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一测多评法同时测定华山参中5个成分的含量

药物分析杂志 2024年第9期44卷 1604-1612页

作者：张玉茹张红孟雪张瑜王娣陈娟陕西省中医药研究院西安710003

目的:建立一测多评(QAMS)法同时测定华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯等成分的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-... 详细信息

目的:建立一测多评(QAMS)法同时测定华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯等成分的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为210 nm和344 nm,柱温30℃,进样量10μL。以山莨菪碱为内参物,计算东莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的相对校正因子,测定其含量,并与外标法(ESM)测定结果进行比较。结果:5个成分在各自范围内线性关系良好(r=1.000),东莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的相对校正因子分别为0.9518、0.5626、0.8304、0.4339,重复性较好。QAMS法计算所得10个产地华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的含量与ESM实测值无显著性差异。结论:该方法准确稳定,重复性好,可用于华山参的质量控制。

关键词：华山参生物碱一测多评法(QAMS) 含量测定相对校正因子(RCF)

太白茶HPLC指纹图谱的建立及UHPLC-QExactive Focus MS/MS联用分析

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药物分析杂志 2024年第4期44卷 585-593页

作者：李莎莎李雅娟王晓婷毛阿娟李凡李芳张红王卫锋陕西省中医药研究院西安710003 陕西中医药大学咸阳712046

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱... 详细信息

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长254 nm,进样量10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012年版”,建立指纹图谱并进行相似度评价。化学成分分析选用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术,采用Waters Acquity UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1200。结果:建立的太白茶特征指纹图谱中,标定共有峰8个,10批太白茶药材相似度均≥0.9,各批次之间共有峰的相对保留时间RSD均<0.5%。对8个共有峰中的4个峰进行了结构指认,依次为鳞片衣酸、羊角衣酸、thamnoliadepsides B、坝巴酸。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法稳定可靠,专属性好,结合UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS的定性分析,可用于太白茶药材的整体质量综合评价。

关键词：太白茶高效液相色谱指纹图谱质量评价超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱定性分析

基于ORAI1/NFAT信号轴探讨镇心安神方对1-氯-2,4-二硝基苯诱导特应性皮炎小鼠的作用及机制

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中药新药与临床药理 2024年第2期35卷 168-173页

作者：陈若曦姜姗姗杨洁杨晓宇徐蕊瑶方琳赵一丁陕西中医药大学陕西咸阳712046 陕西省中医药研究院陕西西安710003 陕西省中医医院陕西西安710003

目的基于钙通道调节分子1(ORAI1)/T细胞核因子(NFAT)信号轴探讨镇心安神方(龙骨、牡蛎、淡竹叶、骨碎补、茯苓)对特应性皮炎(AD)小鼠的作用及机制。方法将36只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、西替利嗪组(1.3 mg·kg^(-1))及镇... 详细信息

目的基于钙通道调节分子1(ORAI1)/T细胞核因子(NFAT)信号轴探讨镇心安神方(龙骨、牡蛎、淡竹叶、骨碎补、茯苓)对特应性皮炎(AD)小鼠的作用及机制。方法将36只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、西替利嗪组(1.3 mg·kg^(-1))及镇心安神方组(36.36 g·kg^(-1)),每组9只。采用1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)诱导建立AD小鼠模型。灌胃给药,每日1次,连续给药2周。给药结束后,测定皮损面积,并对皮损严重程度进行评分;测定脾脏质量,计算脾脏指数;采用HE染色法观察皮损组织病理变化;ELISA法检测血清中白细胞介素4(IL-4)、IL-13及胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的含量;Western Blot法检测皮损组织中ORAI1、钙调磷酸酶A(CaN)、T细胞核因子2(NFAT2)蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组小鼠的皮损评分显著升高(P<0.01),皮损面积显著扩大(P<0.01);表皮层及真皮层厚度显著增加(P<0.01),表皮过度角化,棘层肥厚,真皮层可见嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润;脾脏指数及血清IL-4、IL-13、TSLP水平显著升高(P<0.01);皮损组织中CaN、NFAT2、ORAI1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,镇心安神方组小鼠的皮损评分显著降低(P<0.01),皮损面积显著缩小(P<0.01);表皮层及真皮层厚度显著降低(P<0.01),表皮过度角化减轻,棘层轻度肥厚,真皮层有少量炎性细胞浸润;脾脏指数及血清IL-4、IL-13、TSLP水平显著降低(P<0.01);皮损组织中CaN、NFAT2、ORAI1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论镇心安神方能够改善DNCB诱导AD小鼠的皮肤病理损伤,可能与其抑制ORAI1、CaN及NFAT2蛋白表达,降低血清TSLP、IL-4、IL-13等2型炎症因子水平,通过免疫调节改善皮肤炎症及瘙痒有关。

关键词：镇心安神方特应性皮炎 ORAI1/NFAT信号轴免疫调节小鼠

HPLC法同时测定补肾活血散结胶囊中12种成分的含量

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中成药 2024年第1期46卷 1-6页

作者：尹继瑶胡静沈霞崔小敏任慧曲彤李宁鲁文静陈志永屈凯陕西中医药大学陕西咸阳712083 陕西省中医药研究院陕西西安710003 陕西省中医医院陕西西安710003

目的建立HPLC法同时测定补肾活血散结胶囊中没食子酸、原儿茶酸、莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、丹酚酸B、丹酚酸A、朝藿定C、淫羊藿苷的含量。方法分析采用Agilent 5 TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定补肾活血散结胶囊中没食子酸、原儿茶酸、莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、芍药苷、金丝桃苷、紫云英苷、丹酚酸B、丹酚酸A、朝藿定C、淫羊藿苷的含量。方法分析采用Agilent 5 TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长240 nm。结果12种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均加样回收率97.11%~101.14%,RSD 0.60%~2.65%。结论该方法简便准确,重复性好,可用于补肾活血散结胶囊的质量控制。

关键词：补肾活血散结胶囊化学成分含量测定 HPLC

参仙升脉口服液HPLC指纹图谱研究及多指标成分定量分析

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药物评价研究 2024年第2期47卷 353-359页

作者：宗时宇张红李晔孙婷婷陈衍斌刘峰刘洋陕西省中医药研究院陕西西安710003 陕西步长制药有限公司陕西西安710075

目的建立参仙升脉口服液的特征指纹图谱及多指标成分定量测定方法。方法采用Ultimate LP-C_(18)(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为270nm(0~16min,24~38min)、210 nm(16~24 min,38~100mi... 详细信息

目的建立参仙升脉口服液的特征指纹图谱及多指标成分定量测定方法。方法采用Ultimate LP-C_(18)(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为270nm(0~16min,24~38min)、210 nm(16~24 min,38~100min),体积流量为1.0mL·min^(-1),柱温为30°C,进样量为10μL。应用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)对10批参仙升脉口服液进行分析,建立HPLC指纹图谱,并测定10个指标成分的含量。结果建立的指纹图谱确定共有峰28个,指认了其中12个,10批样品间相似度均在0.934以上。定量分析的10个成分分别为丹参素、盐酸伪麻黄碱、补骨脂苷、异补骨脂苷、迷迭香酸、丹酚酸B、补骨脂素、异补骨脂素、朝藿定C和淫羊藿苷,质量浓度分别为1.218~2.781、 0.333~0.702、 2.391~4.120、 2.083~3.486、 0.151~0.203、 0.158~1.046、 0.189~0.286、0.196~0.305、0.231~0.403和0.323~0.512 mg·mL^(-1)。结论所建立的指纹图谱与多指标成分定量方法准确可靠,可用于参仙升脉口服液较全面的质量控制。

关键词：参仙升脉口服液高效液相色谱法指纹图谱含量测定质量控制丹参素盐酸伪麻黄碱补骨脂苷异补骨脂苷迷迭香酸丹酚酸B 补骨脂素异补骨脂素朝藿定C 淫羊藿苷

白刺花叶总生物碱通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

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实用医学杂志 2024年第20期40卷 2835-2840页

作者：姜盛楠支文冰陈静孙婷婷许宗仁刘帅张红李晔刘洋陕西省中医药研究院(陕西省中医医院) 陕西西安710003 陕西中医药大学陕西咸阳712046

目的探讨白刺花叶总生物碱(Sophora davidii Hance leaves total alkaloids,SDLTAs)的体外抗炎作用及可能的分子机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型,给予不同浓度(50、100、200μg/mL)SDLTAs,Griess法检测SDLTAs对细胞NO表达的影响;ELISA法检测SDLTAs对细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达的影响;RT-qPCR法检测细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBαmRNA的表达;Western blotting法检测细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果SDLTAs显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应。SDLTAs极显著降低细胞中NO、IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌(P<0.01),极显著下调细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBαmRNA的表达(P<0.01),极显著降低细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达(P<0.01)。结论SDLTAs可通过调节MAPK/NF-κB信号通路发挥抗炎作用。

关键词：白刺花叶总生物碱抗炎作用机制

头痛宁胶囊对偏头痛大鼠模型和脂多糖诱导神经小胶质细胞的影响及作用机制

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世界中医药 2024年第11期19卷 1632-1637页

作者：支文冰刘洋宗时宇王春柳孙婷婷李晔刘峰张红陕西省中医药研究院/陕西省中医医院西安710003 陕西步长制药有限公司西安710075

目的:探讨头痛宁胶囊(TTN)对偏头痛大鼠模型和脂多糖(LPS)诱导神经小胶质细胞的影响及作用机制。方法:将21只无特定病原体(SPF)级斯泼累格·多雷(SD)雄性大鼠按照随机数字表法分为3组,分别为空白组、模型组、头痛宁给药组(TTN给药组)。... 详细信息

目的:探讨头痛宁胶囊(TTN)对偏头痛大鼠模型和脂多糖(LPS)诱导神经小胶质细胞的影响及作用机制。方法:将21只无特定病原体(SPF)级斯泼累格·多雷(SD)雄性大鼠按照随机数字表法分为3组,分别为空白组、模型组、头痛宁给药组(TTN给药组)。TTN给药组大鼠给予TTN 640 mg/kg灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d,预给药7 d。末次给药后30 min, TTN给药组和模型组大鼠给予皮下注射硝酸甘油注射液10 mg/kg造模,空白组给予皮下注射等体积生理盐水。用酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清5-HT的水平、脑组织中DA。脂多糖(LPS)诱导神经小胶质细胞(BV2)模拟中枢敏化,将细胞分为空白组、脂多糖组和头痛宁高、低剂量给药组,噻唑蓝实验检测TTN和LPS对BV2细胞活力的影响;硝酸还原酶法检测细胞上清中一氧化氮(NO);酶联免疫吸附试验法检测细胞上清中脑源性生长因子(BDNF)、5-HT、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测BV2细胞中Toll样受体4(TLR4)和磷酸化p65(p-p65 NF-κB)蛋白表达。结果:模型组大鼠血清5-HT、脑组织中DA水平低(P<0.05),TTN给药组血清5-HT、脑组织中DA水平高(P<0.05)。TTN(1.25~20μg/mL)及LPS(1、2、4和8μg/mL)对BV2细胞活力无显著影响。与空白组比较,LPS组细胞上清液中BDNF、5-HT水平低(P<0.05),NO、IL-6、TNF-α水平高(P<0.05),细胞中TLR4、p-p65 NF-κB蛋白表达高(P<0.05);与LPS组比较,TTN给药组细胞上清液中BDNF、5-HT水平高(P<0.05),NO、IL-6、TNF-α水平高低(P<0.05),细胞中TLR4、p-p65 NF-κB蛋白表达低(P<0.05)。结论:头痛宁胶囊通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻了LPS诱导的BV2细胞炎症反应,缓解大鼠偏头痛症状。

关键词：偏头痛头痛宁胶囊大鼠神经小胶质细胞 Toll样受体4/核因子κB信号通路中枢敏化炎症反应脂多糖

西洋参-红花有效成分治疗早期糖尿病肾病的网络药理学和实验验证

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世界中医药 2024年第14期19卷 2072-2080页

作者：周婷屈凯陈志永李宁刘厚利武云丁焱霖谢磊许建秦西安国际医学中心西安710100 陕西省中医医院西安710003 陕西省中医药研究院西安710003

目的:通过网络药理学、分子对接技术及细胞实验探讨西洋参-红花有效成分治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得西洋参-红花活性成分的干扰靶点,再与GeneCards、TTD等数据库中早期DN基... 详细信息

目的:通过网络药理学、分子对接技术及细胞实验探讨西洋参-红花有效成分治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得西洋参-红花活性成分的干扰靶点,再与GeneCards、TTD等数据库中早期DN基因靶点相映射即为交集靶点。采用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,运用Cytoscape 3.8.2软件筛选出核心靶点;通过DAVID数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,运用Cytoscape 3.8.2软件进行“有效成分-关键靶点-通路-疾病”网络图展示;通过Autodock Tools软件进行分子对接,采用MTT法检测有效成分对脂多糖(LPS)诱导的人肾小球系膜细胞(HMC)活性,利用酶联免疫吸附试验检测有效成分对炎症介质的影响。结果:得到西洋参-红花治疗早期DN的活性成分有24个,对应的药物靶点207个,其中72个和早期DN相关。网络拓扑参数分析得出了肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β等15个关键靶点,KEGG通路分析筛选出晚期糖基化终末产物(AGE)-AGE受体(RAGE)、TNF、低氧诱导因子-1(HIF-1)、IL-17、核因子κB等20个信号通路;分子对接表明IL-6与槲皮素、木犀草素、黄芩素、人参皂苷rh2稳定结合。细胞实验得出西洋参-红花活性成分槲皮素、木犀草素、黄芩素能显著抑制IL-6、TNF-α和IL-1β表达。结论:本研究初步证实西洋参-红花有效成分能有效抑制早期DN炎症,对肾脏具有保护作用,为后期深入研究提供了依据。

关键词：西洋参-红花早期糖尿病肾病网络药理学分子对接细胞实验晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路炎症介质

新型SOAT1蛋白靶向抑制剂的筛选与体外活性考察

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中国现代应用药学 2024年第4期41卷 504-511页

作者：刘雨溪张聪颖张红陕西省中医药研究院西安710003 赤峰学院基础医学院内蒙古赤峰024000

目的筛选新型甾醇O-酰基转移酶1(sterol O-acyltransferase,SOAT1)靶向抑制剂,并对其活性进行考察。方法通过CCLE数据库筛选SOAT1高表达肝癌细胞系,选择相应细胞系作为实验细胞模型。采用Autodock Vina软件对Interbioscreen数据库中6174... 详细信息

目的筛选新型甾醇O-酰基转移酶1(sterol O-acyltransferase,SOAT1)靶向抑制剂,并对其活性进行考察。方法通过CCLE数据库筛选SOAT1高表达肝癌细胞系,选择相应细胞系作为实验细胞模型。采用Autodock Vina软件对Interbioscreen数据库中61742个化合物与SOAT1蛋白进行分子对接,检测结合能。筛选结合力强的8个化合物,在细胞模型上用CCK8法检测其对肝癌细胞活力的影响。选择在细胞模型上活性最强的2个化合物进一步研究,并测定其IC50。划痕试验及结晶紫染色法进一步检测筛选出的2个化合物对肝癌细胞迁移和增殖的影响,并采用蛋白质免疫印迹法检测化合物对肝癌细胞中SOAT1蛋白的影响。转染siRNA构建SOAT1沉默的肝癌细胞模型,并检测化合物对肝癌细胞活力的影响。结果从CCLE数据库中筛选出SOAT1蛋白高表达的Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞系作为模型细胞。通过分子对接筛选出的结合力前8的化合物中,化合物1和化合物7对上述2种肝癌细胞活力的抑制作用最为显著。此外,这2个化合物还能抑制肝癌细胞迁移及克隆形成,并降低肝癌细胞中SOAT1蛋白表达。在SOAT1沉默的肝癌细胞中,2个化合物对肝癌细胞活力的抑制作用均显著减弱。结论化合物1和化合物7在细胞水平上能通过抑制SOAT1蛋白表达发挥抗肝癌作用,有潜力开发为治疗肝癌的SOAT1抑制剂。

关键词：肝癌 SOAT1 分子对接抑制剂天然产物