为10.543～36.891、78.764～124.300、0.110～0.364、3.353～8.052、0.099～0.152、2.062～3.201、0.821～1.981、6.323～12.421、0.832～1.291、3.210～5.461、0.120～0.189、7.551～9.443、0.872～1.423μg/g。结论所建立的UHPLC/Q-Exactive Orbitrap MS检测方法可为QQCP的质量控制及相关化合物的定量分析提供方法学依据。

关键词：超高效液相色谱/四级杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC/Q-Exactive Orbitrap MS) 芩百清肺浓缩丸质量控制正交试验对叶百部碱芥酸酰胺硬脂酰胺白杨素槲皮素汉黄芩素千层纸素A 黄芩苷野黄芩苷葛根素去芹糖桔梗皂苷D 桔梗皂苷D 去芹糖桔梗皂苷D3