单核细胞趋化蛋白1对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制

作     者：王远 王志娟 张明姝 王艺慧 张晴 叶丽平 WANG Yuan;WANG Zhijuan;ZHANG Mingshu;WANG Yihui;ZHANG Qing;YE Liping

作者机构：锦州医科大学基础医学院病理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院病理生理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学生物人类学研究所辽宁锦州121001 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2024年第50卷第3期

页      面：666-675页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(82103624) 吴阶平医学基金会研究基金课题项目(320.6750.2020-06-68) 

主　　题：单核细胞趋化蛋白1 细胞外信号调节激酶 癌,非小细胞肺 细胞侵袭 细胞迁移 

摘      要：目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用免疫组织化学法检测80例非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁正常肺组织中MCP-1蛋白表达情况。体外培养人肺癌A549细胞,MCP-1-小干扰RNA(siRNA)实验分为空白组、阴性对照组(si-NC组)、MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组;MCP-1过表达实验分为对照组、空载对照组(OE-NC组,转染MCP-1过表达空载质粒)、过表达MCP-1组(OE-MCP-1组,转染MCP-1过表达质粒)、过表达MCP-1+细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路抑制剂PD98059组(OE-MCP-1+PD98059组,共转染MCP-1过表达质粒和PD98059)和PD98059组(转染PD98059)。分别将MCP-1-siRNA和质粒转染至肺癌A549细胞,Western blotting法验证各组A549细胞转染效率。细胞划痕实验和Transwell小室实验观察各组A549细胞迁移率和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组A549细胞中磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,NSCLC组织中MCP-1蛋白阳性表达率明显升高(P0.05);NSCLC组织中MCP-1蛋白表达水平与TNM分期和淋巴结转移有关联(P0.05)。与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组A549细胞中MCP-1蛋白表达水平均明显降低(P0.01);与对照组和OE-NC组比较,OE-MCP-1组A549细胞中MCP-1蛋白表达水平明显升高(P0.01)。细胞划痕实验,与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组细胞迁移率均明显降低(P0.01);与OE-NC组比较,OE-MCP-1组细胞迁移率明显升高(P0.01);与OE-MCP-1组比较,OE-MCP-1+PD98059组细胞迁移率明显降低(P0.01);与OE-MCP-1+PD98059组比较,PD98059组细胞迁移率明显降低(P0.01)。Transwell小室实验,与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组侵袭细胞数明显减少(P0.01);与OE-NC组比较,OE-MCP-1组侵袭细胞数明显增加(P0.01);与OE-MCP-1组比较,OE-MCP-1+PD98059组侵袭细胞数明显减少(P0.01);与OE-MCP-1+PD98059组比较,PD98059组侵袭细胞数明显减少(P0.01)。Western blotting法,与si-NC组比较,MCP-1-siRNA-1组和MCP-1-siRNA-2组A549细胞中p-ERK、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平均明显降低(P0.05或P0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平均明显升高(P0.01);与OE-NC组比较,OE-MCP-1组A549细胞中p-ERK、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P0.01),E-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P0.01);与OE-MCP-1组比较,OE-MCP-1+PD98059组A549细胞中p-ERK、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P0.01),E-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P0.05);与OE-MCP-1+PD98059组比较,PD98059组A549细胞中p-ERK、 Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P0.05或P0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.01)。结论:MCP-1蛋白可上调肺癌A549细胞中EMT相关蛋白表达,促进肺癌A549细胞的迁移和侵袭,其作用机制与激活ERK信号通路有关。