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一种多重修饰血紫蛋白纳米氧载体的构建及体外性能检测

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中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4740-4747页

作者：黄志华赵会民苏春元杨康广西医科大学第二附属医院急诊科广西壮族自治区南宁市530007 广西医科大学第二附属医院创伤中心广西壮族自治区南宁市530007 广西地中海贫血防治重点实验室广西壮族自治区南宁市530007 广西重点急危重症医学实验室广西壮族自治区南宁市530007

背景:血紫蛋白分子稳定性及生物相容性优于人和哺乳动物血红蛋白,经过修饰可能成为更加安全长效的红细胞代用品。目的:制备多重修饰血紫蛋白纳米微粒,进行理化性质表征及体外性能测试。方法:以切向流超滤法分离纯化方格星虫血紫蛋白,使... 详细信息

背景:血紫蛋白分子稳定性及生物相容性优于人和哺乳动物血红蛋白,经过修饰可能成为更加安全长效的红细胞代用品。目的:制备多重修饰血紫蛋白纳米微粒,进行理化性质表征及体外性能测试。方法:以切向流超滤法分离纯化方格星虫血紫蛋白,使用京尼平完成分子内交联,然后利用多巴胺完成纳米粒子封装,再用聚乙二醇完成钝化,获得多重修饰血紫蛋白纳米粒,表征该纳米粒的理化性质。将不同质量浓度(0,0.25,0.5,1.0,2.0 mg/mL)的血紫蛋白纳米粒、血紫蛋白、血红蛋白氧载体HBOC-201分别与巨噬细胞共同孵育6,24 h,与血管内皮细胞共同孵育24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA法检测血管内皮细胞培养液中一氧化氮及血管细胞黏附因子1水平。结果与结论:(1)血紫蛋白纳米粒电镜下呈现椭球形,有致密外膜,内部质地较为均匀,粒径为(150.12±1.67) nm,分散指数为0.21±0.03,Zeta电位为(-24.54±2.61) mV,半饱和氧分压为(0.97±0.15) kPa,Hill系数为1.49±0.16。(2)孵育6 h,在≤1.0 mg/mL质量浓度范围内,血紫蛋白纳米粒组、血紫蛋白组、HBOC-201组巨噬细胞存活率均在85%以上;在2.0 mg/mL质量浓度下,仅血紫蛋白纳米粒组巨噬细胞存活率在80%以上。孵育24 h,3组巨噬细胞存活率均低于80%,其中血紫蛋白纳米粒组巨噬细胞存活率高于血紫蛋白组、HBOC-201组(P 一氧化氮水平高于血紫蛋白组、HBOC-201组(P <0.05);在0.25-2.0 mg/mL质量浓度范围内,血紫蛋白纳米粒组血管细胞黏附因子1水平低于血紫蛋白组、HBOC-201组(P <0.05)。(4)结果表明,经过分子内交联和聚多巴胺/聚乙二醇修饰的血紫蛋白纳米粒在体外具有良好的携氧活性,抗吞噬性能更优,细胞毒性更小。

关键词：红细胞代用品血紫蛋白化学修饰细胞实验血红蛋白氧载体

人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin Ⅰ高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用

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癌症 2009年第10期28卷 1061-1066页

作者：罗弋庞华李淑杰曹辉李少林樊春波重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院核医学科重庆400016

背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑... 详细信息

背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和Not Ⅰ双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx Ⅰ的表达水平。结果:scFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗PrxI肺腺癌单链抗体。被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx Ⅰ蛋白表达水平的下降。结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体。单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖。

关键词：肺腺癌噬菌体抗体库单链抗体 Peroxiredoxin I 增殖抑制

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抗CCR7单链抗体的筛选及初步鉴定

中国药理学通报 2010年第3期26卷 337-341页

作者：樊春波李少林彭志平罗弋曹辉王洁重庆医科大学放射医学教研室重庆医科大学附属第一医院核医学科重庆400016

目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选... 详细信息

目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化***2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,经Western blot鉴定,通过ELISA法检测可溶性ScFv抗体的免疫活性。免疫细胞化学和放射免疫显像鉴定scFv抗体与乳腺癌细胞结合的特异性。结果ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在***2151中实现可溶表达。Western blot结果显示获得抗体相对分子质量为34ku左右。免疫细胞化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞MDA-MB-435s特异性结合。结论成功从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达特异抗原结合。

关键词：噬菌体抗体库单链抗体 CCR7 乳腺癌淋巴结转移抗体筛选

多肽bCAT联合卡泊芬净对白色念珠菌菌丝及成熟生物被膜的作用

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第三军医大学学报 2020年第7期42卷 671-677页

作者：刘贤许珊沈一鸣亢胜男刘景仑陈晓迎张丹重庆医科大学附属第一医院急诊医学科重庆400016

目的探讨嗜铬粒蛋白A(chromogranin,CGA)衍生多肽bCAT联合卡泊芬净(caspofungin,CAS)对白色念珠菌菌丝及成熟生物被膜的作用及机制。方法以标准菌株ATCC10231为研究对象,体外建立生物被膜模型,分别用bCAT、CAS、bCAT联合CAS作用于被膜,... 详细信息

目的探讨嗜铬粒蛋白A(chromogranin,CGA)衍生多肽bCAT联合卡泊芬净(caspofungin,CAS)对白色念珠菌菌丝及成熟生物被膜的作用及机制。方法以标准菌株ATCC10231为研究对象,体外建立生物被膜模型,分别用bCAT、CAS、bCAT联合CAS作用于被膜,以RPMI1640干预作为空白对照组(control组)。XTT法检测生物被膜代谢活性的变化,并计算抗成熟生物被膜50%的MIC(MBIC50),RT-PCR检测黏附因子ALS3的mRNA表达,DCFH-DA观察细胞内ROS含量的变化,SYTO9/PI染色观察生物被膜通透性的变化。结果bCAT及CAS抗成熟生物被膜的MBIC50分别为3105、128μg/mL,两者联合使用时抗成熟被膜的MBIC50分别降至776、4μg/mL,RT-PCR检测结果显示bCAT+CAS组处理被膜后ALS3表达量为(1.71±0.65)%,与control、bCAT(776μg/mL)、CAS(4μg/mL)组比较差异具有统计学意义(P<0.05);ROS含量为(428.96±47.67)%,与control、bCAT(776μg/mL)、CAS(4μg/mL)组比较差异具有统计学意义(P<0.05);bCAT+CAS组中死亡菌明显增加,菌丝相真菌明显减少。结论CGA衍生多肽bCAT联合CAS具有协同抗成熟被膜作用,其机制可能与降低黏附因子ALS3的表达而抑制菌丝的形成、增加ROS含量造成氧化损伤相关。

关键词：嗜铬粒蛋白A 白色念珠菌生物被膜卡泊芬净协同

机械通气合并重症肺部感染患者胸部CT定位下床旁无痛纤维支气管镜气道灌洗临床价值

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中华急诊医学杂志 2015年第4期24卷 374-379页

作者：王川江徐昉重庆医科大学附属第一医院急诊医学科和重症医学科重庆400016

目的探讨胸部CT定位下床旁无痛纤维支气管镜（bronchofibroscope,BFS）气道灌洗治疗机械通气合并重症肺部感染中的临床疗效.方法应用无痛纤维支气管镜气道灌洗（bronchoalveolar lavage,BAL）对重症医科大学重症医学科内131例机械通... 详细信息

目的探讨胸部CT定位下床旁无痛纤维支气管镜（bronchofibroscope,BFS）气道灌洗治疗机械通气合并重症肺部感染中的临床疗效.方法应用无痛纤维支气管镜气道灌洗（bronchoalveolar lavage,BAL）对重症医科大学重症医学科内131例机械通气合并重症肺部感染患者随机（随机数字法）分为CT检查组（C组）、X线胸片检查组（X组）和未做放射检查组（N组）,三组患者均行有创呼吸机辅助通气,后行无痛纤维支气管镜气道灌洗治疗.监测患者生命体征,灌洗前和灌洗后1h、2h、4h的呼吸力学指标,同时记录BAL持续时间,监测术后3d、5d感染相关性指标,有效病原菌检出率、有创机械通气时间和机械通气时间.对三组各项监测指标进行统计学对比分析.结果术中及术后10 min,C组和X组的心率（HR）、呼吸频率（Br）低于N组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,收缩压（SBP）、舒张压（DBP）组间差异无统计学意义（P＞0.05）.C组、X组灌洗后1h、2h气道峰压（PIP）、呼吸功（WOBvent）和吸气阻力（RAW）均低于N组,肺动态顺应性（Cdyn）优于N组（P＜0.05）;C组、X组灌洗后4 h Cdyn优于N组（P＜0.05）,PIP、WOBvent和RAW差异无统计学意义（P＞0.05）.C组机械通气时间（MV-t）为（16.81 ±2.62） min,较X组（20.12 ±3.81）min、N组（23.69 ±2.76） min均短（P＜0.05）.BAL治疗后3d,C组、X组中心体温（T）、外周血WBC计数（WBC）和降钙素原（PCT）降低低于N组（P＜0.05）,且C组低于X组（P＜0.05）,BAL治疗后5d,C组、X组WBC和PCT降低低于N组（P＜0.05）,且C组低于X组（P＜0.05）.C组有效病原菌检出率为80.55％（29/36）,较X组（72.09％,31/43）、N组（59.65％,34/57）均高（P＜0.05）.C组MV-t为（114.36±38.39）h,较X组（132.07 ±42.51）h、N组（165.28 ±67.28）h均短（P＜0.05）.结论对机械通气合并重症肺部感染患者使用胸部CT定位下无痛纤维支气管镜气道灌洗治疗能有效降低应激状态,减轻气道高反应性,缩短手术时间,提高肺部感染病灶引流,增加有效病原菌检出率、缩短ICU住院时间及机械通气时间,提高该类患者综合救治水平.

关键词：胸部CT X线纤维支气管镜气道灌洗无痛机械通气肺部感染重症监护室

人源抗PeroxiredoxinⅠ肺腺癌噬菌体抗体的制备及鉴定

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南方医科大学学报 2010年第1期30卷 30-34页

作者：罗弋庞华李淑杰曹辉李少林樊春波王洁重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院核医学科重庆400016

目的构建人源噬菌体抗体库,从中筛选出抗PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)肺腺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗... 详细信息

目的构建人源噬菌体抗体库,从中筛选出抗PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)肺腺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv);将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。PCR检测TG1中ScFv基因插入率;1%琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;以肺腺癌细胞株D549及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白PrxI为靶抗原对抗体库进行筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达。用SDS-PAGE及Westernblotting鉴定该抗体;用ELISA法、免疫细胞化学法鉴定该抗体与人肺腺癌细胞的结合特异性。结果成功构建噬菌体单链抗体库。ScFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为60%。SDS-PAGE及Westernblotting证实抗体得到可溶表达。ELISA及免疫细胞化学检测表明抗体能相对特异地与肺腺癌细胞结合。结论成功构建肺腺癌人源噬菌体抗体库,并从中筛选得到能相对特异地与高表达PrxI的肺腺癌细胞D549结合的单链抗体。

关键词：噬菌体抗体库单链抗体 PeroxiredoxinⅠ 肺腺癌

苦参碱诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的机制研究

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中国药理学通报 2010年第8期26卷 1104-1107页

作者：郭启帅黄曦李少林重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院血液内科重庆400016

目的探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导SKOV3细胞凋亡及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度Mat(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0g·L-1)处理24、48、72h对SKOV3细胞增殖作用;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRN... 详细信息

目的探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导SKOV3细胞凋亡及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度Mat(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0g·L-1)处理24、48、72h对SKOV3细胞增殖作用;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Sur-vivin和Caspase-3蛋白的表达。结果一定浓度范围的Mat对SKOV3细胞的增殖均有抑制作用,且呈量效和时效关系,24、48、72h的IC50分别为3.38、1.57、1.13g·L-1;0.8、1.6g·L-1Mat作用48h后SKOV3细胞凋亡率分别为(11.44±0.56)%、(17.68±0.98)%,与空白对照组(4.85±0.31)%比较差异具有显著性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析表明药物处理后SKOV3细胞的Survivin mRNA和蛋白表达均明显下调,而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。结论 Mat能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Survivin表达和提高Caspase-3活性有关。

关键词：苦参碱卵巢癌细胞增殖细胞凋亡 Survivin Caspase-3

皮质肌动蛋白在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义

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第二军医大学学报 2010年第5期31卷 476-480页

作者：张俊曹辉郭启帅张涛汤为学李少林重庆医科大学放射医学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院肿瘤科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院实验中心重庆400016

目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶... 详细信息

目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞增殖能力,流式细胞仪检测两系细胞周期,Transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用免疫细胞化学法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析法检测cortactin蛋白在两系细胞中的表达。结果利用人工基质膜侵袭实验筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,并且两系细胞形态上无明显差异。MTT实验显示高转移潜能细胞体外生长速度显著快于低转移潜能细胞(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,高转移潜能细胞亚系与低转移潜能细胞亚系相比,G0/G1期细胞前者比后者少[(52.67±3.69)%vs(64.46±2.79)%],而S期细胞前者比后者多[(30.53±6.19)%vs(24.63±2.04)%]。高转移潜能细胞亚系增殖指数(PI)高于低转移细胞亚系[(47.32±3.69)%vs(35.53±2.80)%,P<0.05],侵袭能力显著强于低转移潜能细胞亚系[(61.46±7.08)vs(25.32±4.87)个/视野,P<0.05]。免疫组化、RT-PCR和蛋白质印迹分析均显示在高转移潜能细胞亚系中cortactin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能细胞亚系(P<0.05)。结论 Cortactin的过表达与乳腺癌的增殖和转移过程密切相关。

关键词：乳腺肿瘤皮质肌动蛋白肿瘤转移细胞增殖

HMGB1在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的研究进展

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重庆医科大学学报 2014年第9期39卷 1193-1196页

作者：高峰徐昉重庆医科大学附属第一医院急诊医学科重庆400016

急性肺损伤(acute lung ingury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是ICU内危及患者生命的临床综合征。目前ARDS的病死率仍居高不下(>40%)[1]。其治疗和早期运用生物学标记诊断仍是重症医学领域的重... 详细信息

急性肺损伤(acute lung ingury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是ICU内危及患者生命的临床综合征。目前ARDS的病死率仍居高不下(>40%)[1]。其治疗和早期运用生物学标记诊断仍是重症医学领域的重大难题。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)是一种新近发现的重要的晚期炎性介质,与脓毒症、恶性肿瘤、免疫性疾病等许多疾病相关。HMGB1作为一种警报素,其浓度的高低可以反映机体炎症及组织损伤的严重程度,并与疾病的预后密切相关。HMGB1可能会为阻断炎症通路的级联反应提供新的治疗靶点。本文就HMGB1在ALI/ARDS中的研究进展做一综述。

关键词：高迁移率族蛋白B1 急性呼吸窘迫综合征急性肺损伤细胞因子警报素