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γ-氨基丁酸A型受体β3亚基在2,3,7,8-四氯二苯并二英诱导胎鼠腭裂模型中表达的研究

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中华口腔医学杂志 2019年第5期54卷 328-334页

作者：雷俊秋邱林丁雄辉傅跃先袁心刚刘燕重庆医科大学附属儿童医院烧伤整形外科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室400014

目的利用2,3,7,8-四氯二苯并二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导C57BL/6J胎鼠腭裂,检测γ-氨基丁酸A型受体β3亚基(gamma-aminobutyric acidt ype Areceptor beta 3 subunit,GABRB3)在TCDD诱导胎鼠腭裂模型中的表达变化情况,探讨腭裂的发生机制。方法将60只孕鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,每组30只。妊娠第10.5天(gestation day 10.5,GD10.5)实验组以28μg/kg的TCDD单次灌胃,对照组以5.6ml/kg玉米油单次灌胃。分别在GD13.5、GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5处死孕鼠12只,每组处死6只。行胎鼠腭部形态学和组织学观察;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胎鼠腭部组织中GABRB3mRNA及蛋白表达;免疫组织化学及免疫荧光染色检测GABRB3蛋白的表达部位。结果实验组共36只胎鼠,GD17.5腭裂的发生率为100%(36/36);对照组共47只胎鼠,无腭裂发生(0/47)。实验组胎鼠腭突上抬在GD15.5完成,较对照组腭突上抬延迟1d;GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5实验组中GABRB3基因mRNA(分别为0.561±0.073、0.728±0.104、0.782±0.137、0.686±0.145)和蛋白表达(分别为0.288±0.013、0.404±0.017、0.399±0.012、0.307±0.010)均显著低于对照组GABRB3基因mRNA(分别为0.818±0.088、0.865±0.086、1.021±0.054、1.163±0.179)和蛋白表达(分别为0.481±0.017、0.456±0.009、0.474±0.016、0.529±0.015)(P部发育的上抬和融合期发挥重要作用。

关键词：腭裂四氯二苯并二噁英 γ-氨基丁酸A型受体β3亚基

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新生儿早发型败血症预后不良的预测因素

中国当代儿科杂志 2020年第2期22卷 146-151页

作者：陈洁余加林重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆)/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿科学重庆市重点实验室

目的探讨新生儿早发型败血症(EOS)预后不良的预测因素。方法收集371例EOS新生儿的临床资料,根据预后分为预后良好组(264例)和预后不良组(107例)。比较两组患儿的围生期特点、临床表现、实验室指标、合并症、治疗过程等,采用多因素logis... 详细信息

目的探讨新生儿早发型败血症(EOS)预后不良的预测因素。方法收集371例EOS新生儿的临床资料,根据预后分为预后良好组(264例)和预后不良组(107例)。比较两组患儿的围生期特点、临床表现、实验室指标、合并症、治疗过程等,采用多因素logistic回归模型分析EOS预后不良的预测因素。结果预后不良组患儿的出生体重、胎龄均低于预后良好组(P<0.05);预后不良组的早产、低出生体重、极低出生体重及双胎比例高于预后良好组(P<0.05);预后不良组母亲产前使用激素、产前使用抗生素比例高于预后良好组(P<0.05);预后不良组反应差和呼吸功能低下的发生率高于预后良好组,皮肤黄染发生率低于预后良好组(P<0.05);预后不良组WBC<5×10^9/L、血小板<100×10^9/L、贫血、凝血功能障碍、肾功能损害、肝功能损害、低蛋白血症及低血糖的发生率高于预后良好组(P<0.05);预后不良组新生儿呼吸窘迫综合征、肺出血、坏死性小肠结肠炎、脑出血、脑损伤、肺动脉高压及休克的发生率高于预后良好组(P<0.05);预后不良组住院时间和抗生素疗程长于预后良好组(P<0.05);预后不良组使用机械通气和血管活性药的比例高于预后良好组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,极低出生体重(OR=41.734)、坏死性小肠结肠炎(OR=12.669)、脑损伤(OR=8.372)、休克(OR=5.889)、机械通气(OR=5.456)及肝功能损害(OR=4.075)是新生儿EOS预后不良的独立预测因素(P<0.05)。结论极低出生体重、机械通气及合并坏死性小肠结肠炎、脑损伤、休克或肝功能损害对新生儿EOS预后不良有预测价值。

关键词：早发型败血症预后预测因素新生儿

不同剂量粉尘螨提取液对哮喘小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 403-406页

作者：吴雪郡黄英韩洁王模奎王莹王莉佳重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆400014

目的探讨不同剂量粉尘螨提取液对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)的影响,确定粉尘螨提取液免疫治疗的最佳维持剂量。方法用粉尘螨提取液经腹腔注射C57BL/6小鼠,建立过敏性哮喘模型,将32只哮喘小鼠随机分为4组:... 详细信息

目的探讨不同剂量粉尘螨提取液对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)的影响,确定粉尘螨提取液免疫治疗的最佳维持剂量。方法用粉尘螨提取液经腹腔注射C57BL/6小鼠,建立过敏性哮喘模型,将32只哮喘小鼠随机分为4组:生理盐水组以及粉尘螨低(100μg/只)、中(1 mg/只)和高(2 mg/只)剂量组,治疗完成后,采用流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs的含量,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子IL-10、TGF-β1的水平。结果生理盐水组、粉尘螨低剂量组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均0.05);生理盐水组、粉尘螨低剂量组脾细胞中Foxp3+CD4+CD25+Tregs占CD4+CD25+T细胞的百分比均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均0.05);生理盐水组、粉尘螨低剂量组小鼠血清中IL-10和TGF-β1的水平均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均0.05)。结论中剂量粉尘螨提取液为哮喘特异性免疫治疗的最佳维持剂量。

关键词：粉尘螨提取液哮喘小鼠 CD4+CD25+调节性T细胞

NDUFA13失活在诱导小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及机制

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南方医科大学学报 2021年第1期41卷 55-63页

作者：徐小惠李锐曾欣王欣薛炳乾黄道超黄轶重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所//重庆市儿童感染与免疫重点实验室//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014

目的构建线粒体蛋白(NDUFA13)基因肝特异性敲除小鼠,探讨NDUFA13表达失活在小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及可能机制。方法采用Cre/loxP转基因技术,将NDUFA13 flox基因编辑小鼠NDUFA13fl/fl与Alb-Cre转基因小鼠杂交,得到肝脏特异性NDU... 详细信息

目的构建线粒体蛋白(NDUFA13)基因肝特异性敲除小鼠,探讨NDUFA13表达失活在小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及可能机制。方法采用Cre/loxP转基因技术,将NDUFA13 flox基因编辑小鼠NDUFA13fl/fl与Alb-Cre转基因小鼠杂交,得到肝脏特异性NDUFA13杂合敲除(NDUFA13fl/-;Alb-Cre)小鼠。经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳,对鼠尾与肝脏DNA基因进行分型鉴定。以同窝NDUFA13fl/fl小鼠为对照,将肝脏特异性NDUFA13fl/-小鼠作为研究对象,10只/组,分别在4周龄、2年龄时各处死5只,获取小鼠肝组织样本,通过HE染色分析肝组织病理变化,免疫组化分析NDUFA13、NF-κB/p65、NF-κB/p-p65及炎症小体NLRP3的表达,ROS染色试剂盒分析细胞总ROS及线粒体ROS水平;免疫组化与免疫荧光分析免疫细胞标志物CD45、MPO、F4/80以及炎症因子IL1β、IL33的表达情况。结果PCR鉴定结果显示成功建立肝特异性NDUFA13杂合敲除小鼠;HE染色显示4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织均损伤严重;免疫组化检测显示,4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠NDUFA13蛋白表达显著下调(P<0.05),NF-κB信号分子p65、p-p65(Ser536)及炎症小体NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);ROS测定发现NDUFA13基因杂合敲除导致小鼠肝脏细胞总ROS、线粒体ROS水平均显著增加;免疫组化与免疫荧光结果显示,肝组织CD45、MPO、F4/80等炎症细胞标志物的聚集以及IL1β、IL33等炎症因子的分泌均明显增多(P<0.05)。结论NDUFA13蛋白表达失活可诱导小鼠自发性肝炎病理表型,其机制可能与活化的ROS/NF-κB/NLRP3信号通路相关。

关键词： NDUFA13 基因敲除小鼠模型 NLRP3 自发性肝炎

维生素A联合其他微量营养素干预对铁代谢稳态的影响

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中华儿科杂志 2011年第12期49卷 926-932页

作者：陈科刘永芳陈立张萱刘友学陈洁李廷玉重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地400014 重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科 400014

目的观察维生素A、维生素A＋铁和7＋1多种微量营养素联合补充对学龄前儿童铁代谢稳态的影响.方法研究为随机、互相对照、盲法现场干预试验.采用分层与整群抽样相结合的方法从该地区随机选取3所幼儿园全部226名2～7岁学龄前儿童纳入计... 详细信息

目的观察维生素A、维生素A＋铁和7＋1多种微量营养素联合补充对学龄前儿童铁代谢稳态的影响.方法研究为随机、互相对照、盲法现场干预试验.采用分层与整群抽样相结合的方法从该地区随机选取3所幼儿园全部226名2～7岁学龄前儿童纳入计划干预对象,分别补充100％ RNI的维生素A、维生素A＋铁和“7＋1”维生素A、铁、维生素B1、核黄素、叶酸、尼克酸、锌和钙.干预前后分别采用氰化高铁法测定全血中血红蛋白含量,反相高效液相色谱法（ HPLC）测定血清视黄醇浓度,酶联免疫定量检测法测定血清铁蛋白（serum ferritin,SF）,微粒子增强透射免疫法检测可溶性转铁蛋白受体（soluble transferrin receptor,sTfR）,并计算sTfR-SF指数（TFR-F指数）及机体总铁含量；同时利用问卷方式调查这些儿童的人口学资料、社会经济状况以及饮食习惯等.结果完成干预试验儿童共有226名,平均年龄（均数±标准差）为（4.0±0.85）岁.贫血发生率为23.5％,储铁不足发生率为15.0％,维生素A缺乏以及边缘型维生素A缺乏发生率分别是6.3％和25.9％.干预后6个月各组SF水平均较干预前下降（x2=8.3298,x2=16.1471,x=15.1371,P均＜0.01）,而维生素A＋铁组和“7＋1”多种微量营养素组下降最为明显（x2=16.1471,x2=15.1371,P均＜0.05）.干预后各组sTfR水平均出现降低（x2=15.1171,x2=5.2617,x2=4.8844,P均＜0.01）,尤以维生素A组最明显（x2 =15.1171,P＜0.05）；维生素A组TFR-F指数以及机体总铁含量在干预前后无明显变化（t =0.1817,t=1.7736,P均＞0.05）,而维生素A＋铁组和“7＋1”多种微量营养素组的TFR-F指数明显下降、机体总铁含量明显增加（t=5.3561,t=6.5979,t=11.1663,t =8.7306,P均＜0.05）.结论单独维生素A补充对铁动员和铁利用均有明显影响,但对铁在肠道的吸收作用不明显；维生素A联合铁剂或“7＋1”多种微量营养素的补充比单独维生素A可更好地改善学前儿童铁缺乏.

关键词：维生素A 干预铁代谢稳态总铁含量学龄前儿童

肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化

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南方医科大学学报 2021年第4期41卷 529-535页

作者：徐小惠曾欣李锐冯金梅黄道超黄轶重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地//儿童感染免疫重庆市重点实验室重庆400014

目的探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系(NDUFA13fl/-;Alb-Cre)作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察... 详细信息

目的探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系(NDUFA13fl/-;Alb-Cre)作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察,分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果HE染色、Masson染色发现4周龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型;2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低(P<0.05)。免疫荧光与免疫组化结果显示,NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生(P<0.05),以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌(P<0.05);同时,α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多(P<0.05),基质金属蛋白酶MMP-9表达降低(P<0.05),而其抑制剂TIMP-1表达明显增加(P<0.05)。结论肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型,可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。

关键词： NDUFA13缺陷巨噬细胞炎症因子肝星状细胞肝纤维化

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3113例婴儿非溶血性黄疸病因回顾性分析

中华肝脏病杂志 2015年第6期23卷 454-457页

作者：彭小蓉许红梅重庆医科大学附属儿童医院感染消化科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室 400014

目的探讨近30年婴儿非溶血性黄疸的病因变化及其患儿性别、就诊年龄和胆红素等的变化. 方法收集1982年1月至2011年12月我院感染消化科收治住院的3 113例1个月～1岁非溶血性黄疸患儿病例,按就诊时间分为A组（1982-1991年,n=537）、B组... 详细信息

目的探讨近30年婴儿非溶血性黄疸的病因变化及其患儿性别、就诊年龄和胆红素等的变化. 方法收集1982年1月至2011年12月我院感染消化科收治住院的3 113例1个月～1岁非溶血性黄疸患儿病例,按就诊时间分为A组（1982-1991年,n=537）、B组（1992-2001年,n=786）和C组（2002-2011年,n=1 790）,就性别、年龄、病因、ALT和总胆红素（TBil）水平等方面进行回顾性研究.应用SPSS17.0统计软件,采用x2检验进行比较,P＜ 0.05为差异有统计学意义. 结果 3组患儿中,男性患儿分别为399例（74.3％）、524例（66.7％）和1 121例（62.6％）,比例均高于女性患儿.A组就诊年龄以2～3个月为主（52.0％）,B组和C组就诊年龄以1～2个月龄为主,分别占67.8％和61.0％,A组与B、C组比较,就诊年龄分布差异具有统计学意义（x2=560.766,P＜0.001）.A组有431例患儿（80.3％） TBil以轻度升高为主（17.1 ～ 171 μmol/L）,B组和C组,患儿TBil以中度升高为主（171 ～ 342μmol/L）,分别占53.4％和49.7％,A组与B、C组比较,差异具有统计学意义（x2=517.74,P＜0.001）.A组中,患儿主要病因诊断为巨细胞病毒（CMV）感染170例（31.％）、败血症98例（18.2％）、乙型肝炎7例（1.3％）、胆道畸形7例（1.3％）,有250例（46.6％）患儿诊断不明确;B组中,患儿主要病因诊断为CMV感染283例（36.0％）、败血症169例（21.5％）、母乳性黄疸16例（2.0％）、乙型肝炎15例（1.9％）、胆道畸形7例（0.9％）,有291例（37.9％）患儿诊断不明确;C组中,患儿主要病因诊断为CMV感染763例（42.6％）、母乳性黄疸316例（17.7％）、败血症134例（7.5％）、胆道畸形44例（2.46％）,有521例（29.1％）患儿诊断不明确. 结论感染性因素仍然是婴儿非溶血性黄疸的主要病因,尤其是CMV感染,细菌感染呈明显下降趋势.非感染因素如胆道畸形、遗传代谢性疾病日益受到临床的重视.虽然病因明确诊断比例有所增加,但仍有部分患儿病因诊断未能明确,还需进一步研究.

关键词：黄疸回顾性研究诊断婴儿

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垂盆草苷对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的作用机制

中国药科大学学报 2020年第1期51卷 84-91页

作者：向华夏康权重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014

研究垂盆草苷(sarmentosin,SA)对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的干预和调节作用。将48只SD幼龄大鼠随机分为正常组(Control)、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)组(Model)、熊去氧胆酸(UDCA)阳性对照组、垂盆草苷低、中、高剂量组,每组8只,除正常组外,各... 详细信息

研究垂盆草苷(sarmentosin,SA)对幼龄肝内胆汁淤积大鼠的干预和调节作用。将48只SD幼龄大鼠随机分为正常组(Control)、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)组(Model)、熊去氧胆酸(UDCA)阳性对照组、垂盆草苷低、中、高剂量组,每组8只,除正常组外,各组大鼠连续1周分别灌胃给予相应药物,每日1次。在第5 d灌胃给予80 mg/kg ANIT造模。在造模后48 h测定大鼠的胆汁流量;测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)的含量;检测肝脏组织病理变化和组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western blot法分析胆汁酸转运蛋白与合成蛋白。与正常组相比,模型组胆汁流量受到明显的抑制;大鼠肝组织出现明显的病理损伤;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平显著升高;组织匀浆中MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px含量显著降低;炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达升高(P所改善;血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平降低;肝脏组织匀浆中MDA的含量降低,SOD、GSH-Px的含量升高(P所致的SD幼龄大鼠肝内胆汁淤积有明显的干预和调节作用。可能是通过参与胆汁酸的转运与合成发挥其治疗作用。

关键词：垂盆草苷肝内胆汁淤积转运蛋白合成蛋白

腺病毒7d基因型与7b基因型全基因组比较分析

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病毒学报 2017年第2期33卷 142-148页

作者：任洛付扬喜郑首燕王鹂鹂倪科王莉佳臧娜谢晓虹邓昱刘恩梅重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿科学重庆市重点实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆401122

为了解重庆地区流行的7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切... 详细信息

为了解重庆地区流行的7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切分析和全基因组测序,再利用MEGA6比较分析。本研究在2009年6月~2013年1月间共收集4334份急性下呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物标本,随机选取2411份进行病毒分离培养,共有164份(164/2411,6.8%)鼻咽抽吸物HAdV阳性,其中HAdV-7 87例。限制性酶切分析显示,随机挑选的3株HAdV-7分离株均为HAdV-7d。CQ1198株行全基因组测序并与其他HAdV-7全基因组构建进化树,结果发现16株中国地区的HAdV-7为HAdV-7d基因型,且上述16株HAdV-7与7d2的同源性为99.9%,与7b的同源性为98.2%。相较于ak40株(HAdV-7b),CQ1198共有49处核苷酸替换,其中20处可导致非同义替换;4处核苷酸插入,其中24bp和18bp 2个片段插入分别位于病毒相关RNAⅡ(Virus-associated RNAⅡ,VA RNAⅡ)和L3的pⅥ区域。HAdV-7可有多个基因型致病,且一直处于进化过程中,其主要流行基因型由HAdV-7b变为HAdV-7d。应加强对HAdV分子流行病学监测,明确其进化规律,为HAdV疫苗研发提供分子流行病学依据。

关键词：腺病毒 HAdV-7基因型全基因组进化树