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LRRC4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用

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中南大学学报（医学版） 2007年第3期32卷 373-379页

作者：李丹武明花陈琼黄河黄琛李伟松李小玲李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078

目的:制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)的多克隆抗体,应用该抗体检测LRRC4表达与脑胶质瘤病理分级的相关性。方法:应用DSGene1.1软件分析LRRC4全长蛋白,避开跨膜结构域,选取亲水性及抗原性均好的蛋白... 详细信息

目的:制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)的多克隆抗体,应用该抗体检测LRRC4表达与脑胶质瘤病理分级的相关性。方法:应用DSGene1.1软件分析LRRC4全长蛋白,避开跨膜结构域,选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列。构建相应的融合表达载体pGEX-4T-2/276bp,转入***109中IPTG诱导表达。融合蛋白经纯化后免疫新西兰兔,收集并纯化抗血清,获得兔抗人LRRC4多抗,应用该抗体通过Western印迹和免疫组织化学检测LRRC4在正常人胚胎各器官组织中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤中的表达差异。结果:制备了效价高、特异性好的兔抗人LRRC4多抗,进一步证实了LRRC4在正常人脑组织中相对特异高表达,在脑胶质瘤中表达下调(22例/37例)或缺失(15例/37例),其表达水平与脑胶质瘤的病理分级相关。结论:兔抗人LRRC4多抗效价高、特异性好,应用该抗体检测到LRRC4的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关,为LRRC4后续的研究工作奠定了基础。

关键词： LRRC4 多克隆抗体脑胶质瘤病理分级

稳定表达PSMB9-eGFP-His蛋白的THP-1细胞系建立及免疫蛋白酶体活性检测

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生物工程学报 2024年第7期40卷 2282-2293页

作者：王佳豪冯利杰张瑶徐平安徽医科大学基础医学院安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所、中国医学科学院蛋白质组学与药物研发新技术创新单元、北京蛋白质组研究中心医学蛋白质组全国重点实验室北京102206

泛素/蛋白酶体系统(ubiquitin/proteasome system,UPS)在调控细胞内蛋白质稳态过程中发挥重要功能,UPS中蛋白酶体的催化活性受β1(PSMB6)、β2(PSMB7)和β5(PSMB5)亚基调控,在干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、炎症反应、氧化应激等条件诱导下,β1、β2和β5可被相应的β1i(PSMB9)、β2i(PSMB10)和β5i(PSMB8)替换,组装形成免疫蛋白酶体(immunoproteasome)。与标准蛋白酶体相比,免疫蛋白酶体具有更强的免疫调节作用,如加工递呈MHCⅠ抗原、调节促炎细胞因子的产生及T细胞分化、增殖等。免疫蛋白酶体的异常聚集会导致帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化等神经退行性疾病的发生。为探究PSMB9在细菌感染后发挥的功能,本研究通过构建过表达PSMB9-eGFP-His的慢病毒质粒,利用三质粒系统转染HEK293T包装慢病毒,嘌呤霉素筛选,获得稳定表达PSMB9融合蛋白的人髓系白血病单核细胞THP-1细胞系,利用蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)及荧光显微镜验证了PSMB9融合蛋白的表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative PCR,q PCR)计算了稳转细胞系中PSMB9-eGFP基因的拷贝数。免疫荧光结果发现eGFP-His不会影响PSMB9的亚细胞定位,镍柱亲和纯化实验证实PSMB9融合蛋白可组装至20S免疫蛋白酶体中,且具有底物切割活性。上述结果证明PSMB9-eGFP基因成功整合入THP-1细胞基因组并稳定表达,可用于探究PSMB9亚基在活细胞模型中不同感染条件及疾病进程中的细胞定位、动态表达和活性的变化,并为其他2个免疫蛋白酶体亚基PSMB8和PSMB10的稳转细胞系构建提供了参考。

关键词：免疫蛋白酶体慢病毒稳转细胞系 PSMB9 THP-1

三叶青藤叶粉对崇仁麻鸡生长性能、血清生化指标及空肠形态结构的影响

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2481-2488页

作者：宋琼莉陈将吴东邹志恒龚建平陈小连宋文静熊平文徐川辉李梦楚苏炜德艾高祥江西省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽绿色健康养殖江西省重点实验室南昌330200 江西中医药大学南昌330004

【目的】研究三叶青藤叶粉(THL)对崇仁麻鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能及空肠形态结构的影响。【方法】试验选用360只50日龄崇仁麻鸡母鸡,随机分为5组(每组6个重复,每个重复12只),对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.5... 详细信息

【目的】研究三叶青藤叶粉(THL)对崇仁麻鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能及空肠形态结构的影响。【方法】试验选用360只50日龄崇仁麻鸡母鸡,随机分为5组(每组6个重复,每个重复12只),对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.5%、1%、2%和4%三叶青藤叶粉,试验期56 d。试验结束时以重复为单位称重,记录肉鸡采食量,统计生长性能指标;采集血液和肠道组织样品,检测血清抗氧化、免疫指标,制备空肠组织切片并观察空肠形态,测量空肠绒毛高度和隐窝深度,统计绒隐比(V/C)。【结果】与对照组相比,饲粮中添加1%三叶青藤叶粉后崇仁麻鸡料重比(F/G)显著降低(P肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);添加2%三叶青藤叶粉后血清IgA、TGF-β含量显著升高(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和TNF-α含量显著降低(P<0.05);添加4%三叶青藤叶粉后血清TGF-β含量显著升高(P<0.05),IL-1β含量显著降低(P<0.05);饲粮中添加0.5%和1%三叶青藤叶粉后空肠绒毛高度和V/C显著增加(P<0.05)。【结论】饲粮中添加0.5%~4%三叶青藤叶粉能在一定程度上促进崇仁麻鸡生长,提高机体免疫力,改善肠道组织形态,本试验条件下三叶青藤叶粉添加水平为1%~2%效果较好。

关键词：三叶青藤叶粉崇仁麻鸡生长性能抗氧化免疫肠道形态

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猫棒束孢乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用

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肿瘤研究与临床 2024年第4期36卷 241-247页

作者：余国彦史晓伟张艺尹陈丽霞赵莉莉杨永明王靖阎磊杨喜花山西医科大学公共卫生学院太原030001 山西省肿瘤医院中国医学科学院肿瘤医院山西医院山西医科大学附属肿瘤医院实验动物中心太原030013

目的探讨猫棒束孢乙醇提取物(IFA)对荷H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用及可能机制。方法将猫棒束孢用50%乙醇重复提取两次,合并两次滤液,水浴蒸干,得到IFA。将36只雌性昆明小鼠按照随机数字表法分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、阳性对... 详细信息

目的探讨猫棒束孢乙醇提取物(IFA)对荷H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用及可能机制。方法将猫棒束孢用50%乙醇重复提取两次,合并两次滤液,水浴蒸干,得到IFA。将36只雌性昆明小鼠按照随机数字表法分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、IFA低剂量组、IFA中剂量组、IFA高剂量组,每组6只;除正常对照组外,其余各组于小鼠右侧腋窝皮下接种小鼠肝癌H22细胞,建立荷瘤小鼠模型。正常对照组、模型对照组均每天胃灌注0.9%NaCl溶液,阳性对照组每天腹腔注射25 mg/kg环磷酰胺并胃灌注0.9%NaCl溶液,IFA低、中、高剂量组分别每天胃灌注37.5、75、150 mg/kg IFA。连续给药10 d后,麻醉后摘眼球取血,颈椎脱臼法处死小鼠,分离肿瘤组织、胸腺和脾脏,称量各标本质量;根据肿瘤组织质量和脏器质量分别计算抑瘤率和免疫器官指数;采用酶联免疫吸附试验检测血清转化生长因子β(TGF-β)水平;HE染色观察肿瘤组织细胞形态;对肿瘤组织进行TUNEL荧光染色,显微镜下观察细胞凋亡情况,并计算总细胞中凋亡细胞占比;免疫组织化学法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白表达水平,用ImageJ软件分析总面积中bcl-2或bax蛋白阳性区域占比。结果接种H22细胞6 d后,小鼠皮下接种部位有结节产生,提示造模成功。给药10 d后,阳性对照组及IFA低、中、高剂量组荷瘤小鼠的抑瘤率分别为63.94%、35.70%、62.44%、72.67%。阳性对照组小鼠胸腺指数低于模型对照组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P0.05),IFA各剂量组胸腺指数均高于阳性对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。IFA中剂量组、IFA高剂量组小鼠血清TGF-β浓度均低于正常对照组、模型对照组、阳性对照组,差异均有统计学意义(均P肿瘤组织中出现大面积凋亡、坏死细胞。TUNEL法染色示,阳性对照组和IFA各剂量组凋亡细胞占比均高于模型对照组,差异均有统计学意义(均P肿瘤作用,且可能对小鼠免疫功能有保护作用;其抗肿瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：肝肿瘤疾病模型,动物猫棒束孢治疗结果细胞凋亡

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勇担时代使命守护一方绿水青山

绿色天府 2024年第9期 28-29页

作者：无盐源县左所片区林业工作站

盐源县左所片区林业工作站坐落于素有“高原明珠”之称的泸沽湖畔,是县林草局下属七个片区林业工作站之一,承担三个镇林草资源管理职责,林地184.31万亩,草地26.34万亩,森林蓄积205.21万立方米、覆盖率70.2%。近年来,左所片区林业站坚持... 详细信息

盐源县左所片区林业工作站坐落于素有“高原明珠”之称的泸沽湖畔,是县林草局下属七个片区林业工作站之一,承担三个镇林草资源管理职责,林地184.31万亩,草地26.34万亩,森林蓄积205.21万立方米、覆盖率70.2%。近年来,左所片区林业站坚持以防为主、防灭结合,不断强化防火宣传教育、隐患排查整治以及初期火情处置能力建设,以实际行动筑牢森林防火“安全网”。

关键词：林业工作站管理职责防火宣传森林蓄积森林防火隐患排查林业站高原明珠

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固有淋巴样细胞与癌症免疫编辑

中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第5期31卷 429-436页

作者：吴克复郑国光马小彤宋玉华中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液系统疾病临床医学研究中心细胞生态海河实验室天津300020 天津医学健康研究院天津301600

癌症的发生发展是机体对癌症的免疫编辑过程,亦即机体与肿瘤的微进化博弈过程,可分为清除、平衡和逃逸三个时相。对小鼠肿瘤和部分人类肿瘤的研究表明,以T细胞为主的获得性免疫和以固有淋巴样细胞(ILC)为主的固有免疫均参与癌症免疫编辑... 详细信息

癌症的发生发展是机体对癌症的免疫编辑过程,亦即机体与肿瘤的微进化博弈过程,可分为清除、平衡和逃逸三个时相。对小鼠肿瘤和部分人类肿瘤的研究表明,以T细胞为主的获得性免疫和以固有淋巴样细胞(ILC)为主的固有免疫均参与癌症免疫编辑。ILC是十多年前发现的固有免疫系统的独特分支,属于组织驻留细胞,由多个细胞亚群组成,其性质和功能具有显著的异质性,并受到多种细胞分泌的各种因子的调节。ILC不仅参与组织稳态调节和炎症反应,而且通过多种机制参与肿瘤微环境的形成和癌症免疫编辑过程。本文探讨ILC的分类和性质以及在肿瘤中的作用和机制,为肿瘤发生发展机制和诊疗研究拓展新的思路。

关键词：癌症免疫编辑固有淋巴样细胞

单细胞转录组解析CD4+ T细胞在肿瘤微环境中的研究进展

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中华肿瘤防治杂志 2024年第15期31卷 950-957页

作者：王夫浩岳金波山东第二医科大学临床医学院山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院)腹部放疗一病区山东第一医科大学(山东省医学科学院)

目的探讨目前单细胞转录组解析CD4+T细胞的研究进展，通过解析CD4+T细胞的异质性特征为肿瘤精准治疗提供思路。方法以“single cell transcriptomics、CD4 T cells、cancer”为关键词，检索2014年2月-2023年6月PubMed收录的相关文献... 详细信息

目的探讨目前单细胞转录组解析CD4+T细胞的研究进展，通过解析CD4+T细胞的异质性特征为肿瘤精准治疗提供思路。方法以“single cell transcriptomics、CD4 T cells、cancer”为关键词，检索2014年2月-2023年6月PubMed收录的相关文献。纳入标准：对肿瘤组织进行单细胞转录组测序分析相关文献；排除标准：综述文献、Meta分析和病例报告。最终纳入50篇文献，其中34篇单细胞自测数据文献，6篇数据挖掘文献，10篇支持理论所引用的背景文献。结果 CD4+T细胞表现出显著的细胞异质性，可细分为多个功能各异的细胞亚群，在肿瘤微环境中呈现出高度的复杂性和动态变化，并与免疫治疗疗效密切相关。结论单细胞转录组学技术能够深入解析CD4+T细胞的群体异质性，揭示其在肿瘤微环境中亚群的动态变化特征，为肿瘤精准治疗带来新的见解。

关键词：单细胞转录组学 CD4+ T细胞肿瘤微环境免疫治疗综述文献

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食管癌手术颈部吻合口瘘的护理

中国实用医刊 2012年第12期39卷 122-123页

作者：马郭霞刘宽荣山西省阳城县肿瘤医院 048100

目的总结食管癌手术颈部吻合口瘘的护理经验。方法对2007年1月至2009年12月施行三切17手术44例患者中颈部吻合口瘘12例的愈合情况和护理方法进行总结。结果施行三切口手术治疗共44例，切口愈合时间8～26d，平均11d。吻合口瘘12例，发生... 详细信息

目的总结食管癌手术颈部吻合口瘘的护理经验。方法对2007年1月至2009年12月施行三切17手术44例患者中颈部吻合口瘘12例的愈合情况和护理方法进行总结。结果施行三切口手术治疗共44例，切口愈合时间8～26d，平均11d。吻合口瘘12例，发生率为27．3％。切口延期愈合时间11—22d，平均18d。患者均为保守治疗至切口愈合。结论彻底的颈部引流、充分的胃肠减压、足够的营养支持，必要的抗感染治疗，术后的精心护理，是吻合口瘘保守治疗成功的关键。

关键词：三切口食管癌切除术颈部吻合口瘘护理

动物源副产物胶原蛋白肽的制备及其在食品工业中的应用研究进展

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肉类研究 2024年第1期38卷 67-74页

作者：张腾腾高晓光刘晓畅雷元华谢鹏孙宝忠晓虎看卓才仁尕松扎西巴永吉高晓炜张松山中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 河北科技大学食品与生物学院河北石家庄050018 石家庄市生猪产业技术研究院河北石家庄052260 曲麻莱县农牧业综合服务中心青海玉树815500 廊坊市晟味食品有限公司河北廊坊065000

在动物加工过程中会产生大量的副产品和废弃物,这些产品中富含生物活性蛋白质,可以通过化学处理或酶水解等方式转化为具有特殊生理功能的胶原蛋白肽。胶原蛋白具有一定的营养价值,但由于其分子质量较大,难以被人体消化吸收。而胶原蛋白... 详细信息

在动物加工过程中会产生大量的副产品和废弃物,这些产品中富含生物活性蛋白质,可以通过化学处理或酶水解等方式转化为具有特殊生理功能的胶原蛋白肽。胶原蛋白具有一定的营养价值,但由于其分子质量较大,难以被人体消化吸收。而胶原蛋白肽分子质量较小,更容易被人体消化吸收,并且发现动物源副产物胶原蛋白肽具有许多特殊的生理功能,因此将胶原蛋白肽作为新型食品原材料成为近些年来的研究热点之一。本文综述动物源副产物胶原蛋白肽制备方式的优缺点,及胶原蛋白肽在人体中的消化吸收,同时介绍胶原蛋白肽在食品加工中的应用,为将来开发胶原蛋白肽新产品提供新思路。

关键词：动物源副产物胶原蛋白肽提取方法消化吸收食品应用