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灵芝酸A对非小细胞肺癌PC9细胞糖酵解及其关键限速酶的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 682-688页

作者：任爱华董彦伯苗润芝吕俞娇刘岩峰北华大学基础医学院解剖教研室吉林吉林132013 北华大学临床医学院外科教研室吉林吉林132013

目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(... 详细信息

目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(-1)) GAA组和高剂量(100μmol·L^(-1)) GAA组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC9细胞存活率,Transwell小室实验检测各组PC9细胞迁移细胞数,葡萄糖检测试剂盒检测各组PC9细胞葡萄糖摄取量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测各组PC9细胞中ATP水平,乳酸检测试剂盒检测各组PC9细胞中乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组PC9细胞中己糖激酶2(HK2)和M2型丙酮酸激酶(PKM2) mRNA表达水平,Westernblotting法检测各组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平。结果:MTT法,培养24、48和72 h时,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞存活率明显降低(P室实验,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05);与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中葡萄糖摄取量和乳酸水平均明显降低(P<0.05),高剂量GAA组PC9细胞中ATP水平明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:中和高剂量GAA可抑制PC9细胞增殖及迁移的生物活性,降低糖酵解作用,其作用机制可能与抑制关键限速酶HK2和PKM2的表达有关。

关键词：灵芝酸A 癌,非小细胞肺己糖激酶2 M2型丙酮酸激酶糖酵解

过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究

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西安交通大学学报(医学版) 2024年第2期45卷 250-257页

作者：田慧梅何韶衡张慧云锦州医科大学基础医学院免疫教研室锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫中心

目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis, AR)、过敏性哮喘(allergy asthma, AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达的影响。方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的100例志愿者，包括点刺实验阴性的19例健康对照(health control, HC)志愿者、点刺实验阳性的40例AR患者、26例AA患者、15例ARA患者。流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(home dust mite allergen extract, HDME)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract, ASWE)、梧桐过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract, PPE)刺激前后患者外周血B细胞中TLR9的表达；并采用野生(WT)小鼠和FcεRI基因敲除(FcεRI-KO)小鼠建立AR和AA致敏模型，检测过敏原以及FcεRI对B细胞中TLR9表达的影响。结果 AR、AA、ARA患者外周血B细胞中TLR9的表达和平均荧光强度(mean fluorescence intensity, MFI)均较HC组有所增高；过敏原激发后，AR、AA患者血液B细胞中TLR9的表达和MFI升高(P<0.05)。WT小鼠和FcεRI-KO小鼠与NS对照组相比，过敏原激发后，AR、AA小鼠外周血B细胞TLR9+高表达，但差异无统计学意义，而几乎每组MFI均升高；与NS对照组相比，过敏原激发后FcεRI基因敲除的AA小鼠肺组织中TLR9+B细胞表达差异无统计学意义，但其MFI升高。FcεRI-KO小鼠与WT小鼠相比，过敏原激发后B细胞中TLR9+MFI较低。结论 B细胞中TLR9可能参与AR、AA的发生，检测B细胞中TLR9的表达可能成为诊断AR、AA的新方向。

关键词： Toll样受体(TLR9) B淋巴细胞(B细胞) 过敏性鼻炎(AR) 过敏性哮喘(AA)

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关节镜下肩袖缝线桥缝合术后疼痛的原因分析

解剖学报 2024年第2期55卷 210-214页

作者：司丽娜罗金伟吴迪乔跃兵吕永明徐丛承德医学院人体解剖学教研室河北承德067000 承德医学院附属医院关节外科河北承德067000

目的探讨关节镜下肩袖缝线桥缝合术后患者疼痛的相关因素。方法收集112例接受关节镜下缝线桥缝合的单侧肩袖损伤患者资料,以电话随访的形式,通过数字评分法(NRS)调查患者术后3个月时疼痛情况;SPSS 23.0统计学软件录入数据并分析,采用单... 详细信息

目的探讨关节镜下肩袖缝线桥缝合术后患者疼痛的相关因素。方法收集112例接受关节镜下缝线桥缝合的单侧肩袖损伤患者资料,以电话随访的形式,通过数字评分法(NRS)调查患者术后3个月时疼痛情况;SPSS 23.0统计学软件录入数据并分析,采用单因素分析及多重线性回归分析,评价上述影响因素与术后疼痛的相关性。结果单因素分析结果显示,病程、吸烟史、患者术前美国加利福尼亚大学洛杉矶分校(UCLA)评分、Constant评分、NRS、肩袖撕裂大小、是否为全层撕裂和肌腱回缩程度8个因素可能与术后疼痛有关(P0.05)。多重线性回归分析表明,与术后疼痛相关的因素有4个,其相关程度依次是术前NRS、术前UCLA评分、撕裂大小和吸烟史。结论影响关节镜下肩袖缝线桥缝合术术后疼痛的复杂且多样,进行术后疼痛的原因分析,可有效减轻患者术后的疼痛,有助于促进肩着节功能恢复。

关键词：肩袖损伤术后疼痛关节镜数字评分法人

基于微课的案例反向教学模式在神经病学教学中的应用

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沈阳医学院学报 2024年第1期26卷 95-98,103页

作者：骆嵩杨丽娟蚌埠医学院第一附属医院神经内科教研室安徽蚌埠233004 蚌埠医学院第一附属医院儿科教研室安徽蚌埠233004

目的:探讨基于微课的案例反向教学模式在神经病学教学中的优势。方法:选取蚌埠医学院2017级精神医学专业60名本科生为研究对象,根据随机数字表法进行分组,分为对照组和试验组,每组30名。对照组采用传统的教学模式进行神经病学授课,试验... 详细信息

目的:探讨基于微课的案例反向教学模式在神经病学教学中的优势。方法:选取蚌埠医学院2017级精神医学专业60名本科生为研究对象,根据随机数字表法进行分组,分为对照组和试验组,每组30名。对照组采用传统的教学模式进行神经病学授课,试验组采用基于微课的案例反向教学模式,在课程结束后,通过对2组学生进行神经病学专业知识、病例分析能力测评,由学生对授课模式满意度进行问卷评分进行比较。结果:试验组学生的神经病学专业知识、病例分析能力考核成绩及总分均优于对照组学生(P<0.05);试验组学生对授课模式满意度评分优于对照组学生(P<0.05)。结论:基于微课的案例反向教学模式在神经病学教学中可以促进学生专业知识学习掌握和教学满意度提高,具有推广价值。

关键词：微课案例反向教学模式神经病学

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重组人生长激素治疗特发性矮小症患儿的疗效

中华妇幼临床医学杂志（电子版） 2024年第3期20卷 346-352页

作者：李倩刘倩朱海玲倪娟任宝芹刘长云潍坊医学院临床医学院儿科教研室潍坊261000 潍坊医学院附属医院查体中心潍坊261000 潍坊医学院附属医院儿科潍坊261000

目的探讨重组人生长激素(rhGH)治疗特发性矮小症(ISS)患儿的疗效。方法选择2020年10月至2022年12月于潍坊医学院附属医院儿科门诊就诊的84例ISS患儿为研究对象。首先根据是否采取rhGH治疗,将其分为治疗组(n=45,注射rhGH者)和对照组(n=39... 详细信息

目的探讨重组人生长激素(rhGH)治疗特发性矮小症(ISS)患儿的疗效。方法选择2020年10月至2022年12月于潍坊医学院附属医院儿科门诊就诊的84例ISS患儿为研究对象。首先根据是否采取rhGH治疗,将其分为治疗组(n=45,注射rhGH者)和对照组(n=39,未注射rhGH者)。其次,再根据患儿年龄,将治疗组分为治疗亚组1(n=21,年龄医学院附属医院伦理委员会批准(审批文号:wyf-2022-ky-217),所有患儿及家属对本研究充分知晓,并签署知情同意书。结果①治疗前,治疗组和对照组患儿年龄、身高、GV、骨龄及IGF-1、25(OH)D及FBG水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②治疗2年后,治疗组和对照组患儿身高、GV、IGF-1和25(OH)D水平比较,差异均有统计学意义(t=3.80、17.27、6.34、2.34,P=0.006、0.008、0.05)。③治疗2年后,治疗亚组1、2患儿的身高和年GV分别优于对照1、2组,并且差异均有统计学意义(t=5.00、64.35,P=0.007、0.009)。此外,治疗亚组1患儿的年GV大于治疗亚组2,并且差异有统计学意义(t=35.60,P=0.006);而对照亚组1、2患儿的年GV比较,差异无统计学意义(P>0.05)。④治疗1年后,4个亚组患儿GV比较,治疗亚组2于治疗后7~12个月的GV明显高于0~6个月,组内比较,差异有统计学意义(t=0.37,P=0.049)。⑤研究组与对照组患儿治疗过程中出现关节疼痛、肝肾功能异常、甲状腺功能异常、FBG升高等总发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论rhGH治疗ISS患儿,可显著提高其身高和GV,尤其在<8岁儿童中效果更佳,并且治疗过程中未发现严重不良反应。

关键词：特发性矮小症重组人生长激素骨龄血糖药物相关性副作用和不良反应儿童

辽宁省三家医院儿童肺炎支原体感染临床表现及流行病学特征

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中华医院感染学杂志 2024年 3611-3617页

作者：王菲程琪景淑军李静周宪东尚云晓陈宁张晗中国医科大学附属盛京医院儿科大连市妇女儿童医疗中心集团儿科锦州医学院附属第一医院儿科

目的调查中国辽宁省部分地区小儿内科住院患儿中肺炎支原体(MP)感染情况,并分析重症肺炎支原体肺炎(SMPP)住院患儿的临床特征及支气管镜下表现。方法自2017年1月1日—2023年12月31日,辽宁省三家三级医院,共有340 681例住院患儿被纳入... 详细信息

目的调查中国辽宁省部分地区小儿内科住院患儿中肺炎支原体(MP)感染情况,并分析重症肺炎支原体肺炎(SMPP)住院患儿的临床特征及支气管镜下表现。方法自2017年1月1日—2023年12月31日,辽宁省三家三级医院,共有340 681例住院患儿被纳入本研究,按月分析住院患儿MP感染阳性率的变化,并探讨MP感染患儿年龄分布、呼吸道疾病谱变化和SMPP患儿的临床及镜下表现。结果住院患儿MP感染占比为27.25%,发病率较高的季节为秋冬季,从2023年8月开始,住院患儿MP感染率急剧上升;MP感染的住院患儿中,>1～4岁(46.34%)及>4～7岁患儿(22.97%)居多;支气管肺炎是MP感染引起的呼吸道疾病的主要表现,占55.74%;SMPP占比为23.12%,支气管镜下黏膜多表现为黏膜充血(63.91%)和黏膜皱襞(28.84%),分泌物表现主要为絮状痰(51.26%)和黏液栓阻塞(24.63%),但值得注意的是,2023年支气管镜下出现塑型性痰栓的占比明显升高(8.61%)。结论中国辽宁省部分地区MP为儿童住院的主要感染病原,多见于>1-7岁儿童,秋冬季节高发。在2023年新冠疫情结束后,MP感染呈延迟暴发趋势,重症患儿及并发症数量明显增加,值得重视。

关键词：肺炎支原体重症肺炎支原体肺炎支气管镜表现年龄分布疾病谱辽宁省

发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白的表达和定位及宿主互作蛋白的筛选和分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1286-1296页

作者：骆丽可程子文程廓李永刚王大为杨宝玲锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学畜牧兽医学院基础兽医学教研室辽宁锦州121000

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pS... 详细信息

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pSFTSV-NSs-Flag (实验组)和Flag-CMV-3 (阴性组)分别转染进人胚胎肾293T细胞中,同时设置空白组(不进行任何处理)。收集各组细胞裂解液,采用间接免疫荧光和Western blotting法验证SFTSV NSs在宿主细胞中的表达及定位。蛋白裂解液经protein A/G处理,采用免疫沉淀法富集与NSs结合的宿主蛋白,通过银染和考马斯亮蓝染色初步分析捕获的互作蛋白,观察各组蛋白差异条带。采用液相色谱和串联质谱技术得到蛋白质的序列信息,保留可信蛋白基于UniProt数据库检索,对鉴定到的蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析、蛋白结构域和功能位点数据库(IPR)、真核生物同源蛋白簇(KOGs)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、亚细胞定位和转录因子(TF)功能注释,确定互作蛋白的亚细胞结构、基因功能及参与的生物过程。结果:SFTSV NSs在相对分子质量33 000处表达单一特异性条带,免疫荧光检测其定位于细胞质中,且聚集呈砂粒体包涵体样。银染和考马斯亮蓝染色,实验组和阴性组均存在显著差异条带。质谱筛选出46种潜在互作蛋白;GO功能富集分析、KOGs功能注释和KEGG信号通路富集分析,与病毒翻译、细胞代谢及蛋白质运输相关的生物途径富集到较多数目的蛋白,注释中有8种蛋白具有中间丝蛋白结构域。亚细胞定位所占百分率最高的是细胞质蛋白;与NSs定位场所一致。TF功能注释,有1种蛋白来自NF-Y家族。结论:互作蛋白在协助蛋白质正确折叠、参与核糖体翻译和构成细胞骨架等进程中发挥作用,可能参与了抗病毒复制,可作为候选蛋白进一步研究SFTSV的复制机制。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白蛋白-蛋白互相作用免疫沉淀质谱

单核细胞趋化蛋白1对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 666-675页

作者：王远王志娟张明姝王艺慧张晴叶丽平锦州医科大学基础医学院病理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院病理生理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学生物人类学研究所辽宁锦州121001

目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用免疫组织化学法检测80例非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁正常肺组织中MCP-1蛋白表达情况。体外培养人肺癌A549细胞,MCP-1-小干扰RNA(siRNA)实... 详细信息

目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用免疫组织化学法检测80例非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁正常肺组织中MCP-1蛋白表达情况。体外培养人肺癌A549细胞,MCP-1-小干扰RNA(siRNA)实验分为空白组、阴性对照组(si-NC组)、MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组;MCP-1过表达实验分为对照组、空载对照组(OE-NC组,转染MCP-1过表达空载质粒)、过表达MCP-1组(OE-MCP-1组,转染MCP-1过表达质粒)、过表达MCP-1+细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路抑制剂PD98059组(OE-MCP-1+PD98059组,共转染MCP-1过表达质粒和PD98059)和PD98059组(转染PD98059)。分别将MCP-1-siRNA和质粒转染至肺癌A549细胞,Western blotting法验证各组A549细胞转染效率。细胞划痕实验和Transwell小室实验观察各组A549细胞迁移率和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组A549细胞中磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,NSCLC组织中MCP-1蛋白阳性表达率明显升高(P室实验,与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-MCP-1组侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与OE-MCP-1组比较,OE-MCP-1+PD98059组侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与OE-MCP-1+PD98059组比较,PD98059组侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Western blotting法,与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组A549细胞中p-ERK、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平均明显升高(P<0.01);与OE-NC组比较,OE-MCP-1组A549细胞中p-ERK、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与OE-MCP-1组比较,OE-MCP-1+PD98059组A549细胞中p-ERK、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与OE-MCP-1+PD98059组比较,PD98059组A549细胞中p-ERK、 Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:MCP-1蛋白可上调肺癌A549细胞中EMT相关蛋白表达,促进肺癌A549细胞的迁移和侵袭,其作用机制与激活ERK信号通路有关。

关键词：单核细胞趋化蛋白1 细胞外信号调节激酶癌,非小细胞肺细胞侵袭细胞迁移

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基于AKT/mTOR通路探讨齐墩果酸调控自噬对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用

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中药药理与临床 2024年第5期40卷 57-62页

作者：赵欣敏卢金莹王高赵艳杨菁高秀秋锦州医科大学附属第二医院锦州121001 锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室锦州121001

目的:探讨齐墩果酸对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制。方法:培养软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法及COLⅡ免疫荧光染色对软骨细胞进行纯度鉴定。将合格细胞随机分为空白对照组、模型对照组及齐墩果酸0.125、0.25、... 详细信息

目的:探讨齐墩果酸对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制。方法:培养软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法及COLⅡ免疫荧光染色对软骨细胞进行纯度鉴定。将合格细胞随机分为空白对照组、模型对照组及齐墩果酸0.125、0.25、0.5μmol/L组。空白对照组用常规培养液培养;造模组用含10 ng/mL IL-1β常规培养液培养24 h建立损伤模型;齐墩果酸各浓度组以常规培养液预处理2 h后,再用IL-1β继续培养24 h。采用MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)含量;Western blot法检测细胞中MMP-13、COLⅡ、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和β-actin的蛋白表达;免疫荧光法检测LC3在软骨细胞中的表达;加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)探究自噬在其中作用。结果:与空白对照组相比,模型对照组细胞存活率降低至50.95%,凋亡率、ROS水平、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的比值均显著增加(P<0.01),COLⅡ的表达及LC3 II/I的比值均显著降低(P<0.01);与模型对照组相比,齐墩果酸0.125、0.25、0.5μmol/L组存活率显著升高,凋亡率显著降低,ROS水平、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的比值均显著降低,COLⅡ表达及LC3 II/I的比值均显著升高(P<0.01),免疫荧光可见LC3荧光强度随着齐墩果酸浓度增加逐渐增强;与齐墩果酸组相比,3-MA+齐墩果酸组细胞存活率降低至47.03%,COL II表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值均降低,MMP-13、P62的表达均上调(P<0.01)。结论:齐墩果酸对IL-1β引起的软骨细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抑制AKT/mTOR信号通路及改善自噬有关。

关键词：齐墩果酸软骨细胞白细胞介素-1β 自噬 AKT/mTOR信号通路