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响应面法优化西洋参果多糖的提取工艺及其体外抗氧化活性

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食品工业科技 2023年第13期44卷 160-166页

作者：赵丽明郭煦遥毛英民赵大庆黄宝泰李佳奇刘莉齐滨长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 长春中医药大学药学院吉林长春130117

目的:对西洋参果实中的多糖进行提取,结合响应面法对提取工艺进行优化,并对西洋参果多糖是否具有体外抗氧化活性进行研究。方法:本研究以新鲜的西洋参果实为原料,采用了水提醇沉法提取其中的多糖。用单因素实验以及响应面法对提取工艺... 详细信息

目的:对西洋参果实中的多糖进行提取,结合响应面法对提取工艺进行优化,并对西洋参果多糖是否具有体外抗氧化活性进行研究。方法:本研究以新鲜的西洋参果实为原料,采用了水提醇沉法提取其中的多糖。用单因素实验以及响应面法对提取工艺进行了优化。从DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原能力三个方面进行果多糖的体外抗氧化活性研究。结果:最佳工艺参数为:提取时间为2.5 h,乙醇浓度为80%,料液比为1:16 g/mL,此时的多糖得率为29.47%±0.65%,与模型预测值相当。在以下三方面考察了西洋参果多糖的体外抗氧化活性:多糖浓度为3.4 mg/mL时,其DPPH自由基清除率达75.14%±0.65%,IC_(50)值为0.71 mg/mL;多糖浓度为3.4 mg/mL时,其羟基自由基的清除率可达71.82%±1.43%,IC_(50)值为0.87 mg/mL;多糖的浓度为1.0 mg/mL时,其总还原力达到了0.730,并且其体外抗氧化能力随西洋参果多糖浓度的增加而增强。结论:抗氧化活性的实验结果说明了西洋参果多糖具有较好的抗氧化活性。本研究可以为西洋参果多糖进一步开发利用奠定理论基础,确保中药资源能够被充分利用。

关键词：西洋参多糖提取工艺响应面优化抗氧化活性

基于UPLC-Q-Orbitrap MS/MS研究人参皂苷在发酵过程中的生物转化

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高等学校化学学报 2018年第2期39卷 219-225页

作者：乔梦丹刘尚张琰李晶郑飞戴雨霖越皓长春中医药大学吉林省人参科学研究院长春130117

应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)联用技术分析鉴别人参发酵前后的皂苷类化合物,研究了整体人参皂苷在自然发酵过程中的生物转化规律.通过鉴定45种人参皂苷,比较了生晒参和发酵人参中人参皂苷种... 详细信息

应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)联用技术分析鉴别人参发酵前后的皂苷类化合物,研究了整体人参皂苷在自然发酵过程中的生物转化规律.通过鉴定45种人参皂苷,比较了生晒参和发酵人参中人参皂苷种类及含量的差异,在发酵人参中检测到20(S)-Rg_3和20(R)-Rg_3,20(S)-Rh_1和20(R)-Rh_1等异构体人参皂苷,其中10余种人参皂苷在自然人参状态下不存在或未被检出.本研究对于人参发酵前后的化学成分变化进行了高通量的精准分析,对同类天然产物发酵研究具有借鉴意义,可指导人参炮制品生晒参和发酵人参的安全有效使用.

关键词：发酵人参皂苷生物转化液相色谱-质谱联用

哈蟆油酶解物激活MAPK/ERK信号凋亡途径修复皮质酮诱导HT-22细胞损伤作用

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现代食品科技 2024年

作者：李唯嘉马超刘萌萌裴科林喆律广富长春中医药大学吉林省人参科学研究院长春中医药大学药学院

为研究哈蟆油（OviductusRanae,OR）对海马神经元细胞保护作用机制，本研究通过皮质酮（Corticosterone,CORT）诱导HT-22细胞损伤模型探究哈蟆油酶解物对小鼠海马神经元细胞（HT-22）细胞损伤模型的保护作用及其作用机制。采用CORT与HT... 详细信息

为研究哈蟆油（OviductusRanae,OR）对海马神经元细胞保护作用机制，本研究通过皮质酮（Corticosterone,CORT）诱导HT-22细胞损伤模型探究哈蟆油酶解物对小鼠海马神经元细胞（HT-22）细胞损伤模型的保护作用及其作用机制。采用CORT与HT-22细胞共同培养建立HT-22细胞损伤模型，给予哈蟆油酶解物再次孵育，将ERK信号通路抑制剂PD98059加入HT-22细胞中。采用MTT法、Hochest 33258染色、流式细胞术、Western blot技术检测HT-22细胞凋亡情况和相关蛋白表达以及MAPK/ERK信号通路蛋白表达。结果显示高水平CORT能够诱导HT-22细胞损伤，哈蟆油酶解物能够使CORT诱导的HT-22细胞活力提升62.5%～87.5%，凋亡比例降低50%～70%。哈蟆油酶解物能够上调BCL-2、P-ERK1/2蛋白表达，同时下调BAX、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。上述结果表明，高水平CORT是通过抑制MAPK/ERK信号通路促进凋亡的发生从而诱导HT-22细胞损伤，哈蟆油酶解物能够通过激活MAPK/ERK信号通路调节BLC-2、BAX、Caspase-3、Caspase-9凋亡相关蛋白的表达进而抑制凋亡的发生减轻神经元损伤，该作用机制为哈蟆油发挥抗抑郁作用的关键途径之一。

关键词：哈蟆油酶解物 MAPK/ERK 凋亡 HT-22细胞

梅花鹿鹿茸不同生长时期转录组及蛋白组联合分析

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吉林中医药 2022年

作者：慧芳孙天霞薛东明姜英男赵雨长春中医药大学人参科学研究院

目的了解鹿茸再生及快速生长过程中基因和蛋白的动态变化，阐明鹿茸生长发育机制。方法以梅花鹿（Cervus nippon Temminck）的鹿茸（初生期（PS）、快速生长期（RG）、骨化期（OS）鹿茸组织）作为实验材料，基于Illumina Hiseq和iTRA...

目的了解鹿茸再生及快速生长过程中基因和蛋白的动态变化，阐明鹿茸生长发育机制。方法以梅花鹿（Cervus nippon Temminck）的鹿茸（初生期（PS）、快速生长期（RG）、骨化期（OS）鹿茸组织）作为实验材料，基于Illumina Hiseq和iTRAQ技术在转录和蛋白水平进行分析，根据差异基因和差异蛋白结果筛选与鹿茸再生和快速生长有关的基因和蛋白。结果 2组分别得到11 294(PSvs RG)和4 924(PSvs OS)个显著差异基因（DEGs）,2组的蛋白组数据显示，分别得到236、211个差异蛋白（DAPs），相关性分析显示转录组和蛋白组数据相关性分析呈弱相关。在2组中分别有54、51个DEGs编码了其相应的DAPs，其中，在2组中分别得到35和20个在转录组和蛋白组中调节方向相同的DEGs和相应的DAPs。对候选基因/蛋白进行KEGG富集分析，分别富集到10和12个信号通路。其中，2组共同富集到的通路包括：血管平滑肌收缩、p53信号通路、黏着斑、蛋白质消化吸收、TGF-β信号通路、ECM-受体相互作用信号通路。只富集到快速生长期的信号通路包括：戊糖磷酸途径、糖酵解/糖异生、果糖和甘露糖代谢及代谢途径。只富集到骨化期的信号通路包括：破骨细胞分化、肌动蛋白细胞骨架的调节、紧密连接、RNA转运、m RNA监测途径信号通路。共有10个候选基因/蛋白（CALD1、THBS2S、COL9A、ALDO、COL1A、HSPG2、SIRPA、CSRP、MYH9、H1-5）注释到上述信号通路。结论在鹿茸生长发育期间许多基因和蛋白质在鹿茸快速生长期和骨化期表现出不同的丰度。转录组和蛋白组数据相关性较差。筛选出与鹿茸生长发育相关的蛋白为：CALD1、THBS2S、COL9A、ALDO、COL1A、HSPG2、SIRPA、CSRP、MYH9、H1-5以上结果为阐明鹿茸再生的分子机制提供了重要的理论依据。

关键词：

生态因子对人参药效成分、皂苷合成酶基因和抗性生理的影响

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分子植物育种 2024年

作者：徐哲丰刘春铄陈雨秋廖旭东隋佳宏张涛陈长宝长春中医药大学吉林省人参科学研究院长春中医药大学药学院

生长环境对人参品质的影响起着至关重要的作用，环境因素的变化不同程度上致使人参许多内在指标发生改变。本文通过综述不同生态因子(水分，光照，温度，海拔，土壤化学特性等)对人参药效成分(皂苷类，多糖类和挥发油类)含量、人... 详细信息

生长环境对人参品质的影响起着至关重要的作用，环境因素的变化不同程度上致使人参许多内在指标发生改变。本文通过综述不同生态因子(水分，光照，温度，海拔，土壤化学特性等)对人参药效成分(皂苷类，多糖类和挥发油类)含量、人参皂苷合成关键酶基因(HMGR， FPS， SS， SE， DS， β-AS等)的表达和人参抗性生理特征(SOD， POD， CAT等)的影响，梳理发现生态因子对人参药效成分、关键酶基因和抗性生理特征的影响作用各不相同，并对今后的研究发展方向进行了展望，以期进一步掌握人参药材的生长发育、生理活动和生化反应，推动人参栽培研究的深入发展，为建立“优质、安全、稳定、可控”的高品质人参栽培模式提供科学依据。

关键词：人参生态因子人参皂苷人参皂苷合成关键酶基因抗性生理特征

红景天含药血清对肿瘤坏死因子α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

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中药新药与临床药理 2022年第3期33卷 287-292页

作者：田乐朴松兰何艳新潘志长春中医药大学人参科学研究院吉林长春130117 长春中医药大学临床医学院吉林长春130117

目的探讨红景天含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响。方法制备空白组、模型组、雷公藤多苷组(9.45 mg·kg^(-1))及红景天低、中、高剂量组(1.05、2.1、4.2 g·kg^(-1))大鼠含药... 详细信息

目的探讨红景天含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响。方法制备空白组、模型组、雷公藤多苷组(9.45 mg·kg^(-1))及红景天低、中、高剂量组(1.05、2.1、4.2 g·kg^(-1))大鼠含药血清;体外培养HFLS-RA,以20 ng·mL^(-1)TNF-α及10%不同组含药血清对HFLS-RA进行干预。采用MTT法检测各组含药血清对HFLS-RA细胞的增殖作用;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)的含量;PCR法检测细胞中维甲酸受体相关孤儿受体γt(ROR-γt)、信号转导及转录激活因子3(Stat3)、叉头样转录因子3(Foxp3)mRNA表达;Western Blot法检测细胞中ROR-γt、Stat3、Foxp3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组培养HFLS-RA 24、48 h后细胞增殖水平明显升高(P<0.01),ROR-γt、Stat3 mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),IL-6、IL-17水平升高(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),TGF-β、IL-10水平降低(P<0.01)。与模型组比较,红景天各剂量组HFLS-RA细胞增殖水平降低(P<0.01),ROR-γt、Stat3mRNA及蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),IL-6、IL-17水平降低(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),TGF-β、IL-10水平升高(P<0.01)。结论红景天含药血清可抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞的异常增殖,其机制可能与下调ROR-γt、Stat3表达及上调Foxp3表达有关。

关键词：红景天含药血清人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞维甲酸受体相关孤儿受体γt 信号转导及转录激活因子3 叉头样转录因子3 细胞增殖肿瘤坏死因子α

液相色谱-质谱联用-定向进化酶组合技术应用于三萜类皂苷转化研究

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分析化学 2020年第1期48卷 129-136页

作者：孙红梅陆泽林赵幻希郑飞李晶刘明越皓于珊珊长春中医药大学吉林省人参科学研究院

利用定向进化技术重组糖苷酶ABQ,转化不同结构的三萜类皂苷（商陆皂苷甲、三七皂苷R;和柴胡皂苷A）,通过高分离度液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定转化的产物结构,阐明其转化机制。结果表明,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲、三七皂苷R... 详细信息

利用定向进化技术重组糖苷酶ABQ,转化不同结构的三萜类皂苷（商陆皂苷甲、三七皂苷R;和柴胡皂苷A）,通过高分离度液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定转化的产物结构,阐明其转化机制。结果表明,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲、三七皂苷R;和柴胡皂苷A侧链糖苷键的水解,转化为商陆皂苷乙、三七皂苷R;、柴胡次皂苷F和柴胡皂苷元F。根据色谱-质谱对反应产物的实时分析,ABQ对这3种三萜皂苷表现出不同的底物选择性,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲C-3位外侧的葡萄糖水解,生成商陆皂苷乙;三七皂苷R;的C-20位葡萄糖被水解,生成三七皂苷R;;重组糖苷酶ABQ能够首先催化柴胡皂苷A的C-3位葡萄糖水解,生成柴胡次皂苷F,并继续催化C-3位的岩藻糖苷水解,生成柴胡皂苷元F。定向进化技术重组酶能够提高酶活力和作用环境适应能力,色谱-质谱联用通过原型和产物实时检测评价重组酶的作用。

关键词：三萜皂苷生物转化液相色谱-质谱联用酶定向进化技术

重组内切纤维素酶Fpendo5A转化三七总皂苷

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高等学校化学学报 2017年第12期38卷 2185-2192页

作者：李男赵幻希李晶王楠于渤浩越皓于珊珊长春中医药大学吉林省人参科学研究院长春130000

从嗜热细菌基因组中克隆到1个新的纤维素酶基因,并在大肠杆菌中进行了高效可溶性表达,粗酶液经镍柱亲和层析进行分离纯化.利用快速分离液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(RRLC/Q-TOF-MS)对重组内切纤维素酶Fpendo5A转化三七总皂苷的产... 详细信息

从嗜热细菌基因组中克隆到1个新的纤维素酶基因,并在大肠杆菌中进行了高效可溶性表达,粗酶液经镍柱亲和层析进行分离纯化.利用快速分离液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(RRLC/Q-TOF-MS)对重组内切纤维素酶Fpendo5A转化三七总皂苷的产物结构进行了鉴定,并进一步阐明其转化机制.结果表明,该酶的最适反应温度和pH值分别为80℃和5.5.Fpendo5A能够催化三七总皂苷中的主要皂苷成分,即Ra_1,Rb_1,Rc,Rd和Rg_3的侧链糖基的水解反应,但对于不同的皂苷底物,Fpendo5A选择性催化的侧链糖基类型不同.经鉴定,Fpendo5A转化Ra_1,Rb_1,Rc,Rd和Rg_3的转化产物分别为Rb_2,GypⅩⅦ,CMC_1,F_2和Rh_2.由此可见,Fpendo5A通过水解Rb_1,Rc,Rd和Rg3的C3位的β-(1,2)糖苷键分别生成GypⅩⅦ,CMC1,F2和Rh2.在转化Ra_1时,Fpendo5A通过水解Ra_1的C20位的α-(1,4)木糖苷键生成Rb2.

关键词：三七皂苷内切纤维素酶生物转化液相色谱-质谱联用

基于酿酒酵母体系的人参皂苷抗衰老活性筛选及评价

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食品工业科技 2022年第1期43卷 1-9页

作者：陈静静白雪媛边帅吉世禹王思明长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130000

以酿酒酵母作为模式生物对人参皂苷进行抗衰老活性筛选并对其活性展开初步探讨。基于模式菌酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae BY4742)的生长曲线筛选出人参皂苷的最适给药浓度,在此基础上,根据酵母的生长曲线和超氧化物歧化酶SOD活性... 详细信息

以酿酒酵母作为模式生物对人参皂苷进行抗衰老活性筛选并对其活性展开初步探讨。基于模式菌酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae BY4742)的生长曲线筛选出人参皂苷的最适给药浓度,在此基础上,根据酵母的生长曲线和超氧化物歧化酶SOD活性筛选八种人参皂苷单体Rb1、Rb2、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rh2、Rd的抗衰老作用,找出效果最佳的一种单体皂苷,再通过抗氧化指标检测及细胞形态变化分析,初步探究人参皂苷的抗衰老作用。同时提取酿酒酵母蛋白进行蛋白组学分析,确定具有显著差异的蛋白,结合GO富集分析相关生物学分析,对差异蛋白的功能通路、属性和代谢通路等进行分析研究。结果表明,人参皂苷的最适给药浓度是180μg/mL,常用的八种单体皂苷中人参皂苷Rg1具有明显的抗衰老作用,能延缓酵母进入衰亡期。人参皂苷Rg1可以不同程度提高酵母细胞内的抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性,减少活性氧(ROS)含量和丙二醛(MDA)含量。蛋白组学分析结果显示人参皂苷延缓酿酒酵母衰老可能与14个显著差异蛋白有关,同时与细胞代谢有密切关系。

关键词：人参皂苷酿酒酵母抗衰老氧化应激