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凡纳对虾parkin共调基因和parkin在抗白斑综合征病毒中的表达分析和SNP开发

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渔业科学进展 2025年第1期46卷 194-209页

作者：薛倩李旭鹏李洋栾生罗坤孔杰邢群孟宪红浙江海洋大学水产学院浙江舟山316021 海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266237 邦普种业科技有限公司山东潍坊261311

本实验室前期研究中基于全基因组关联分析(GWAS)方法筛选到抗白斑综合征病毒(WSSV)候选基因:parkin共调基因(PACRG)。PACRG与帕金森病相关基因parkin共用一个双向启动子,二者共同参与细胞自噬过程,从而在细胞保护方面发挥作用。本研究... 详细信息

本实验室前期研究中基于全基因组关联分析(GWAS)方法筛选到抗白斑综合征病毒(WSSV)候选基因:parkin共调基因(PACRG)。PACRG与帕金森病相关基因parkin共用一个双向启动子,二者共同参与细胞自噬过程,从而在细胞保护方面发挥作用。本研究对凡纳对虾(Penaeus vannamei)PACRG和parkin在抗WSSV中的功能进行探讨,对其mRNA和氨基酸序列进行特征分析,利用real-timePCR技术检测对虾感染WSSV后不同时间、不同组织中PACRG和parkin的表达水平。通过荧光原位杂交技术(FISH)进行空间定位。利用PCR和Sanger测序技术获得单核苷酸多态性位点(SNP)并进行抗WSSV的关联分析。结果显示,PACRG开放阅读框(ORF)全长600bp,编码199个氨基酸,预测包含一个ParcG结构域。parkinORF序列全长1653bp,编码550个氨基酸,预测包含UBQ、IBR结构域和一个信号肽结构。与多物种进行同源序列比对发现,凡纳对虾PACRG氨基酸序列与日本对虾(Penaeus japonicus)的同源性高达89.70%;凡纳对虾parkin氨基酸序列与中国对虾(Penaeus chinensis)和斑节对虾(Penaeus monodon)的同源性高达93.45%。PACRG和parkin蛋白的保守性较高。感染WSSV后,PACRG和parkin在对虾肝胰腺、鳃、肌肉和眼柄中的表达水平发生显著变化,其中,眼柄中PACRG和parkin表现出极相似的组织表达模式。在肌肉中,PACRGmRNA和WSSV在空间位置上呈现高度重叠状态。结合上述结果,推测PACRG和parkin在凡纳对虾与WSSV的互作中发挥功能。在PACRG中筛选到2个SNP位点,在parkin中筛选到15个SNP位点,其中位于parkin非翻译区(UTR)的5个SNP位点与抗WSSV性状显著相关。本文为研究凡纳对虾抗WSSV的分子机制和抗病分子育种提供了理论依据和参考数据。

关键词：凡纳对虾白斑综合征病毒(WSSV) parkin共调基因(PACRG) parkin基因 SNP

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沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体核酸快速检测方法的建立

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中国病原生物学杂志 2025年第2期 158-163+170页

作者：李雨欣周华誉张瑜高静蔡亦梅逯素梅任鲁风马鲁豫山东第一医科大学北京中科生仪科技有限公司山东第一医科大学第一附属医院(山东省千佛山医院)检验医学科

目的建立一种基于微流控芯片平台的可同时鉴别沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的现场化全自动检测方法。方法选取CT的隐蔽性质粒、NG的porA基因和UU... 详细信息

目的建立一种基于微流控芯片平台的可同时鉴别沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的现场化全自动检测方法。方法选取CT的隐蔽性质粒、NG的porA基因和UU的16S rRNA中的保守序列作为检测靶标，设计特异性引物和TaqMan探针；分别制备CT、NG、UU三种病原体的阳性克隆菌株进行灵敏度初步测试。开发基于全自动检测设备的一体化微流控芯片，实现“样本进-结果出”的核酸提取纯化及实时荧光PCR全过程。使用经过数字PCR定量的CT、NG、UU三种病原体的液体室内质控品对全自动检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行评价。用建立的全自动检测方法与已上市的多重实时荧光PCR法检测试剂盒同时检测160例临床样本，评价其一致性。结果阳性克隆菌株经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定，构建正确。建立的全自动检测方法检测CT、NG和UU的检出限均可达到1×10～2 copies/test,检测范围1×10～2～1×10～7 copies/test;该方法特异性好，不受单纯疱疹病毒Ⅰ型/Ⅱ型、腺病毒、肠道病毒71型、肺炎衣原体、肺炎支原体以及人免疫缺陷病毒Ⅰ型的干扰；该方法重复性好，变异系数均0.05);全自动检测方法与对比试剂盒检测CT、NG和UU结果的阳性符合率分别为96.2%、94.4%和93.4%,阴性符合率均为100%,总符合率分别为99.4%、99.4%和97.5%。结论建立的现场化全自动检测方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性，该方法自动化程度高，检测时间短，操作简便、快速，不受实验室场地限制，适合于CT、NG、UU的临床快速诊断。

关键词：沙眼衣原体淋球菌解脲脲原体微流控芯片现场化核酸检测

传统卷烟和电子烟混合烟气的感官评价—基于模糊数学对跨界型电子烟的研究

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中国烟草学报 2020年第6期26卷 18-24页

作者：李波张书铭宋时浩王明霞刘震王辉张从跃岳明飞尹绍锴青岛颐中科技有限公司青岛266021

以传统卷烟和电子烟的混合烟气为研究对象,确定了口味、香气、谐调、杂气、刺激性、余味、甜腻感、烟雾量为感官评价词,以非常好、很好、中等、较差作为四个评语等级,采用层次分析法确定混合烟气感官评价词的权重,对8款样品进行基于模... 详细信息

以传统卷烟和电子烟的混合烟气为研究对象,确定了口味、香气、谐调、杂气、刺激性、余味、甜腻感、烟雾量为感官评价词,以非常好、很好、中等、较差作为四个评语等级,采用层次分析法确定混合烟气感官评价词的权重,对8款样品进行基于模糊数学的综合感官评价。重复性试验证明该方法可靠稳定,能够对传统卷烟和电子烟混合烟气比较科学、合理、贴近实际的精确量化评价。

关键词：混合烟气跨界型电子烟评价权重模糊综合评判

鸡粪中沙门氏菌和大肠杆菌O78多重PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 58-62页

作者：胡茂秀王莎莎俞超青岛康伦生物科技有限公司山东青岛266000

为建立同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌078的方法，本研究根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O78O-抗原特异基因序列设计引物，并在细菌16SrDNA区设计内参引物，通过各项参数调整优化，建立了能够直接从样品中同时检测沙门氏菌和大肠杆菌07... 详细信息

为建立同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌078的方法，本研究根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O78O-抗原特异基因序列设计引物，并在细菌16SrDNA区设计内参引物，通过各项参数调整优化，建立了能够直接从样品中同时检测沙门氏菌和大肠杆菌078的多重PCR检测方法。结果显示：该方法可以同时扩增出0781113bp和沙门氏菌821bp的特异片段以及细菌16SrDNA527bp的通用片段，而对于其他13种肠道致病菌只能扩增出527bp的细菌同源片段，具有较强的特异性。该体系检测沙门氏菌和大肠杆菌O78的最低检出限分别为103cfu／mL和102 cfia／mL。增菌5h，鸡粪模拟污染菌样品中沙门氏菌和大肠杆菌078的检测灵敏度分别为10 3cfu／mL和10 2cfu／mL。本研究建立的检测方法能够在8h内完成鸡粪样品中两种靶标菌的快速检测，对于沙门氏菌和大肠杆菌078的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。

关键词：沙门氏菌大肠杆菌O78 多重PCR 检测

表达人源补体调节蛋白hCD55对异种胰岛移植的保护作用

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器官移植 2022年第4期13卷 475-482页

作者：李欣潘登科周佳闫杰陈军杜嘉祥龚曼琳电子科技大学医学院成都610054 成都中科奥格生物科技有限公司四川中科奥格生物科技有限公司

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰... 详细信息

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰岛细胞,检测其纯度及胰岛素分泌功能,通过琼脂糖凝胶电泳、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术从DNA、RNA和蛋白水平检测hCD55的表达。在新鲜人血清孵育条件下,进行补体依赖的细胞毒性实验和补体沉积检测。结果分离得到的3种基因型猪胰岛细胞纯度>75%,糖刺激指数>1。GTKO/hCD55猪胰岛细胞上表达hCD55信使核糖核酸(mRNA)和hCD55蛋白,能够减少人补体C3c和攻膜复合物C5b-9的沉积,降低细胞毒性。结论猪胰岛细胞上表达hCD55蛋白能够抑制人补体激活,降低补体介导的杀伤作用,表明hCD55蛋白在猪胰岛细胞上可发挥补体保护效果,这为hCD55在异种胰岛移植中的应用提供了理论依据。

关键词：糖尿病猪胰岛细胞转基因人类簇分化抗原55(hCD55) 补体立即经血液介导的炎症反应(IBMIR) C3c C5b-9

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戊聚糖在饲料工业中应用的研究

中国畜牧兽医 2010年第11期37卷 9-12页

作者：李清峰马向东青岛康地恩生物科技有限公司青岛266007

作为饲料原料中非淀粉多糖的主要成分,戊聚糖是畜禽饲料中最主要的抗营养因子,也是评价植物性原料饲用性能及酶作用效果的主要指标。为了促进非常规原料及戊聚糖酶的科学使用,作者对可用于饲料工业领域的戊聚糖最新研究成果进行综述,详... 详细信息

作为饲料原料中非淀粉多糖的主要成分,戊聚糖是畜禽饲料中最主要的抗营养因子,也是评价植物性原料饲用性能及酶作用效果的主要指标。为了促进非常规原料及戊聚糖酶的科学使用,作者对可用于饲料工业领域的戊聚糖最新研究成果进行综述,详细介绍了戊聚糖的理化性质、分布特点、测定方法、抗营养作用及酶解性质。

关键词：戊聚糖饲料原料水溶性戊聚糖抗营养成分木聚糖酶

微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响

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动物营养学报 2024年第8期36卷 4944-4956页

作者：曲丽马欣欣张柏林刘雯雯陈正杰王述柏青岛农业大学动物科技学院青岛266109 山东微研生物科技有限公司滨州256600

本试验旨在饲粮中研究添加不同水平微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响。将540只海兰褐蛋鸡按体重和产蛋率均等原则分为6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。1组为空白对照组,饲喂基础饲粮;2组为化学合成斑蝥黄... 详细信息

本试验旨在饲粮中研究添加不同水平微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响。将540只海兰褐蛋鸡按体重和产蛋率均等原则分为6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。1组为空白对照组,饲喂基础饲粮;2组为化学合成斑蝥黄对照组,在基础饲粮中添加6 mg/kg的化学合成斑蝥黄;3~6组为试验组,分别在基础饲粮中添加4、6、8、12 mg/kg的微生物发酵斑蝥黄。预试期7 d,正试期21 d。结果表明:1)各组之间产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比均无显著差异(P>0.05)。2)第7天,3组蛋壳强度显著高于1组(P0.05)。3)第7天,3、4组蛋黄胆固醇含量极显著低于1、2、6组(P0.05)。综上所述,饲粮中添加4~12 mg/kg的微生物发酵斑蝥黄可改善海兰褐蛋鸡蛋壳品质,提高蛋黄卵磷脂含量,降低蛋黄胆固醇含量,但对蛋黄的着色效果不及化学合成斑蝥黄。本试验条件下,饲粮中微生物发酵斑蝥黄的适宜添加水平为6~7 mg/kg。

关键词：微生物发酵斑蝥黄蛋鸡生产性能蛋品质血清生化指标

壳聚糖絮凝回收分级等电沉淀后鱼糜漂洗水中蛋白质

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农业工程学报 2015年第6期31卷 327-332页

作者：齐祥明王路逯慎杰宛天巍中国海洋大学食品科学与工程学院青岛266003 青岛蓝翼生物科技有限公司青岛266071 滨州泰裕麦业有限公司滨州256652

为实现鱼糜漂洗水中蛋白质的洁净回收,同时达到净化鱼糜漂洗水及提高资源利用率的目的,该文针对分级等电沉淀回收蛋白质之后的低蛋白浓度废水,研究了蛋白-壳聚糖絮凝过程,探索了主要动力学和热力学因素对絮凝过程的影响;并根据Box-Benhn... 详细信息

为实现鱼糜漂洗水中蛋白质的洁净回收,同时达到净化鱼糜漂洗水及提高资源利用率的目的,该文针对分级等电沉淀回收蛋白质之后的低蛋白浓度废水,研究了蛋白-壳聚糖絮凝过程,探索了主要动力学和热力学因素对絮凝过程的影响;并根据Box-Benhnken设计进行了优化试验。结果表明,狭鳕鱼鱼糜漂洗水中蛋白质等电点主要集中在4.30和5.50,分级回收后蛋白质的回收率达到77.7%。其中絮凝时间、壳聚糖用量和脱乙酰度、絮凝温度和p H值对壳聚糖絮凝蛋白质均有影响,而絮凝温度的影响更多体现在50℃以上的较高温度区域。根据响应面分析结果,在脱乙酰度95%,反应时间90 min,p H值8.04,壳聚糖用量369 mg/L,温度19.6℃的条件下,可获得94.75%的蛋白总回收率,废水中蛋白质量浓度降至0.37 mg/m L以下。研究结果为富蛋白生产废水处理提供了技术参考。

关键词：废水处理优化絮凝鱼糜分级等电沉淀壳聚糖水溶性蛋白质

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一株泡叶藻降解菌的筛选及其发酵条件优化

山东农业大学学报（自然科学版） 2014年第4期45卷 515-521页

作者：刘露公春艳赵宏涛王鹏李园园青岛明月蓝海生物科技有限公司山东青岛266400

为了利用微生物降解泡叶藻,本研究以泡叶藻为唯-营养物质从土壤中筛选到一株对泡叶藻有明显降解效果的菌株,编号2-2.根据其形态学特征、生理生化特性和16S rDNA 序列分析鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）.对菌株的发酵... 详细信息

为了利用微生物降解泡叶藻,本研究以泡叶藻为唯-营养物质从土壤中筛选到一株对泡叶藻有明显降解效果的菌株,编号2-2.根据其形态学特征、生理生化特性和16S rDNA 序列分析鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）.对菌株的发酵条件进行了优化,最优发酵培养基为：泡叶藻30 g/L、酵母粉6 g/L 和葡萄糖4 g/L.摇瓶最佳培养条件为：250 mL 三角瓶装液量50 mL,起始pH 7.5,发酵温度32 ℃,发酵48 h 有效活菌数为2.4×109CFU/mL.并对发酵液酶活进行了测定,其中纤维素酶活为47.7 U/mL,蛋白酶活为3.4 U/mL,海藻胶裂解酶活为0.721U/mL.研究结果表明巨大芽孢杆菌2-2 同时具有海藻胶裂解酶、蛋白酶和纤维素酶活性,具有良好的应用前景.

关键词：泡叶藻降解菌巨大芽孢杆菌海藻胶裂解酶发酵条件