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稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

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包头医学院学报 2022年第1期38卷 26-30页

作者：陶美彤朱伟舒凡陈昱张蓉谢雅彬谢伟巴德仁贵姜树原刘晓蕾邵国贾小娥周成江包头医学院基础医学与法医学院内蒙古包头014040 包头医学院神经科学研究所内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室包头医学院药学院包头市第三医院首都医科大学宣武医院低氧适应转化医学北京市重点实验室

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自... 详细信息

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流。方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白。将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348。慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系。诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析。Western blot检测目的蛋白表达情况。结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确。在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体。无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带。结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础。

关键词： SH-SY5Y细胞自噬 EGFP-LC3 稳定细胞系

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自身免疫性肝病患者血清IgG4水平分析

实用肝脏病杂志 2014年第4期17卷 396-399页

作者：张敏韩涛聂彩云王伟杜卫杰周淑芬王棕覃孙扬丁贤朱争艳天津医科大学三中心临床学院天津市300170 天津市第三中心医院肝内科首都儿科研究所检验科天津市第三中心医院检验科天津市第三中心医院科教科天津市人工细胞重点实验室

目的探讨不同自身免疫性肝病患者血清免疫球蛋白G4(immunoglobulin G4,IgG4)水平差异,并分析不同血清IgG4水平的自身免疫性肝病患者临床特点的差异。方法收集自身免疫性肝病患者65例,其中自身免疫性肝炎(AIH)11例、原发性胆汁性肝硬化(p... 详细信息

目的探讨不同自身免疫性肝病患者血清免疫球蛋白G4(immunoglobulin G4,IgG4)水平差异,并分析不同血清IgG4水平的自身免疫性肝病患者临床特点的差异。方法收集自身免疫性肝病患者65例,其中自身免疫性肝炎(AIH)11例、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)47例及AIH与PBC重叠综合征7例。采用免疫散射比浊法检测三组患者血清IgG4水平,并分析三组之间血清IgG4水平的差异。根据血清IgG4水平的不同进行分组,分析不同血清IgG4水平的自身免疫性肝病患者临床特点的差异。对组间正态分布的计量资料的比较应用独立样本t检验,对非正态分布者采用Mann-Whitney U检验。计数资料的比较采用Fisher’s确切概率法。结果 AIH患者血清IgG4水平为642.2 mg/L(97.7 mg/L^1687.0 mg/L),高于PBC患者[153.9 mg/L(78.9mg/L^400.3 mg/L),P=0.076]及重叠综合征患者[229.9 mg/L(154.9 mg/L^417.9 mg/L),P=0.388],无统计学差异。其中3例AIH患者血清IgG4水平异常升高(≥1350 mg/L),与血清IgG4水平较低的8例AIH患者比,IgG4水平和IgG4/IgG比值较高,差异具有统计学意义(P风湿性关节炎,而其他8例AIH患者未合并其他自身免疫性或代谢性疾病;血清IgG4水平较高(IgG4水平≥200 mg/L)的14例PBC患者与IgG4水平较低的33例PBC患者比,血清总胆红素水平较高[(45.09±74.85)μmol/L对(26.38±23.03)μmol/L,P=0.05]。结论与PBC及PBC与AIH重叠综合征患者比,AIH患者血清IgG4水平较高。血清IgG4水平较高的AIH患者可能较易合并其他自身免疫性或代谢性疾病。

关键词：自身免疫性肝病免疫球蛋白G4 临床特征

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甲状腺机能亢进的病因学研究

首都医科大学学报 1987年第1期 39-43页

作者：陈哲生李毅民李龄风朱琳刘英琴卢辉章周继盛首都医学院组织学教研室首都医学院微生物学教研室中国医科院卫生学校宣武医院外科

对15例甲亢病人甲状腺进行病理和免疫组化的研究。病理切片观察为典型甲亢病理变化,免疫组化证实其中6例有淋巴滤泡,并在淋巴滤泡中可见为酶标记 IgG 着色的淋巴细胞。对国际标准品 LATS—B 和国内提取 LATS—天津两种甲状腺刺激自身抗... 详细信息

对15例甲亢病人甲状腺进行病理和免疫组化的研究。病理切片观察为典型甲亢病理变化,免疫组化证实其中6例有淋巴滤泡,并在淋巴滤泡中可见为酶标记 IgG 着色的淋巴细胞。对国际标准品 LATS—B 和国内提取 LATS—天津两种甲状腺刺激自身抗体,进行一系列免疫学试验,实验结果证明 LATS—B 为 IgG 的多克隆免疫球蛋白,LATS—国内不是单一 IgG,尚含有 IgM。经 EL1SA 试验首次证实神经节苷脂Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ型都能与上述两种 Tsaab 结合,且Ⅳ型与 LATS—B 结合较好。

关键词：甲状腺刺激抗体长效促甲状腺素神经节苷脂酶联免疫吸附试验

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HLA与非溶血性输血反应

中华内科杂志 1988年第2期27卷

作者：田丁陈峰董志兵付剑峰靳怀建任汉云李银水李锦云李万强李四君卢锡京马明信蒋玉玲孟昭亨谢光潞孙惠玲孙玮张志郑天林祝瑞泉北京医科大学人民医院免疫遗传实验室北京红十字血液中心首都医学院宣武医院内科血液组北京市积水潭医院内科血液病区北京医科大学第一附属医院内科血液组中日友好医院血液科

北京地区5所医院6个病区、198例血液病患者反复接受输血后,血清内HLA抗体的检出率为61.1%。对分组和单个病例的动态研究均表明,接受输血次数增加,HLA抗体的阳性率也增高,并证实输血后非溶血性输血反应与受者体内HLA抗体明显相关。为预... 详细信息

北京地区5所医院6个病区、198例血液病患者反复接受输血后,血清内HLA抗体的检出率为61.1%。对分组和单个病例的动态研究均表明,接受输血次数增加,HLA抗体的阳性率也增高,并证实输血后非溶血性输血反应与受者体内HLA抗体明显相关。为预防这类输血反应,作者建议,对血液病患者在尽可能地避免、减少或推迟输血的同时,应积极推广成份輸血等措施。

关键词：人类白细胞抗原输血白血病

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星状神经节阻滞治疗经前期综合征的研究

现代中西医结合杂志 2015年第11期24卷 1154-1157页

作者：王宏伟田斌斌顾春亮胡百奇张瑞杰贺淑君郭玉娜江苏省泰兴市第三人民医院江苏泰兴225400 江苏省泰州市中医院江苏泰州225300 江苏省苏州市相城区第二人民医院江苏苏州215100 解放军第150中心医院河南洛阳471031 山西省介休市人民医院山西介休032000 北京市海淀区妇幼保健院北京100080 首都医科大学宣武医院北京100053

目的观察星状神经节阻滞治疗经前期综合征患者的疗效及对血清雌二醇(E2)、孕酮(P)的影响。方法选择112例星状神经节阻滞患者作为观察组,均在月经后7d行双侧星状神经节阻滞治疗,3d注射1次,4次为1个疗程,下个月经后7d行下个疗程,连续治疗... 详细信息

目的观察星状神经节阻滞治疗经前期综合征患者的疗效及对血清雌二醇(E2)、孕酮(P)的影响。方法选择112例星状神经节阻滞患者作为观察组,均在月经后7d行双侧星状神经节阻滞治疗,3d注射1次,4次为1个疗程,下个月经后7d行下个疗程,连续治疗3个月经周期。另选择健康自愿受试且年龄与观察组相仿女性作为对照组。分别采集对照组和观察组治疗前后月经周期中增殖期、分泌期、经前期、月经期4个不同时期的血样,用放射免疫法检测血清E2和P含量并进行比较;观察星状神经节阻滞治疗过程中经前乳房胀痛、失眠多梦、经行腹痛、经行头痛、烦躁易怒、经行水肿症状变化情况以及连续治疗3个月经周期后的总体疗效。结果观察组完成治疗100例。观察组增殖期、分泌期E2显著降低,P分泌期高峰阙如;治疗3个月经周期后,增殖期、分泌期E2均明显增高且接近正常水平,分泌期P恢复正常。治疗第3个月经周期,经前乳房胀痛、失眠多梦、经行头痛、烦躁易怒、经行水肿的总有效率均为100%,经行腹痛的总有效率为95%。治疗3个月经周期后总有效率为96%。结论经前期综合征患者月经不同时期激素水平尤其是血清E2、P的正常周期性变化紊乱是出现不同症状的重要机制;星状神经节阻滞通过对E2、P激素水平周期性变化失调的调节,促进机体内分泌的平衡,从而改善患者症状。

关键词：星状神经节神经传导阻滞经前期综合征

血管内皮细胞生长因子在类风湿关节炎患者血清中的水平及其临床意义

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广西医科大学学报 2017年第1期34卷 20-23页

作者：李雪峰尚俊英甄志强吴卫国王飞唐咸艳北京市丰台中西医结合医院骨科北京100072 北京市石景山医院神经内科二病区北京100043 北京市丰台右安门医院检验科北京100054 广西医科大学公共卫生学院南宁530021

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测RA活动组(73例)、RA缓解组(39例)及健康对照组(52例)的血清VEGF的质量浓度,分析血清VEGF质量浓度与RA病... 详细信息

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测RA活动组(73例)、RA缓解组(39例)及健康对照组(52例)的血清VEGF的质量浓度,分析血清VEGF质量浓度与RA病情活动指标之间的关系。结果:RA活动组的血清VEGF质量浓度明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。C反应蛋白(CRP)和关节疼痛数与VEGF质量浓度呈明显正相关关系(P<0.01)。结论:血清VEGF质量浓度在RA患者中明显升高,且与病情具有相关性,在临床上可作为RA病情判断和疗效评估的指标之一。

关键词：类风湿关节炎血管内皮生长因子相关性

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原发性中枢神经系统血管炎诊治进展

中华脑血管病杂志（电子版） 2021年第2期15卷 129-129页

作者：董会卿首都医科大学宣武医院神经内科中国免疫学会神经免疫分会中华医学会神经病学分会神经免疫学组中国医师协会神经内科医师分会神经免疫专业委员会《中国神经免疫学和神经病学杂志》

【视频简介】原发性中枢神经系统血管炎(primary angiitis of the central nervous system,PACNS)是局限于脑实质、脊髓和软脑膜的中小动脉的罕见重度免疫介导的炎症性疾病。自然人群的PACNS发病率和患病率尚不明确,临床表现多样且不具... 详细信息

【视频简介】原发性中枢神经系统血管炎(primary angiitis of the central nervous system,PACNS)是局限于脑实质、脊髓和软脑膜的中小动脉的罕见重度免疫介导的炎症性疾病。自然人群的PACNS发病率和患病率尚不明确,临床表现多样且不具有特异性。近年来,由于神经影像技术的发展,尤其是脑血管检查技术的进步,使神经影像学检查对PACNS的诊断、鉴别诊断及分型具有更重要的意义。近年来临床倾向于将PACNS视为有多种临床及病理亚型的谱系疾病。目前仍以脑活检为诊断PACNS 的金标准,临床诊断仍旧广泛沿用calabrese 和mallek 诊断标准。2009 年Birnbaum 和Hellmann 等在此基础上提出了新的补充诊断标准,用以排除可逆性脑血管痉挛综合征。本视频解读由中国免疫学会神经免疫学分会、中华医学会神经病学分会神经免疫学组、中国医师协会神经内科医师分会神经免疫专业委员会组成的专家组,针对PACNS的流行病学、临床表现及分类、诊断及治疗进行讨论后形成的专家共识,以指导临床诊治PACNS。

关键词：神经免疫学中国免疫学会中国医师协会中华医学会脑活检自然人群脑血管痉挛免疫介导

乏力、伴肌肉关节疼痛,并非是风湿免疫性疾病的专利,有可能是甲状腺功能减退性肌病

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首都食品与医药 2024年第6期31卷 7-7页

作者：胡金良那开宪北京市朝阳区小红门社区卫生服务中心北京100023 首都医科大学附属北京朝阳医院北京100020

对于乏力、伴肌肉关节疼痛等症状,尤其是发生在寒冷的冬季,临床上多考虑为风湿免疫性疾病;如果患者因冠状动脉粥样硬化性心血管疾病服用他汀类药物,医生多认为乏力、肌肉关节疼痛与他汀类药物不耐受有关;若患者出现畏寒、少汗、乏力、... 详细信息

对于乏力、伴肌肉关节疼痛等症状,尤其是发生在寒冷的冬季,临床上多考虑为风湿免疫性疾病;如果患者因冠状动脉粥样硬化性心血管疾病服用他汀类药物,医生多认为乏力、肌肉关节疼痛与他汀类药物不耐受有关;若患者出现畏寒、少汗、乏力、懒言少动等症状,临床常认为其与甲状腺功能减退有关,而甲状腺功能减退引起的乏力、肌肉关节疼痛则较为罕见.临床研究表明,20%-80%的甲减症患者有肌肉方面的临床表现,部分患者可表现为甲状腺功能减退性肌病,临床上常常被忽视.

关键词：肌肉关节疼痛风湿免疫性疾病甲状腺功能减退性肌病动脉粥样硬化性心血管疾病他汀类药物不耐受少汗乏力

基于黑质炎症小体NLRP3信号通路探讨芍地帕宁方调控帕金森病小鼠疼痛的机制

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中国老年学杂志 2024年第21期 5275-5280页

作者：夏阿龙杨文明朱四欢石莹王肖薇汪瑗玲许二赫李俊安徽中医药大学第一临床医学院国家老年疾病临床医学研究中心安徽省分中心新安医学教育部重点实验室合肥综合性国家科学中心大健康研究院-新安医学与中医药现代化研究所首都医科大学宣武医院

目的观察芍地帕宁方对诱导的亚急性帕金森病(PD)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的亚急性帕金森病(PD)模型小鼠痛阈的变化，并分析可能的机制。方法将21只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组与帕宁组。对照组注射等体... 详细信息

目的观察芍地帕宁方对诱导的亚急性帕金森病(PD)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的亚急性帕金森病(PD)模型小鼠痛阈的变化，并分析可能的机制。方法将21只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组与帕宁组。对照组注射等体积生理盐水，其余各组均予腹腔注射MPTP(30 mg/kg),连续5 d,制备亚急性PD小鼠模型。造模成功后，帕宁组按生药40.5 g/kg给予芍地帕宁方药液灌胃处理，1次/d,连用2 w;模型组予以等体积生理盐水，1次/d,连用2 w。采用电子测痛仪、足底热刺痛仪检测小鼠机械痛阈和热痛阈，爬杆、悬挂试验检测小鼠运动行为学变化；Western印迹法检测黑质NOD样受体蛋白(NLRP)3、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α炎症因子蛋白的表达；免疫组织化学法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达。结果与对照组比较，模型组爬杆时间明显延长、悬挂评分明显降低、机械痛阈值、热痛阈明显降低(P<0.01),NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.01),黑质内TH表达明显降低(P<0.01);与模型组比较，帕宁方组爬杆时间明显缩短(P<0.01),悬挂评分、机械痛阈值、热痛阈明显增加(P<0.05);NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.01),黑质TH阳性细胞表达明显增多(P<0.01)。结论芍地帕宁方可改善PD小鼠疼痛，其作用机制可能与其抑制黑质NLRP3炎症小体表达，减少炎症因子的释放而提高黑质多巴胺神经元表达有关。

关键词：帕金森病 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP) 疼痛 NOD样受体蛋白(NLRP)3 炎症因子