MLCK敲除对FaDu细胞凋亡的影响

作     者：熊垒 黄建尚 周青 汪渊 左莉 Xiong Lei;Huang Jianshang;Zhou Qing;Wang Yuan;Zuo Li

作者机构：安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2023年第58卷第5期

页      面：748-752,759页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:82270589、82070548、81800464)。 

主　　题：下咽癌 肌球蛋白轻链激酶 增殖 凋亡 

摘      要：目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用RT-qPCR、Western blot检测MLCK敲除效率;流式细胞术检测MLCK敲除对细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测MLCK敲除对细胞凋亡的影响。结果DNA测序显示在sgRNA序列识别处,MLCK碱基序列发生了缺失或替换;RT-qPCR和Western blot显示MLCK敲除细胞株mRNA和蛋白质水平低于对照组(P0.0001);流式细胞术实验显示敲除MLCK对FaDu细胞的周期无明显变化,但凋亡率增加(P0.0001);Western blot检测显示,MLCK敲除组Bax/Bcl-2(P0.0001)和Cleaved Caspase-3/Caspase-3(P=0.0007)增加。结论敲除MLCK诱导细胞凋亡,但具体机制需进一步研究。