检索结果-南通市图书馆

纤毛病相关蛋白CEP43和CCDC13在艾美游仆虫中的细胞与亚细胞定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物学杂志 2022年第3期57卷 412-421页

作者：尹家奇何燕吴俊林生欣遵义医科大学生物化学与分子生物学教研室遵义563000

艾美游仆虫(Euplotes amieti)含有几乎所有已知的纤毛病基因,但绝大多数基因及其表达产物的细胞定位和功能未知。为明确中心粒蛋白43(CEP43)和卷曲螺旋域蛋白13(CCDC13)在艾美游仆虫中的细胞以及亚细胞定位,本研究采用免疫荧光和免疫电... 详细信息

艾美游仆虫(Euplotes amieti)含有几乎所有已知的纤毛病基因,但绝大多数基因及其表达产物的细胞定位和功能未知。为明确中心粒蛋白43(CEP43)和卷曲螺旋域蛋白13(CCDC13)在艾美游仆虫中的细胞以及亚细胞定位,本研究采用免疫荧光和免疫电镜技术对其进行显微与超微结构观察。免疫荧光结果显示,CEP43主要定位于艾美游仆虫的细胞核、腹面纤毛器(口围带、尾棘毛、额腹横棘毛)的基体及其附属微管,CCDC13主要定位于腹面纤毛器杆部和基体以及银线系统,附属微管及大核未见其定位。CEP43与γ-微管蛋白定位相同,CCDC13与γ-微管蛋白仅在腹面定位相同。2种蛋白在免疫电镜下显示与荧光标记定位相同,而且CCDC13在额腹棘毛基部的胶体金数量远多于CEP43。结合已有研究推测,纤毛形成后多余的CEP43受γ-微管蛋白复合体调控且被募集于细胞核,CCDC13参与形成银线系统,但为增加生长期艾美游仆虫的微管再生能力,附属微管结构不需要CCDC13的参与。本结果为进一步研究上述蛋白在腹毛类纤毛虫中调节和维持皮层微管类细胞骨架的装配和稳定性中的作用和机制提供资料。

关键词：艾美游仆虫纤毛病蛋白 CEP43 CCDC13 免疫荧光免疫电镜

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

MLCK敲除对FaDu细胞凋亡的影响

安徽医科大学学报 2023年第5期58卷 748-752,759页

作者：熊垒黄建尚周青汪渊左莉安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用... 详细信息

目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用RT-qPCR、Western blot检测MLCK敲除效率;流式细胞术检测MLCK敲除对细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测MLCK敲除对细胞凋亡的影响。结果DNA测序显示在sgRNA序列识别处,MLCK碱基序列发生了缺失或替换;RT-qPCR和Western blot显示MLCK敲除细胞株mRNA和蛋白质水平低于对照组(P<0.0001);流式细胞术实验显示敲除MLCK对FaDu细胞的周期无明显变化,但凋亡率增加(P<0.0001);Western blot检测显示,MLCK敲除组Bax/Bcl-2(P<0.0001)和Cleaved Caspase-3/Caspase-3(P=0.0007)增加。结论敲除MLCK诱导细胞凋亡,但具体机制需进一步研究。

关键词：下咽癌肌球蛋白轻链激酶增殖凋亡

基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞移植减轻大鼠颈动脉内皮和平滑肌细胞增生

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2019年第4期35卷 320-326页

作者：束波范芳遵义医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的探讨移植基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠颈动脉狭窄的作用。方法携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒转染BMSC后经静脉注入大鼠。分为颈动脉损伤模型对照组、BMSC移植组、SDF-1预处理的BMSC移植组... 详细信息

目的探讨移植基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠颈动脉狭窄的作用。方法携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒转染BMSC后经静脉注入大鼠。分为颈动脉损伤模型对照组、BMSC移植组、SDF-1预处理的BMSC移植组。细胞移植术后2周,取损伤处血管组织采用免疫荧光技术检测EGFP表达明确BMSC归巢情况;移植术后4周, Evans蓝染色观察损伤内膜内皮化程度,免疫荧光技术检测损伤血管CD31的表达情况;HE染色检测损伤颈动脉新生内膜增生程度,免疫组织化学染色法检测损伤血管增殖细胞核抗原(PCNA)的表达, Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果移植SDF-1预处理的BMSC能有效促进干细胞向损伤血管的归巢,并促进损伤血管再内皮化程度。BMSC移植后新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积均低于对照组, SDF-1预处理的BMSC移植组差异更为显著。移植SDF-1预处理的BMSC可显著提高损伤内膜CD31以及VEGF的水平,并抑制PCNA的表达。结论SDF-1预处理BMSC移植可通过促进BMSC归巢至损伤处并诱导细胞分化,抑制中膜平滑肌细胞增殖来减轻血管狭窄程度。

关键词：基质细胞衍生因子1(SDF-1) 骨髓间充质干细胞(BMSC) 狭窄

建立稳定敲减MAP4K4表达的A549细胞系及初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四川大学学报（医学版） 2022年第4期53卷 611-618页

作者：王茹尹讯张涛孙雪花张春冬重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的分析敲减MAP4K4表达对癌细胞增殖及迁移运动的影响,并探究潜在的分子机理。方法构建稳定敲减MAP4K4表达A549细胞,并综合免疫荧光、细胞增殖与迁移运动等实验方法,检测其亚细胞定位,并分析对照组与敲减组细胞增长及迁移运动变化情况... 详细信息

目的分析敲减MAP4K4表达对癌细胞增殖及迁移运动的影响,并探究潜在的分子机理。方法构建稳定敲减MAP4K4表达A549细胞,并综合免疫荧光、细胞增殖与迁移运动等实验方法,检测其亚细胞定位,并分析对照组与敲减组细胞增长及迁移运动变化情况。结果A549细胞中MAP4K4定位于黏着斑及细胞边缘部位,稳定敲减MAP4K4表达诱导癌细胞成簇生长,阻滞细胞周期进程及细胞迁移运动。进一步分析发现,敲减MAP4K4表达诱导E-cadherin积累而下调N-cadherin,扰乱“钙黏蛋白转换”及上皮-间质转换。最终,对照组与敲减组细胞分别联合顺铂(终浓度为5μmol/L)及紫杉醇(终浓度为20 nmol/L)处理,稳定敲减MAP4K4表达可明显增强化疗药物对癌细胞的杀伤效果。结论A549细胞中MAP4K4可通过调控“钙黏蛋白转换”促上皮-间质转化而调控癌细胞恶性表型及化疗耐药。

关键词：肺腺癌细胞上皮-间质转化钙黏蛋白转换化疗耐药 MAP4K4

基于p38MAPK、AMPK探讨华蟾毒精杀伤人肝癌细胞的机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中成药 2023年第2期45卷 596-602页

作者：曹秀向远彩邓程凤代荣阳刘友平西南医科大学生物化学与分子生物学教研室四川泸州646000

目的研究华蟾毒精对肝癌细胞系SK-Hep1和HepG2细胞凋亡、DNA损伤的影响及作用机制。方法取对数生长期肝癌细胞,采用不同浓度(5、10、25、50 nmol/L)华蟾毒精,或干扰p38MAPK/AMPK+华蟾毒精(50 nmol/L)处理肝癌细胞,乳酸脱氢酶(LDH)法... 详细信息

目的研究华蟾毒精对肝癌细胞系SK-Hep1和HepG2细胞凋亡、DNA损伤的影响及作用机制。方法取对数生长期肝癌细胞,采用不同浓度(5、10、25、50 nmol/L)华蟾毒精,或干扰p38MAPK/AMPK+华蟾毒精(50 nmol/L)处理肝癌细胞,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞毒性,Western blot法检测凋亡标志蛋白PARP、DNA损伤标志蛋白γ-H2AX以及p-p38MAPK、p-AMPK蛋白表达。结果与对照组比较,华蟾毒精处理后肝癌细胞PARP、γ-H2AX、p-p38MAPK及p-AMPK蛋白表达均呈现剂量和时间依赖性增加(P<0.05),可引起肝癌细胞死亡(P<0.05);下调p38MAPK基因表达后,华蟾毒精诱导的肝癌细胞PARP、γ-H2AX蛋白表达均降低(P<0.05),但p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);下调AMPK基因表达后,华蟾毒精诱导的肝癌细胞PARP、γ-H2AX以及p-p38MAPK蛋白表达均升高(P<0.05),肝癌细胞死亡率增加(P<0.05)。结论华蟾毒精可同时激活肝癌细胞中p38MAPK和AMPK表达;激活的p38MAPK可促进华蟾毒精诱导的肝癌细胞凋亡和DNA损伤;而激活的AMPK可抑制华蟾毒精诱导的肝癌细胞凋亡和DNA损伤;人肝癌细胞中华蟾毒精激活p38MAPK的力度大于AMPK,最终达到杀伤肿瘤的作用。

关键词：华蟾毒精肝癌细胞凋亡 DNA损伤 p38MAPK AMPK

艾美游仆虫大核基因组与转录组测序及结构特征

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水生生物学报 2021年第5期45卷 1014-1023页

作者：何燕尹家奇生欣遵义医科大学生物化学与分子生物学教研室遵义563000

为获得艾美游仆虫(Euplotes amieti)大核基因组结构特征、分析基因功能及其表达调控方式,研究采用高通量测序技术对艾美游仆虫进行了大核基因组与转录组测序,结果显示基因组测序最终得到原始reads数据为10.92 Gb,过滤后得到50287条Cont... 详细信息

为获得艾美游仆虫(Euplotes amieti)大核基因组结构特征、分析基因功能及其表达调控方式,研究采用高通量测序技术对艾美游仆虫进行了大核基因组与转录组测序,结果显示基因组测序最终得到原始reads数据为10.92 Gb,过滤后得到50287条Contigs。GC含量较低,为31%;其中两端同时具有端粒的微染色体数量为27542条,占54.76%,只含有一端端粒的基因数量为6118条。Contigs进行基因结构分析,96.5%的基因能够被预测出功能,最终得到27650条基因,平均外显子长度为311.69 bp;内含子较短,平均长度为150 bp。转录组测序结果为76219898条,拼接后获得38588条转录组Unigenes,其平均长度为1189 bp。将转录组的38588条Unigenes比对发现有2%—3%基因发生了编程性移码,其中,绝大多数为+1PRF;除此之外,艾美游仆虫的终止密码子还存在重配现象,其终止密码子为UAA和UAG,而UGA编码半胱氨酸或硒代半胱氨酸。这与游仆虫属的编程性移码及终止密码子重配的特点一致。将27650条基因组Contigs与38588条转录组Unigenes成功获得注释。基因功能分析显示转录本显著富集于细胞生长与死亡、膜转运、运输与细胞学过程等。将基因组与转录组随机各抽取50个基因进行PCR验证。95%的基因均验证成功。结果表明艾美游仆虫除了具有游仆虫特有的微染色体、密码子重新分配和程序性移码等基因组特征外,还具有大量“联合微染色体”,编码大量与感受外界环境变化、细胞周期与蛋白表达调控等相关的特殊蛋白质,并通过一定量的miRNA与锌指类转录因子对基因进行表达调控。

关键词：艾美游仆虫大核基因组转录组微染色体基因注释

艾美游仆虫（Euplotes amieti）大核基因组与转录组测序及结构特征分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水生生物学报 2021年

作者：何燕尹家奇生欣遵义医科大学生物化学与分子生物学教研室

为获得艾美游仆虫（Euplotes amieti）大核基因组结构特征、分析基因功能及其表达调控方式，本研究采用高通量测序技术对艾美游仆虫进行了大核基因组与转录组测序，结果显示基因组测序最终得到原始reads数据为10.92 Gb，过滤后得到50287... 详细信息

为获得艾美游仆虫（Euplotes amieti）大核基因组结构特征、分析基因功能及其表达调控方式，本研究采用高通量测序技术对艾美游仆虫进行了大核基因组与转录组测序，结果显示基因组测序最终得到原始reads数据为10.92 Gb，过滤后得到50287条Contigs。GC含量较低，为31%；其中两端同时具有端粒的微染色体数量为27542条，占54.76%，只含有一端端粒的基因数量为6118条。Contigs进行基因结构分析，96.5%的基因能够被预测出功能，最终得到27650条基因，平均外显子长度为311.69bp；内含子较短，平均长度为150 bp。转录组测序结果为76219898条，拼接后获得38588条转录组Unigenes，其平均长度为1189 bp。将转录组的38588条Unigenes比对发现有2%～3%基因发生了编程性移码，其中，绝大多数为+1PRF；除此之外，艾美游仆虫的终止密码子还存在重配现象，其终止密码子为UAA和UAG，而UGA编码半胱氨酸或硒代半胱氨酸。这与游仆虫属的编程性移码及终止密码子重配的特点一致。将27650条基因组Contigs与38588条转录组Unigenes成功获得注释。基因功能分析显示转录本显著富集于细胞生长与死亡、膜转运、运输与细胞学过程等。将基因组与转录组随机各抽取50个基因进行PCR验证。95%的基因均验证成功。结果表明艾美游仆虫除了具有游仆虫特有的微染色体、密码子重新分配和程序性移码等基因组特征外，还具有大量“联合微染色体”，编码大量与感受外界环境变化、细胞周期与蛋白表达调控等相关的特殊蛋白质，并通过一定量的miRNA与锌指类转录因子对基因进行表达调控。

关键词：艾美游仆虫大核基因组转录组微染色体基因注释

曲美替尼与GSK2126458联合用药逆转结直肠癌SW480细胞的耐药

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2019年第11期35卷 1234-1241页

作者：代洁陈俊俊杨婷张馨心杨利军杨涛山西医科大学生物化学与分子生物学教研室

近年来,肿瘤靶向药物因其特异性强与对正常细胞损伤小等特点,已成为癌症治疗的热点药物。但由肿瘤异质性导致的靶向药物的耐受现象,成为癌症治疗需要解决的难题之一。为解决单一药物的耐受现象,可以通过药物组合来达到理想的治疗效果。... 详细信息

近年来,肿瘤靶向药物因其特异性强与对正常细胞损伤小等特点,已成为癌症治疗的热点药物。但由肿瘤异质性导致的靶向药物的耐受现象,成为癌症治疗需要解决的难题之一。为解决单一药物的耐受现象,可以通过药物组合来达到理想的治疗效果。本课题以结直肠癌为研究对象,评估8种结直肠癌细胞对30种靶向药物的敏感性,并筛选可逆转耐药的药物组合,探究药物组合的作用。通过MTT实验测定细胞存活率,计算IC50值进行敏感性分析,敏感标准为IC50值≤100 nmol/L。对敏感的单药进行组合筛选,选取细胞存活率最小的组合。采用流式细胞术和Western印迹检测联合用药对细胞凋亡及MAPK、PI3K通路相关蛋白质表达水平的影响。MTT结果显示,结直肠癌SW480细胞耐受30种肿瘤靶向药物,经联合用药筛选,SW480细胞对曲美替尼与GSK2126458组合最为敏感,与对照组和单药组相比,该组合可使SW480细胞凋亡明显增加。免疫印迹结果显示,ERK、Akt和mTOR磷酸化水平降低,Cleaved PARP表达增加。上述结果表明,8种结直肠癌细胞存在不同程度耐受靶向抑制剂的现象,曲美替尼与GSK2126458联合应用可逆转结直肠癌SW480细胞的耐药现象。

关键词：曲美替尼 GSK2126458 靶向药物耐药结直肠癌凋亡

miR-145-5p靶向双特异性磷酸酶6对人子宫内膜癌增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方医科大学学报 2020年第1期40卷 61-66页

作者：门颖超张蕾艾浩锦州医科大学生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学第三医院妇科辽宁锦州121000

目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(DUSP6)对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组(未转染组)、B组(mimic NC组)、C组(mimic组)、D组(inhibitor NC... 详细信息

目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(DUSP6)对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组(未转染组)、B组(mimic NC组)、C组(mimic组)、D组(inhibitor NC组)、E组(inhibitor组),采用脂质体(Lipo 2000)细胞转染法转染。利用RT-PCR技术验证miR-145-5p的表达;过表达或抑制表达miR-145-5p对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响将运用MTT、伤口愈合、Transwell及凋亡实验检测;运用生物信息学方法预测miR-145-5p的潜在靶基因;运用RT-PCR及Western Blot技术检测细胞转染后下游靶基因DUSP6mRNA及蛋白的表达水平。结果转染后48、72、96 h,C组比B组细胞增殖能力下降,E组比D组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P学意义(P学意义(P生物信息学在线软件预测DUSP6是miR-145-5p的潜在靶基因。转染48 h后,DUSP6 mRNA在A组、B组、C组、D组、E组中的相对表达水平分别为1.00±0.09、1.09±0.08、0.47±0.04、1.03±0.05、4.62±0.26,差异有统计学意义(P学意义(P<0.05)。结论 miR-145-5p过表达后能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并且促进癌细胞凋亡,其机制可能是通过负向调节DUSP6的表达而实现。

关键词： miR-145-5p 子宫内膜癌双特异性磷酸酶6 增殖侵袭凋亡