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结肠类器官的构建与应用研究进展

中华胃肠外科杂志 2019年第11期22卷 1095-1100页

作者：范圣先尹健一王剑王萌李幼生管文贤南京大学医学院附属鼓楼医院普通外科 210008 约翰·霍普金斯大学医学院胃肠内科美国华盛顿21201 上海交通大学医学院附属第九人民医院普通外科 200011

结肠类器官是一种衍生于结肠干细胞或多能干细胞的三维细胞培养模型,其实质是在添加多种生长因子的基质胶中对结肠干细胞或多能干细胞及其衍生的肠上皮细胞、肠内分泌细胞、杯状细胞等进行三维培养。体外构建的结肠类器官在细胞成分、... 详细信息

结肠类器官是一种衍生于结肠干细胞或多能干细胞的三维细胞培养模型,其实质是在添加多种生长因子的基质胶中对结肠干细胞或多能干细胞及其衍生的肠上皮细胞、肠内分泌细胞、杯状细胞等进行三维培养。体外构建的结肠类器官在细胞成分、组织架构及特定功能等方面与结肠上皮组织高度相似,实现了在体外培养环境中对结肠上皮组织的复制。与传统的结肠疾病研究模型(常规细胞培养模型和动物实验模型)相比,结肠类器官具有明显的优势,如培养成功率高、培养周期短、与来源组织高度一致等。自2011年Sato等首次报道结肠类器官模型的构建方法以来,结肠类器官迅速成为结肠相关疾病研究领域的热点。目前,结肠类器官已经被广泛应用于结肠上皮的生理功能的调整以及感染性腹泻、溃疡性结肠炎、肠道损伤再生、结肠肿瘤等多个领域的研究。本综述讨论了结肠类器官的构建及其应用研究的最新进展。

关键词：结肠类器官干细胞构建应用

帕金森病患者黑质和红核的3.0TMR氨基质子转移成像初步研究

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中华放射学杂志 2015年第2期49卷 81-84页

作者：王蕊李春媚张晨苏闻周进元陈敏北京医院放射科 100730 北京医院神经内科 100730 美国约翰·霍普金斯大学医学院放射科

目的：探讨MR氨基质子转移（APT）成像技术测量帕金森病（PD）患者黑质和红核异常改变的可行性。方法27例PD患者（PD组）根据Hoehn＆Yahr分期分为早期PD组（14例）和进展期PD组（13例）。23名年龄相匹配的健康志愿者作为对照组。PD患者... 详细信息

目的：探讨MR氨基质子转移（APT）成像技术测量帕金森病（PD）患者黑质和红核异常改变的可行性。方法27例PD患者（PD组）根据Hoehn＆Yahr分期分为早期PD组（14例）和进展期PD组（13例）。23名年龄相匹配的健康志愿者作为对照组。PD患者中以右侧肢体起病者14例、以左侧肢体起病者13例。所有受试者均进行头颅APT成像，测量双侧黑质和红核氨基质子（3.5 ppm处）的不对称磁化转移率（MTRasym）。采用独立样本t检验比较PD组和对照组间红核和黑质的MTRasym（3.5 ppm），采用单因素方差分析比较正常对照者、早期和进展期PD患者间红核和黑质MTRasym（3.5 ppm）的差异。采用配对t检验比较PD患者各脑结构起病侧和对侧MTRasym（3.5 ppm）的差异。结果 PD组和对照组黑质的MTRasym（3.5 ppm）值分别为（0.96±0.35）%和（1.20±0.39）%，差异具有统计学意义（t=－2.093，P=0.039）；而PD组与对照组红核的MTRasym（3.5 ppm）值分别为（0.97±0.36）%和（1.09±0.38）%，差异无统计学意义（t=－1.148，P=0.254）。对照组、早期PD组和进展期PD组患者黑质的MTRasym（3.5 ppm）值分别为（1.20±0.30）%、（1.09±0.32）%、（0.81±0.37）%，红核的MTRasym（3.5 ppm）值分别为（1.09±0.28）%、（1.21±0.35）%和（0.71±0.33）%，3组间差异均具有统计学意义（黑质F=3.954，P=0.022；红核F=7.563，P=0.001）。PD患者起病侧和对侧黑质的MTRasym （3.5 ppm）值分别为（0.93±0.33）%和（0.99±0.30）%，红核的MTRasym（3.5 ppm）分别为（1.01±0.36）%和（0.93±0.29）%，两侧间差异均无统计学意义（t值分别为－0.660、0.545，P值分别为0.515、0.590）。结论APT成像可以显示PD患者和对照组黑质和红核MTRasym（3.5 ppm）的差异，可作为PD临床诊断和病情监测的有效工具。

关键词：帕金森病磁共振成像分子成像

环状RNA hsa_circ_0067582对胃癌细胞增殖及侵袭能力的影响

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中国医学科学院学报 2022年第1期44卷 81-90页

作者：陆蓉丹黄哲陆佳敏张海强邵永富宁波大学医学院附属医院消化内科浙江宁波315020 宁波大学医学院附属医院急诊科浙江宁波315020 宁波大学医学院附属医院胃肠外科浙江宁波315020

目的探讨hsa_circ_0067582在胃癌细胞中的表达水平及其对细胞增殖和侵袭能力的影响,并研究hsa_circ_0067582在胃癌中的作用机制。方法hsa_circ_0067582过表达(Oe-circ_0067582)质粒分别转染人胃癌AGS和SGC-7901细胞,CCK-8检测细胞活力情况,细胞克隆形成实验及EdU实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡及上皮间质转换(EMT)相关蛋白的表达情况,并通过异种移植瘤实验观察Oe-circ_0067582对裸鼠体内SGC-7901细胞生长的影响。生物信息学方法预测hsa_circ_0067582结合的微小RNA(miRNA),并构建竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络;对miRNA靶基因进行功能学分析。结果与pLO-ciR组相比,Oe-circ_0067582组的AGS和SGC-7901的细胞活力(t=7.883,P=0.001;t=5.679,P=0.005)、增殖(t=6.709,P=0.003;t=5.857,P=0.003)及侵袭能力(t=7.782,P=0.002;t=6.342,P=0.003)均明显降低,并诱导细胞凋亡(t=7.225,P=0.002;t=11.509,P=0.001)。Western blot结果显示,Oe-circ_0067582组的AGS和SGC-7901细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3(t=6.863,P=0.002;t=7.024,P=0.001)、Caspase 7(t=3.295,P=0.04;t=6.008,P=0.004)、Caspase 9(t=4.408,P=0.012;t=6.278,P=0.004)和E-钙黏蛋白(t=12.453,P=0.002;t=10.867,P=0.001)蛋白表达水平均明显升高,而波形蛋白(t=7.242,P=0.002;t=5.694,P=0.004)和N-钙黏蛋白(t=6.480,P=0.003;t=7.446,P=0.001)蛋白表达水平明显降低。Oe-circ_0067582抑制SGC-7901荷瘤裸鼠体内肿瘤的生长(t=3.526,P=0.017)。根据TargetScan及miRnada数据库获知hsa_circ_0067582可竞争性地结合hsa-miR-181b-3p、hsa-miR-337-3p、hsa-miR-421和hsa-miR-548d-3p。功能富集结果表明miRNA靶基因涉及癌症相关的多个生物学过程,包括细胞凋亡负调控、基因表达、癌症中的转录失调、转化生长因子-β、p53信号通路等。结论Oe-circ_0067582抑制胃癌AGS和SGC-7901细胞增殖,并可能通过减弱EMT进程降低胃癌细胞侵袭能力,为胃癌的预防及治疗提供了新的靶点。

关键词：环状RNA hsa_circ_0067582 胃癌增殖侵袭 AGS细胞 SGC-7901细胞

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2015年世界胃肠病组织国际会议和欧洲消化疾病周热点

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浙江大学学报（医学版） 2015年第6期44卷 703-706页

作者：陈飞薛猛王良静浙江大学医学院附属第二医院消化内科浙江大学胃肠病研究所

世界胃肠病学组织（World Gastroenterology Organization，WGO）国际会议和欧洲消化疾病周（United European Gastroenterology Week，UEGW）分别于2015年9月29日-10月2日在澳大利亚布里斯班和2015年10月24-28日在西班牙巴塞罗那举行。

关键词：内镜微创性 3D打印会议

TRPV5 TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

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中国肿瘤临床 2017年第12期44卷 577-582页

作者：张慧刘模荣董辉徐靖宇谢睿文国荣刘莲花遵义医学院附属医院消化内科贵州省遵义市563003 美国加利福尼亚大学医学院胃肠科

目的:观察TRPV5和TRPV6蛋白表达水平对结肠癌SW480细胞内Ca^(2+)水平及细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。方法:给予TRPV5、TRPV6通道激动剂1-25(OH)_2D_3及抑制剂CuCl_2作用结肠癌SW480细胞后,采用免疫组织化学法、Western blo... 详细信息

目的:观察TRPV5和TRPV6蛋白表达水平对结肠癌SW480细胞内Ca^(2+)水平及细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。方法:给予TRPV5、TRPV6通道激动剂1-25(OH)_2D_3及抑制剂CuCl_2作用结肠癌SW480细胞后,采用免疫组织化学法、Western blot及实时荧光定量PCR技术检测TRPV5、TRPV6蛋白及TRPV5、TRPV6 mRNA表达的变化。使用高速离子成像系统观察结肠癌SW480细胞内Ca^(2+)水平的变化;通过MTT法、TUNEL法及划痕修复法观察结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及迁移的变化。结果:1-25(OH)_2D_3明显上调结肠癌SW480细胞TRPV5、TRPV6 mRNA及蛋白表达水平,使结肠癌SW480细胞内Ca^(2+)水平增加,促进结肠癌SW480细胞增殖、迁移及抑制其凋亡(P<0.05)。CuCl_2明显下调结肠癌SW480细胞中TRPV5、TRPV6蛋白及m RNA表达,使结肠癌SW480细胞内Ca^(2+)水平降低(P<0.05),抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移及促进细胞的凋亡(P<0.05)。结论:结肠癌SW480细胞中TRPV5和TRPV6蛋白表达水平的变化,能通过调控细胞内Ca^(2+)水平影响细胞的增殖、迁移和凋亡等生物学行为。

关键词：结肠癌钙离子通道 TRPV5 TRPV6 Ca^2+

TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为及小鼠模型中结肠肿瘤发生的影响

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中国肿瘤临床 2018年第21期45卷 1079-1085页

作者：谢臣武刘模荣董辉徐靖宇谢睿文国荣刘莲花遵义医学院附属医院消化内科贵州省遵义市563003 美国加利福尼亚大学医学院胃肠科

目的:通过观察沉默瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(transient receptor potential cation channel,subfamily V member 6,TRPV6)对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响和细胞内钙的浓度变化,以及1,25(OH)_2D_3、CaCl_2及CuCl_2在SD大鼠结肠肿瘤模型建立中的影响,探索TRPV6在结肠癌发生过程中的相关作用,为结肠癌的防治寻找新的靶点。方法:通过构建慢病毒颗粒感染结肠癌SW480细胞,采用免疫组织化学法、Western bolt、PCR技术检测TRPV6蛋白及m RNA的表达,MTT法、迁移及凋亡实验观察结肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡变化,高速离子成像系统测定结肠癌SW480细胞内的Ca^(2+)浓度变化。以二甲基肼(dimethyl hydrazine,DMH)建立SD大鼠结肠肿瘤模型,分为实验组(DMH组)和干预组[(DMH+1,25(OH)_2D_3组、DMH+CuCl_2组)]、对照组,干预组分别予1,25(OH)_2D_3(37.5 nmol/kg)、CuCl2(375μmol/kg)对模型进行干预。观察各组大鼠结肠腺瘤及腺癌的发生情况,Western blot检测各组结肠组织中TRPV6蛋白的表达情况。结果:TRPV6-RNAi转染结肠癌SW480细胞后,TRPV6 m RNA及蛋白表达减少,细胞Ca^(2+)浓度水平降低,结肠癌SW480细胞的增殖率、迁移能力下降,细胞凋亡率增加,与空白对照组及阴性对照组比较差异具有统计学意义(PDMH组>DMH+CuCl_2组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:降低结肠癌SW480细胞Ca^(2+)浓度水平可抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移能力,诱导细胞凋亡。1,25(OH)_2D_3可以增加实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达,促进结肠肿瘤的形成。CuCl_2可以使实验鼠结肠组织中的TRPV6蛋白表达降低,并抑制结肠肿瘤的形成。

关键词： TRPV6 基因沉默钙离子通道结肠癌二甲基肼

脑卒中病理变化的机制:PSD93在血小板活化因子性神经元损害中的作用

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中国临床康复 2005年第1期9卷 104-105,i002页

作者：黄嵘徐运王岚朱琳王羽中管得宁王中原陶元祥南京大学医学院附属鼓楼医院神经内科江苏省南京市210008 美国约翰霍普金斯大学

目的:探讨PSD93基因是否参与血小板活化因子所致的神经元毒性损伤,以研究血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)神经性损伤的分子学机制。方法:实验于2003-05/2004-05在南京鼓楼医院神经科研究室和美国约翰霍普金斯大学***实验... 详细信息

目的:探讨PSD93基因是否参与血小板活化因子所致的神经元毒性损伤,以研究血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)神经性损伤的分子学机制。方法:实验于2003-05/2004-05在南京鼓楼医院神经科研究室和美国约翰霍普金斯大学***实验室进行。用原代神经元细胞培养系统,PAF处理wildtype(野生型)和PSD93Knockout(基因敲除)小鼠皮质神经元;propidiumiodide/calceinAM染色进行细胞凋亡测定。荧光显微镜下数码相机拍照。结果:0.10,0.30和0.60μmol/LPAF对野生型和PSD93基因敲除型两种皮质神经元细胞具有明显的神经元毒性P<0.05)。基因敲除型(型的小鼠皮质神经元细胞凋亡明显低于野生型(P<0.01)。结论:PSD93基因敲除型可抑制PAF所致的神经元损害。

关键词：血小板活化因子神经元细胞凋亡

西罗莫司治疗儿童蓝色橡皮疱痣综合征2例并文献复习

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中国当代儿科杂志 2020年第9期22卷 1011-1016页

作者：全旭许春娣刘萍张清清陈烨王乐肖园上海交通大学医学院附属瑞金医院北院儿内科上海201821 上海交通大学医学院附属瑞金医院儿内科上海200025

为探讨口服西罗莫司治疗儿童胃肠道蓝色橡皮疱痣综合征(BRBNS)的疗效,该文回顾性分析了2例BRBNS患儿的临床资料和使用西罗莫司治疗的随访结果。2例伴有消化道出血和贫血的BRBNS患儿,给予口服西罗莫司(初始剂量为1 mg/d)作为治疗方案的... 详细信息

为探讨口服西罗莫司治疗儿童胃肠道蓝色橡皮疱痣综合征(BRBNS)的疗效,该文回顾性分析了2例BRBNS患儿的临床资料和使用西罗莫司治疗的随访结果。2例伴有消化道出血和贫血的BRBNS患儿,给予口服西罗莫司(初始剂量为1 mg/d)作为治疗方案的一部分,维持血药浓度在2.5~12.0 ng/mL之间,患儿消化道出血消失,贫血和凝血功能改善,治疗期间可停止输血且无明显药物不良反应。在PubMed、万方数据库、中国知网搜索西罗莫司治疗BRBNS的相关文献进行总结。检索文献结果显示,年龄为0~18岁的BRBNS儿童病例共检索出26例,加上该研究中报道的2例,共28例使用西罗莫司治疗均取得满意疗效。西罗莫司在儿童BRBNS患者的治疗中可能是有效和安全的,有待进一步的前瞻性研究来评估这种药物的长期疗效。

关键词：蓝色橡皮疱痣综合征西罗莫司雷帕霉素消化道出血儿童

羟嘌呤醇对衰竭心肌蛋白氧化和心肌收缩力的长期效果

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上海交通大学学报（医学版） 2010年第2期30卷 174-179页

作者：谭震张治戴秋艳张建军高卫东上海交通大学第一人民医院心内科上海200080 约翰霍普金斯大学医学院麻醉和重症监护科

目的研究黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂——羟嘌呤醇(Oxy)增强缺血后心力衰竭心肌收缩力的长期效果,并初步探讨其作用机制。方法将120只SV120小鼠随机分为心肌梗死(MI)对照组、假手术组和Oxy治疗组。通过结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立小鼠缺... 详细信息

目的研究黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂——羟嘌呤醇(Oxy)增强缺血后心力衰竭心肌收缩力的长期效果,并初步探讨其作用机制。方法将120只SV120小鼠随机分为心肌梗死(MI)对照组、假手术组和Oxy治疗组。通过结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立小鼠缺血后心力衰竭模型。Oxy治疗组口服1 mmoL/L Oxy。9～11个月后,对三组小鼠进行心脏超声检查;取右心室束状肌分析其心肌兴奋-收缩耦联的变化。应用激光光栅衍射测定肌节长度;应用离子渗透微注射法向样本心肌细胞内注入Fura-2荧光染料,测量心肌细胞质内游离Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i);通过应用ryanodine和增加刺激频率的方法使心肌达到强直收缩,即心肌纤维与Ca^(2+)的相互作用处于稳定状态,分析在稳定状态下心肌收缩力-细胞内钙关系;应用Western blotting测定肌丝蛋白的氧化情况。结果长期口服Oxy能明显改善心力衰竭小鼠的心脏收缩功能,减小室壁厚度;明显改善心肌细胞的兴奋-收缩耦联过程,有效地增强心肌收缩力,显著提高稳态时心肌细胞钙激活的最大收缩力(F_(max))。Western blotting检测显示,与MI对照组心肌肌丝蛋白相比,Oxy治疗组中的肌动蛋白氧化修饰受到明显抑制。结论长期服用Oxy能够有效改善衰竭心肌的工作状态,改善/促进兴奋-收缩耦联过程,增强心肌收缩力。这种长期作用的机制是抑制心肌肌丝中肌动蛋白的氧化修饰,从而增强肌丝对钙的敏感性,增加收缩力。Oxy由于对[Ca^(2+)]_i的增加较小,能够减轻细胞内Ca^(2+)负担及其所带来的负作用,具有更好的临床应用前景。

关键词：羟嘌呤醇心力衰竭心肌收缩力氧化修饰稳态力钙关系