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三种诱导因子在骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化中的作用

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中华烧伤杂志 2019年第2期35卷 125-133页

作者：王远航薛斌重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科 400016

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在骨髓间充质干细胞(BMSC)向淋巴管内皮细胞(LEC)分化中的作用. 方法取第3~5代大鼠BMSC进行实验.(1)取大鼠BMSC,采用随机数字表法(分组方法下... 详细信息

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在骨髓间充质干细胞(BMSC)向淋巴管内皮细胞(LEC)分化中的作用. 方法取第3~5代大鼠BMSC进行实验.(1)取大鼠BMSC,采用随机数字表法(分组方法下同)分为阴性对照组、CD90组、CD44组、CD34组,每组样本数为3,阴性对照组细胞加入磷酸盐缓冲液5μL,余3组细胞分别加入相应抗体5 μL,流式细胞仪检测细胞表面抗原阳性情况.(2)取3个批次大鼠BMSC,均分为空白对照组、VEGF-C组、HGF组、bFGF组、VEGF-C+HGF组、VEGF-C+bFGF组、HGF+bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组,每组样本数为3.空白对照组细胞加入2 mL完全培养基,VEGF-C组细胞中加入2 mL完全培养基和10 μg/mL VEGF-C 10 μL,HGF组细胞加入2 mL完全培养基和10 μg/mL HGF 16 μL,bFGF组细胞加入2 mL完全培养基和1μg/mL bFGF 20 μL,VEGF-C+ HGF组、VEGF-C +bFGF组、HGF+ bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞加入2 mL完全培养基及同前相应浓度和量的诱导因子.培养10d,倒置相差显微镜下观察细胞形态,蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法分别检测淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、VEGF受体3(VEGFR3)及整合素α9蛋白和mRNA表达.(3)取大鼠BMSC,分为空白对照组、HGF+ VEGF-C+ bFGF组、bFGF+ VEGF-C+HGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组,每组样本数为3.空白对照组细胞加入2 mL完全培养基;HGF+VEGF-C +bFGF组细胞加入2 mL完全培养基、10 μg/mL HGF 16 μL、10 μg/mL VEGF-C 10μL,6h后加入1 μg/mL bFGF 20 μL.bFGF+VEGF-C+HGF组细胞加入2 mL完全培养基以及1μg/mLbFGF 20 μL和10 μg/mL VEGF-C 10 μL,6h后加入10 μg/mL HGF 16 μL;VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞同时加入2 mL完全培养基及同前浓度及量的3种诱导因子.另取2个批次大鼠BMSC,同前进行分组,除将HGF+ VEGF-C+ bFGF组、bFGF+ VEGF-C+ HGF组6h的间隔时间调整为12、24 h外,其余处理方法同前.培养10 d,蛋白质印迹法检测LYVE-1、VEGFR3及整合素α9的蛋白表达.对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验、Bonferroni校正. 结果 (1)阴性对照组、CD90组、CD44组、CD34组细胞表面抗原阳性表达率分别为0.39%、99.84%、99.90%、0.57%.(2)培养10 d,空白对照组、HGF组、bFGF组、HGF+ bFGF组细胞呈长梭形,其余各组细胞呈多边形.(3)培养10d,空白对照组、HGF组、bFGF组、HGF+ bFGF组细胞无LYVE-1、VEGFR3和整合素α9蛋白表达.培养10 d,VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞LYVE-1、VEGFR3和整合素α9的蛋白表达量均明显高于VEGF-C组(t=24.21、11.04、15.43,P<0.01)、VEGF-C+ HGF组(t=10.81、9.93、10.20,P <0.01)、VEGF-C+ bFGF组(t=11.67、6.32、19.00,P<0.01). VEGF-C +HGF组及VEGF-C+bFGF组细胞LYVE-1的蛋白表达量明显高于VEGF-C组(t=8.69、15.20,P<0.01);VEGF-C+bFGF组细胞VEGFR3的蛋白表达量明显高于VEGF-C组及VEGF-C+HGF组(t=8.67、7.21,P<0.01);VEGF-C+ HGF组细胞整合素α9的蛋白表达量明显高于VEGF-C组及VEGF-C+ bFGF组(t=8.80、8.83,P<0.01).(4)培养10d,空白对照组、HGF组、bFGF组、HGF+ bFGF组细胞均无LYVE-1、VEGFR3和整合素α9 mRNA表达.培养10d,VEGF-C组细胞LYVE-1、VEGFR3的mRNA表达量明显低于VEGF-C+ bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组(tLYVE-1=6.22、18.01,tVEGFR3=8.49、15.34,P<0.01),整合素α9的mRNA表达量明显低于VEGF-C+ HGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组(t=13.24、9.65,P<0.01).VEGF-C+HGF+bFGF组细胞LYVE-1、VEGFR3和整合素α9的mRNA表达量明显高于VEGF-C+ HG

关键词：间充质干细胞血管内皮生长因子C 肝细胞生长因子细胞分化碱性成纤维细胞生长因子淋巴管内皮细胞

欧亚旋覆花总黄酮对衰老人皮肤成纤维细胞lncRNA TERRA的影响及其机制

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解放军医学杂志 2020年第11期45卷 1117-1124页

作者：周茂强况杰胡翰林果磊重庆医科大学附属第一医院整形烧伤外科重庆400016

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老人皮肤成纤维细胞lncRNA TERRA的影响及其机制。方法采用高效液相色谱法(HPLC)分析IBFTF的成分及含量。将人皮肤成纤维细胞分为对照组、IBFTF组(使用IBFTF处理)、衰老模型组[使用D-半乳糖(D-gal)... 详细信息

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老人皮肤成纤维细胞lncRNA TERRA的影响及其机制。方法采用高效液相色谱法(HPLC)分析IBFTF的成分及含量。将人皮肤成纤维细胞分为对照组、IBFTF组(使用IBFTF处理)、衰老模型组[使用D-半乳糖(D-gal)诱导建立衰老模型]与衰老模型+IBFTF组(衰老模型建立后使用IBFTF处理)。采用CCK-8法检测各组细胞存活率;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察细胞蓝染情况,计算阳性细胞比例;酶标仪测定各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等氧化应激指标水平;qRT-PCR检测各组lncRNA TERRA、Telomere、人端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA的表达;Western blotting检测各组hTERT及衰老相关蛋白p53、p16的表达。结果IBFTF中槲皮素、异鼠李素、山奈酚和芦丁的含量分别为6.447、2.044、1.272、0.781 mg/g。CCK-8法及SA-β-Gal染色结果显示,IBFTF可增高衰老模型组细胞存活率,降低SA-β-Gal阳性细胞比例(P<0.05)。酶标仪检测结果显示,IBFTF可增加衰老细胞SOD、GSH-Px的活性,降低衰老细胞MDA含量(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,IBFTF可降低衰老细胞lncRNA TERRA的表达水平,增高hTERT mRNA的表达水平,延长端粒长度(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与衰老模型组比较,衰老模型+IBFTF组p53、p16蛋白表达水平降低,hTERT蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论IBFTF可降低D-gal诱导的衰老人皮肤成纤维细胞lncRNA TERRA的表达,发挥抗衰老作用,其机制可能与恢复端粒酶活性、延长端粒长度有关。

关键词：欧亚旋覆花总黄酮 lncRNA TERRA 衰老端粒

高糖环境下抑瘤素对人皮肤成纤维细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

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第三军医大学学报 2021年第10期43卷 955-963页

作者：刘露露符学铭薛碧宇薛斌重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科重庆400016

目的探讨高糖环境下抑瘤素(oncostatin M,OSM)对人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)增殖和细胞外基质分泌的影响及其可能的作用机制。方法(1)高糖模型建立:人皮肤成纤维细胞分为5组,分别给予5、10、15、20、25 mmol/L葡... 详细信息

目的探讨高糖环境下抑瘤素(oncostatin M,OSM)对人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)增殖和细胞外基质分泌的影响及其可能的作用机制。方法(1)高糖模型建立:人皮肤成纤维细胞分为5组,分别给予5、10、15、20、25 mmol/L葡萄糖处理;采用MTT检测高糖培养24、36、48 h各组细胞的增殖活力,Western blot检测对照组(5 mmol/L葡萄糖)和高糖组(20 mmol/L葡萄糖)细胞培养24、36、48 h后ERK、p-ERK和CyclinD1蛋白表达。(2)探讨OSM对高糖模型作用的最佳浓度:细胞分为5组,对照组给予20 mmol/L葡萄糖处理,其余各组分别给予20 mmol/L葡萄糖+25、50、100、200 ng/mL OSM处理;采用MTT检测各组细胞培养24、36、48 h后的增殖活力;Western blot检测各组细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin蛋白表达。(3)探讨OSM对高糖模型的作用的机制:将细胞分为对照组、高糖组、高糖+OSM组、高糖+OSM+抑制剂PD98059组。流式细胞仪测定各组细胞周期,Western blot检测ERK、p-ERK、CyclinD1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin等相关因子的蛋白表达,q-PCR验证各组细胞ERK1/2、CyclinD1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin基因相对表达量的差异。结果与对照组比较,经20 mmol/L葡萄糖处理后,HDFs的增殖活力显著降低(P一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。当ERK通路特异性小分子抑制剂PD98059阻断ERK信号通路后,上述效应显著减弱(P<0.05)。结论OSM可能通过ERK信号通路逆转高糖对HDFs增殖和细胞外基质分泌的抑制作用。

关键词：抑瘤素人皮肤成纤维细胞高糖细胞增殖 ERK 细胞外基质

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皮肤鳞状细胞癌治疗研究进展

中国麻风皮肤病杂志 2023年第12期39卷 929-935页

作者：覃鑫瑞张顺薛斌重庆医科大学附属第一医院烧伤整形科重庆400016

皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)是中老年人常见的皮肤肿瘤。手术目前依然是cSCC首选治疗方法,但考虑到解剖位置、病变数量和手术切除后复发速度,手术并不适合所有cSCC患者。根据具体情况应用其他治疗方法,如... 详细信息

皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)是中老年人常见的皮肤肿瘤。手术目前依然是cSCC首选治疗方法,但考虑到解剖位置、病变数量和手术切除后复发速度,手术并不适合所有cSCC患者。根据具体情况应用其他治疗方法,如光动力、冷冻、放射治疗、局部外用药物及靶向药物等,实现个体化治疗。本文就皮肤鳞状细胞癌治疗研究进展进行综述。

关键词：皮肤鳞状细胞癌治疗

重庆某三甲医院门诊健康汉族女性外眼形态特征衰老变化的测量与分析

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中华整形外科杂志 2022年第9期38卷 998-1004页

作者：杨娥张恒术重庆医科大学附属第一医院整形外科重庆400016

目的探索重庆某三甲医院门诊健康汉族女性外眼形态特征衰老变化规律,为重庆地区汉族女性眼周年轻化治疗提供数据参考。方法采用横断面研究方法。收集2021年3月至7月于重庆医科大学附属第一医院门诊进行健康体检及整形美容咨询的健康汉... 详细信息

目的探索重庆某三甲医院门诊健康汉族女性外眼形态特征衰老变化规律,为重庆地区汉族女性眼周年轻化治疗提供数据参考。方法采用横断面研究方法。收集2021年3月至7月于重庆医科大学附属第一医院门诊进行健康体检及整形美容咨询的健康汉族女性眼部清晰正面照片。按年龄段分层(20~29岁、30~39岁、40~49岁、50~59岁、≥60岁),进行照片编号,采用随机数字表法各年龄段抽取相同数量的照片。以瞳孔为O点构建坐标轴,双侧瞳孔连线为x轴,过瞳孔中点且垂直于x轴的直线为y轴。测量内眦点(A)、下泪点(B)、y轴与下睑缘交点(C)、下睑缘最低点(D)、外眦点(E)、上睑缘最高点(F)、y轴与上睑缘交点(G)的坐标位置。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,呈正态分布的计量资料以x±s表示,不同年龄段间各指标比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。结果共测量500名重庆地区健康汉族女性,每个年龄段各100名。测量结果显示,随着年龄的增加,A(x)值逐渐增大,A(y)值逐渐减小,各年龄组间差异有统计学意义(F=37.70、7.97,均P重庆某三甲医院门诊健康汉族女性在衰老过程中外眼形态特征呈现规律性的变化,整体表现为眼球暴露度缩小,内眦退缩,内、外眦向鼻侧向下移位,外眼形态轮廓由圆润逐渐转向细长外观。

关键词：衰老健康汉族女性外眼形态坐标

肠瘘继发坏死性筋膜炎病例的临床资料分析及死亡危险因素筛查

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中华烧伤与创面修复杂志 2024年第2期40卷 141-150页

作者：赵陈雨瑶张玉珅杨占杰王明青薛文君霍然赵冉山东第一医科大学附属省立医院烧伤整形外科济南250021

目的分析肠瘘继发坏死性筋膜炎(NF)病例的临床资料,并筛查这些病例的死亡危险因素。方法该研究为回顾性观察性研究。检索2000年1月—2023年10月入住山东第一医科大学附属省立医院(以下简称本单位)且符合入选标准的所有肠瘘继发NF病例的... 详细信息

目的分析肠瘘继发坏死性筋膜炎(NF)病例的临床资料,并筛查这些病例的死亡危险因素。方法该研究为回顾性观察性研究。检索2000年1月—2023年10月入住山东第一医科大学附属省立医院(以下简称本单位)且符合入选标准的所有肠瘘继发NF病例的资料,在PubMed、Web of Science、Scopus、中国知网、中华医学期刊网数据库内检索建库至2023年10月符合入选标准的所有肠瘘继发NF病例的资料并进行筛检。按照临床结局,将有效病例纳入存活组(男47例、女24例)和死亡组(男16例、女7例)并计算病死率。对比分析2组病例的临床资料,包括年龄、基础疾病(与NF最相关的病种)、就诊前症状持续时间、白细胞计数、NF原因、腹膜炎体征、NF累及范围、肠道处理措施和创面处理措施,筛选94例肠瘘继发NF患者死亡的危险因素。结果共纳入有效病例为94例,包括文献报告90例、本单位收治病例4例,病死率为24.5%(23/94)。单因素分析结果显示,2组患者年龄、基础疾病、就诊前症状持续时间、白细胞计数、NF原因、腹膜炎体征和NF累及范围比较,差异均无统计学意义(P>0.05);2组患者肠道处理措施和创面处理措施比较,差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为17.97、8.33,P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肠道处理措施和创面处理措施均是94例肠瘘继发NF患者死亡的独立危险因素,其中Ⅰ期造瘘+后期重建和负压治疗均具有更高的保护效应(比值比分别为0.05、0.27,95%置信区间为0.01~0.33、0.08~0.88,P<0.05)。结论肠瘘继发NF患者的死亡风险高,在综合治疗的基础上,行积极的肠道和创面处理或许是避免患者死亡的关键,其中Ⅰ期造瘘+后期重建和负压治疗具有更高的保护效应。

关键词：筋膜炎,坏死性 Fournier坏疽肠瘘肠穿孔

富血小板血浆对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响

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中华烧伤杂志 2019年第1期35卷 48-53页

作者：田新立江波颜洪西南医科大学附属第一医院整形烧伤外科泸州646000

目的观察富血小板血浆(PRP)对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响。方法取16只鼠龄6~8周雄性SD大鼠(下同)全血,每只9~10mL,采用改良APPLE法制备PRP;全自动血液细胞分析仪对全血及PRP进行血小板计数,检测PRP制作成功。另取32只大鼠,按随机... 详细信息

目的观察富血小板血浆(PRP)对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响。方法取16只鼠龄6~8周雄性SD大鼠(下同)全血,每只9~10mL,采用改良APPLE法制备PRP;全自动血液细胞分析仪对全血及PRP进行血小板计数,检测PRP制作成功。另取32只大鼠,按随机数字表法分为PRP组和对照组,每组16只。于每只大鼠背部制成1个矩形超长随意皮瓣并原位回植,皮瓣面积为8cm×2cm。在皮瓣两侧分别设计等距的3点,PRP组大鼠从每个注射点真皮及皮下注射0.1mLPRP,对照组大鼠注射同等体积的生理盐水。术后7d,观察大鼠皮瓣成活情况并计算皮瓣成活率。术后7d,每组处死8只大鼠,取皮瓣近、中、远端组织,苏木精-伊红染色观察皮瓣组织学变化。取术后24h(每组处死8只大鼠)、7d2组大鼠距蒂部3~4cm处皮瓣组织,实时荧光定量反转录PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子AA(PDGF-AA)和PDGF-BBmRNA表达量,硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。对数据行t检验。结果(1)术后7d,PRP组大鼠皮瓣较干燥,未出现脓性分泌物,皮瓣远端出现痂壳附着,痂壳自然脱落后露出色泽淡红愈合皮肤;对照大鼠皮瓣可见大量炎性渗出物,皮瓣远端1/2~2/3发生坏死且形成痂壳,痂壳不易剥脱。PRP组大鼠皮瓣成活率为(67±6)%,明显高于对照组的(52±10)%,t=1.94,P一氧化氮含量为(5.0±0.9)μmol/g,明显高于对照组的(3.4±0.9)μmol/g(t=19.14,P一氧化氮含量为(3.3±0.8)μmol/g,与对照组大鼠的(3.0±0.6)μmol/g相近(t=2.93,P>0.05)。结论PRP能改善大鼠背部超长随意皮瓣的成活率,可能与PRP可通过调节血管生成相关因子,提高一氧化氮含量,抑制细胞过度凋亡,从而减轻缺血再灌注损伤,改善微循环障碍有关。

关键词：富血小板血浆外科皮瓣一氧化氮生长因子

欧亚旋覆花总黄酮通过抗氧化作用降低衰老大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2017年第5期33卷 649-655页

作者：龙媛媛陈慧刘露果磊重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科重庆400016

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的改善效果及其机制。方法用D-半乳糖(D-galactose)诱导大鼠BMSC建立衰老细胞模型,采用(12.5、25、50)μg/m L IBFTF处理BMSC。CCK-8法检测细胞增殖,试剂盒测定过氧化... 详细信息

目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(IBFTF)对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的改善效果及其机制。方法用D-半乳糖(D-galactose)诱导大鼠BMSC建立衰老细胞模型,采用(12.5、25、50)μg/m L IBFTF处理BMSC。CCK-8法检测细胞增殖,试剂盒测定过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测BAX、Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平。结果衰老组细胞的增殖率、SOD和CAT活性较对照组明显降低,而不同剂量的IBFTF促进D-Gal诱导的衰老细胞的增殖、增加SOD和CAT活性。衰老组的凋亡细胞比例、ROS含量、MDA水平、BAX/Bcl-2比值和c-caspase-3的蛋白表达量增加,而用不同浓度IBFTF治疗可显著降低衰老大鼠BMSC的凋亡、ROS的生成、MDA水平、BAX/Bcl2比值和c-caspase-3的蛋白水平。结论 IBFTF通过增强抗氧化作用减少衰老大鼠BMSC的凋亡。

关键词：欧亚旋覆花总黄酮骨髓间充质干细胞衰老氧化应激凋亡

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微针在美容整形外科中的应用进展

中华内分泌外科杂志 2021年第6期15卷 669-671页

作者：胡翰林果磊重庆医科大学附属第一医院整形烧伤外科 400016

本文就微针的概念、分类及其在美容领域的应用进行了介绍,总结分析了微针在促进皮片及皮瓣成活、瘢痕修复、面部年轻化、局部麻醉、脱发治疗、皮肤松弛、痤疮治疗、减轻色沉等方面的应用现状,并展望了微针在整形外科中应用的美好前景。

关键词：微针美容整形外科