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Mettl3通过PI3K/AKT信号通路调控Ang Ⅱ诱导肾脏纤维化的机制研究

中华心血管病杂志 2024年第7期52卷 814-826页

作者：邓熠王艳何平平李娇刘围围袁近松赵鸿彦刘志江沈长银石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科遵义563000

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang ... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化,为Ang Ⅱ组;正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹(Western blot)及实时反转录PCR(RT-qPCR)检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷(m6A)修饰水平及相关酶[Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)、肥胖相关蛋白(FTO)、ALKB同源蛋白5(ALKBH5)、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3]的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达,为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组;以转染慢病毒空载体作为阴性对照,为Ang Ⅱ+sh-NC组,观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响,并检测下游磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达,包括PI3K、AKT(丝氨酸磷酸化位点473)[p-AKT(S473)]、AKT(苏氨酸磷酸化位点308)[p-AKT(T308)]等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录,通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79,观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。(2)动物实验中,分为假手术组(仅给予0.9%无菌生理盐水)、Ang Ⅱ组(泵入Ang Ⅱ溶液)、sh-Mettl3组(注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组(泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组(Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79),每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压,术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织,采用苏木精-伊红(HE)及Masson三色法对组织切片进行染色,检测肾脏纤维化程度。结果:(1)磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞,以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示,Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组( P<0.05),RT-qPCR及Western blot结果显示,与对照组相比,Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组,α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a(FAPa)以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组( P均<0.05)。与对照组相比,Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调,且p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白高表达;Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组,p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达下调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组(2.34 h比3.42 h)。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。(2)动物实验结果显示,与假手术组比较,Ang Ⅱ组小鼠的血压更高,血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高,纤维化面积更大( P均<0.05);而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组( P<0.05),但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化,Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性,进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

关键词：血管紧张素Ⅱ 周细胞肌成纤维细胞转分化 N6-甲基腺苷甲基转移酶3

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线粒体代谢在糖尿病心肌病中的研究进展

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中国糖尿病杂志 2024年第4期32卷 310-313页

作者：蔡蕊商婷婷周琳王翠平袁伟江苏大学附属医院心血管内科镇江212001

糖尿病心肌病(DCM)是DM心血管并发症,是一种特异性心肌病变,发病机制复杂。心肌线粒体结构和功能障碍是DCM发生发展的核心,线粒体有望成为DCM治疗的新靶点。本文综述线粒体代谢在DCM中的研究进展。

关键词：糖尿病心肌病线粒体能量代谢

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含溴结构域蛋白4在心血管疾病发病机制中的研究进展

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中国病理生理杂志 2024年第6期40卷 1141-1146页

作者：何磊董泉彬李菊香南昌大学第二附属医院心血管内科江西南昌330006

心血管疾病(cardiovascular diseases)一直以来都是我国乃至全球疾病负担的主要原因,其生存率低,发病率一直呈现上升趋势[1]。据推测,我国目前心血管疾病患者高达3亿,导致的死亡人数约占全国死亡人数的40%,有数据显示,我国每年因心血管... 详细信息

心血管疾病(cardiovascular diseases)一直以来都是我国乃至全球疾病负担的主要原因,其生存率低,发病率一直呈现上升趋势[1]。据推测,我国目前心血管疾病患者高达3亿,导致的死亡人数约占全国死亡人数的40%,有数据显示,我国每年因心血管疾病产生的费用高达1700亿元,给医疗卫生保健资源带来了极大的负担[2-3]。心血管疾病涉及冠心病、心律失常、高血压、心肌病和心力衰竭等,虽然临床表现存在差异,但在发病机制中仍有许多相似之处。溴结构域和额外终端域(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族蛋白是一种表观遗传调控蛋白,由含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)、BRD3、BRD4和睾丸特异性含溴结构域蛋白(testis-specific bromodomain-containing protein,BRDT)组成[4]。

关键词：心血管疾病含溴结构域蛋白4 BRD4抑制剂发病机制

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冠心病患者心脏康复最新研究进展

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临床医学进展 2024年第2期14卷 2285-2292页

作者：吝志志高峰延安大学附属医院心血管内科陕西延安

在我国,冠状动脉粥样硬化性心脏病患病率及发病率呈逐年升高趋势,乃引起心源性猝死的主要病因,运动康复在冠心病患者二期治疗阶段占据极其重要的地位。

关键词：冠心病心脏康复

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五行音乐联合子午流注择时穴位按摩对老年慢性心力衰竭患者负性情绪及睡眠质量的影响

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中国基层医药 2024年第4期31卷 510-515页

作者：申祥凤徐曌吴琪姬国华杭州师范大学附属医院心血管内科杭州310015

目的探讨五行音乐联合子午流注择时穴位按摩对老年慢性心力衰竭(CHF)患者负性情绪及睡眠质量的影响。方法选取2022年1月至2023年6月在杭州师范大学附属医院治疗的老年CHF患者112例,采用随机对照临床研究方法,依据随机数字表法分为两组,... 详细信息

目的探讨五行音乐联合子午流注择时穴位按摩对老年慢性心力衰竭(CHF)患者负性情绪及睡眠质量的影响。方法选取2022年1月至2023年6月在杭州师范大学附属医院治疗的老年CHF患者112例,采用随机对照临床研究方法,依据随机数字表法分为两组,对照组56例和研究组56例;在心力衰竭常规护理的基础上,对照组给予五行音乐干预,研究组给予五行音乐联合子午流注择时穴位按摩干预。比较两组干预前后的汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分、明尼苏达慢性心衰生活质量量表(MLHFQ)各维度评分以及睡眠疗效和患者护理满意度。结果干预后,两组HAMA、HAMD评分[研究组:(11.29±2.48)分、(12.48±3.36)分,对照组:(15.93±3.35)分、(16.50±4.32)分]较干预前[研究组:(20.13±5.18)分、(23.95±8.97)分,对照组:(19.36±5.45)分、(23.79±7.61)分]均降低(t=15.35、10.24,5.65、8.93,均P<0.001),且研究组均明显低于对照组(t=-8.34、-5.49,均P<0.001)。干预后,两组的PSQI评分[研究组:(7.05±0.96)分,对照组:(9.91±1.28)分]较干预前[研究组:(12.98±2.21)分,对照组:(12.50±2.48)分]均降低(t=24.68、9.79,均P<0.05),且研究组明显低于对照组(t=-13.34,P<0.05)。从MLHFQ各维度评分比较结果看,干预后,两组情绪领域、身体领域、其他领域评分[研究组(9.36±2.29)分、(16.95±3.80)分、(18.50±2.33)分,对照组:(12.93±2.00)分、(19.98±3.98)分、(20.04±2.24)分]较干预前[研究组:(15.57±1.55)分、(26.23±4.63)分、(21.18±2.50)分,对照组:(16.09±1.87)分、(25.32±4.40)分、(21.57±2.69)分]均降低(t=21.66、18.55、8.44,11.29、11.73、4.61,均P<0.001),且研究组明显低于对照组(t=-8.79、-4.13、-3.56,均P<0.05)。研究组患者护理满意度优于对照组[98.21%(55/56)比87.50%(49/56),χ^(2)=-3.09,P<0.05]。研究组的睡眠疗效总有效率为92.86%(52/56),高于对照组的78.57%(44/56)(χ^(2)=-2.09,P<0.05)。结论五行音乐联合子午流注择时穴位按摩用于老年CHF患者可有效缓解负性情绪,提高其生活质量、睡眠质量,并提高患者护理满意度。

关键词：心力衰竭音乐疗法按摩穴位按压情绪睡眠病人满意度老年人

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miR-133a-3p修饰的间充质干细胞外泌体促进心肌梗死后大鼠心肌修复

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中华心血管病杂志 2024年第1期52卷 72-78页

作者：孙铃朱文武张健赵鹏程朱叶倩张凤祥南京医科大学第一附属医院、江苏省人民医院心血管内科南京210029 徐州市中心医院心血管内科徐州221000

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为... 详细信息

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为miR-133a-3p-Exo及miR-NC-Exo。采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠AMI模型,分别于梗死区边缘原位注射miR-133a-3p-Exo或miR-NC-Exo进行干预。干预后28 d,采用超声心动图检测大鼠心功能;采用Masson染色检测大鼠梗死后心肌纤维化面积;采用TUNEL染色评估梗死后大鼠心肌凋亡情况;采用免疫荧光染色评估梗死后大鼠血管新生情况。结果与miR-NC-Exo组相比,miR-133a-3p-Exo组在AMI后28 d左心室射血分数较高[(64.2%±8.9%)比(47.4%±9.8%),P血管的数量均较多[CD31:(13.9±2.0)条比(2.9±0.9)条,α-SMA:(11.0±1.6)条比(3.5±0.9)条,P均血管新生,从而改善AMI后大鼠的心功能。

关键词：微RNAs 间充质干细胞外泌体急性心肌梗死心肌修复

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慢性右心室起搏患者升级为左束支区域起搏后生活质量分析

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中国实用内科杂志 2024年第5期44卷 403-408,414页

作者：韦玲玲叶炀盛夏傅国胜蒋晨阳浙江大学附属邵逸夫医院心血管内科浙江杭州310016 浙江金华东阳中医院心血管内科

目的观察慢性长期右心室起搏患者升级为左束支区域起搏(LBBAP)后生活质量分析。方法选择2020年6月至2022年6月浙江大学附属邵逸夫医院住院患者,入选患者为长期右心室起搏(起搏比例≥40%)因电池耗竭或心衰住院欲升级为左束支区域起搏,并... 详细信息

目的观察慢性长期右心室起搏患者升级为左束支区域起搏(LBBAP)后生活质量分析。方法选择2020年6月至2022年6月浙江大学附属邵逸夫医院住院患者,入选患者为长期右心室起搏(起搏比例≥40%)因电池耗竭或心衰住院欲升级为左束支区域起搏,并在术后3个月、12个月进行随访观察,比较起搏器升级前,术后3个月、12个月生活质量变化及心脏功能参数,生活质量变化采用以下3个问卷分析:健康SF-36量表,三水平五维度健康量表(EQ-5D-3L)及明尼苏达心功能不全问卷(MLHFQ)。结果25例患者符合标准入组,最终23个成功升级为LBBAP,并全部在术后12个月内完成了随访,在SF-36量表中,经过多时间段统计分析,23例患者分别在生理功能(P<0.001)、生理职能(P<0.001)、一般健康状态(P<0.001)、精力(P=0.005)、社会功能(P=0.006)、精神健康(P=0.002)6大领域得到了很大的改善,EQ-5D-3L总分(P=0.004)及MLHFQ评分(P<0.001)也比升级前有明显的提高,且治疗后12个月比治疗后3个月改善更明显,患者治疗前后脑利钠肽前体(ProBNP,P=0.004)、左室射血分数(LVEF,P<0.001)、左室收缩期容积(LVESV,P=0.001)比较也有显著改善。把23例患者进行分组,分析发现起搏介导心肌病(PICM)组患者(11/23),比非PICM组(12/23),生活质量改善更明显。结论长期右心室起搏患者升级为左束支区域起搏后可以提高患者生活质量,逆转心室重构,改善心脏功能,且PICM患者获益更显著。

关键词：左束支区域起搏生活质量右心室起搏起搏介导心肌病

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mRNA的N-甲基腺苷(mA)修饰异常在冠心病中作用的研究进展

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中华高血压杂志(中英文) 2024年

作者：张艳韦波李伟周海燕贵州医科大学附属医院心血管内科

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰是真核生物mRNA最普遍的内部修饰,占RNA甲基化修饰的80%,m6A修饰存在于病毒、酵母、植物和动物的核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)、核小RNA(small nuclear RNA,snRNA)和mRNA中,尤其在高等真核生物中特别普遍[1-4]。研究发现,m6A的形成受甲基转移酶(“书写器”,writers)、去甲基化酶(“擦除器”,erasers)和m6A识别蛋白(“阅读器”,readers)调节,且mRNA甲基化的程度和模式可以影响mRNA的剪接、运输、储存、翻译和衰变,可以通过调控RNA的结构和相互作用,进而影响RNA的翻译效率和速率[5],这意味着其可以参与炎症、血管内皮损伤、氧化应激和动脉粥样硬化斑块形成等病理生理过程,进一步影响疾病的发生发展。

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凝血因子Ⅺ抑制剂在心房颤动中应用的研究进展

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中华心血管病杂志 2024年第8期52卷 944-948页

作者：李栋常鹏张宏亮白锋吴强兰州大学第二医院心血管内科兰州730000

生理性止血和病理性血栓间关系紧密, 任何减少血栓形成的策略都会对止血产生不可避免的影响。因此, 出血成为抗凝治疗难以规避的风险。但越来越多证据表明, 凝血因子Ⅺ的功能在血栓形成中更重要, 而在止血中发挥的作用相对较小。近期临... 详细信息

生理性止血和病理性血栓间关系紧密, 任何减少血栓形成的策略都会对止血产生不可避免的影响。因此, 出血成为抗凝治疗难以规避的风险。但越来越多证据表明, 凝血因子Ⅺ的功能在血栓形成中更重要, 而在止血中发挥的作用相对较小。近期临床研究证实, 凝血因子Ⅺ抑制剂可有效预防心房颤动患者血栓形成, 同时未增加高出血风险患者的出血事件, 进一步支持了该观点。以凝血因子Ⅺ为靶点的抗凝药物有望为安全预防心房颤动血栓事件提供新的治疗理念与方式。该文对凝血因子Ⅺ抑制剂将止血与血栓分离的机制、相关的临床研究证据及现有研究进展作一综述。

关键词：心房颤动凝血因子Ⅺ 抗凝止血血栓

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慢性心力衰竭患者三酰甘油葡萄糖指数与心房颤动发生的相关性研究

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中国全科医学 2024年

作者：白璐张强刘方方孙彩红费思杰信彩凤郑州大学第二附属医院心血管内科

背景胰岛素抵抗（IR）与心房颤动（AF）及心房重构有关，三酰甘油葡萄糖（TyG）指数作为IR新型简单且有价值的指标与慢性心力衰竭（CHF）患者发生AF相关性的研究甚少。目的探讨CHF患者TyG指数与AF发生风险的相关性。方法回顾性选取202... 详细信息

背景胰岛素抵抗（IR）与心房颤动（AF）及心房重构有关，三酰甘油葡萄糖（TyG）指数作为IR新型简单且有价值的指标与慢性心力衰竭（CHF）患者发生AF相关性的研究甚少。目的探讨CHF患者TyG指数与AF发生风险的相关性。方法回顾性选取2021年1月—2022年1月在郑州大学第二附属医院心血管内科住院的CHF患者417例为研究对象，根据CHF患者是否发生AF将其分为两组：AF组（138例）和非AF组（279例）。依据四分位数将TyG指数分为4个水平：Q1(TyG指数≤8.20)、Q2(8.208.84)。通过医院电子病历系统收集患者基线资料，包括TyG指数及基本资料、实验室检查指标、超声心动图资料等。利用LASSO回归算法进行变量筛选，采用多因素Logistic回归分析CHF患者TyG指数与AF发生风险的相关性，并构建回归模型。同时采用受试者工作特征曲线分析TyG指数对CHF患者发生AF的预测价值。绘制TyG指数与CHF患者AF发生风险相关性的限制性立方样条图。结果 AF组患者BMI，美国纽约心脏病学会心功能分级Ⅲ～Ⅳ级、高血压比例，血尿酸（SUA）、三酰甘油、血尿素氮（BUN）、空腹血糖、N末端B型钠尿肽前体、TyG指数、左心房内径（LAD）,β受体阻滞剂、钙拮抗剂、利尿剂使用比例高于非AF组，而总胆固醇（TC）、内生肌酐清除率（Ccr）、左心室射血分数，血管紧张素转化酶抑制剂/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ACEI/ARB）类药物使用比例低于非AF组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，合并高血压（OR=1.749,95%CI=1.048～2.918,P=0.032）、BUN升高（OR=1.269,95%CI=1.104～1.457,P=0.001）、SUA升高（OR=1.002,95%CI=1.000～1.005,P=0.047）、TyG指数升高（OR=2.360,95%CI=1.397～3.987,P=0.001）、LAD升高（OR=1.065,95%CI=1.034～1.097,P<0.001）、使用利尿剂（OR=4.019,95%CI=2.140～7.548,P<0.001）是CHF患者发生AF的危险因素；Ccr升高（OR=0.985,95%CI=0.975～0.996,P=0.006）、TC升高（OR=0.587,95%CI=0.445～0.775,P<0.001）、使用ACEI/ARB类药物（OR=0.427,95%CI=0.253～0.718,P=0.001）是CHF患者发生AF的保护因素。充分调整混杂因素后，与Q1水平相比，TyG指数Q2、Q3、Q4水平CHF患者AF发生风险分别是Q1水平的1.902倍、2.060倍和2.841倍（P<0.05）。限制性立方样条分析显示，TyG指数与AF发生风险呈线性正相关（P非线性=0.494）。TyG指数及LASSO-Logistic回归模型预测CHF患者发生AF的曲线下面积分别为0.661(95%CI=0.608～0.724,P<0.001)、0.843(95%CI=0.803～0.882,P<0.001)。此外，TyG指数与AF的相关性在不同亚组中一致。结论在CHF患者中，TyG指数与AF发生独立相关，且在识别该类患者AF的发生中具有一定的临床价值。

关键词：心力衰竭心房颤动慢性心力衰竭三酰甘油葡萄糖指数胰岛素抵抗 LASSO回归

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