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棉鼠肺表面活性相关蛋白A基因生物信息学分析及其与肺损伤相关性

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第二军医大学学报 2016年第12期37卷 1481-1487页

作者：杨守冯怡赵丽黄轶黄道超重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的分析棉鼠肺表面活性相关蛋白A（SP-A）的基因序列结构和生物信息学特点,观察棉鼠肺损伤模型中SP-A mRNA和蛋白的表达水平,初探SP-A表达规律与肺损伤的相关性。方法将32只棉鼠随机均分为4组：3个实验组棉鼠分别腹腔注射2mg/kg脂多... 详细信息

目的分析棉鼠肺表面活性相关蛋白A（SP-A）的基因序列结构和生物信息学特点,观察棉鼠肺损伤模型中SP-A mRNA和蛋白的表达水平,初探SP-A表达规律与肺损伤的相关性。方法将32只棉鼠随机均分为4组：3个实验组棉鼠分别腹腔注射2mg/kg脂多糖（LPS）处理24、48和96h,对照组腹腔注射等量生理盐水。建模后提取棉鼠肺组织总RNA,经RT-PCR扩增SP-A基因,并对其进行生物信息学分析;组织切片观察LPS作用不同时期肺组织病理学变化;qRT-PCR分析SP-A mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测SP-A蛋白表达。结果棉鼠SP-A基因编码区长744bp,编码248个氨基酸,具有多个半胱氨酸保守位点、α螺旋结构和糖基化位点,与其他物种相比其核苷酸（75.4%-90.1%）和氨基酸（70.6%-87.1%）序列均具有较高的同源性。在LPS诱导肺损伤模型中发现,与对照组相比,实验组棉鼠肺组织病理学改变随LPS刺激时间延长而加重,具有时间依赖性;SP-A mRNA和蛋白的表达水平在LPS处理24h后开始迅速增加,差异有统计学意义（P〈0.001和P〈0.01）,48h时仍持续上升（P〈0.001和P〈0.01）,96h时略有下降,但仍保持在较高水平,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05和P〈0.01）。结论棉鼠SP-A基因具有高度保守性;棉鼠SP-A mRNA和蛋白的表达水平与肺损伤严重程度密切相关,可反应肺损伤的不同时程。

关键词：棉鼠亚科肺表面活性物质相关蛋白质A 肺损伤计算生物学

肾母细胞瘤患儿外周血调节性T细胞和自然杀伤T细胞的表达研究

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中国当代儿科杂志 2016年第12期18卷 1222-1226页

作者：陈京林涛重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科/重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所/儿科学重庆市重点实验室/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014

目的研究肾母细胞瘤患儿外周血CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞(Treg)和CD3^+CD16^+CD56^+自然杀伤T细胞(NKT)的表达变化,初步探讨发生改变的原因及其临床意义。方法选取2015年11月至2016年7月就诊的21例肾母细胞瘤患儿作为病例组,2... 详细信息

目的研究肾母细胞瘤患儿外周血CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞(Treg)和CD3^+CD16^+CD56^+自然杀伤T细胞(NKT)的表达变化,初步探讨发生改变的原因及其临床意义。方法选取2015年11月至2016年7月就诊的21例肾母细胞瘤患儿作为病例组,21例于本院体检的同年龄段健康儿童为健康对照组,采用流式细胞术检测两组儿童外周血中CD4^+CD25^+CD127^(low) T细胞占CD4^+T细胞百分比和CD3^+CD16^+CD56^+T细胞占CD3^+T细胞百分比,分别代表Treg水平和NKT水平。结果病例组肾母细胞瘤患儿外周血Treg水平低于健康对照组(P<0.05);病例组肾母细胞瘤患儿外周血NKT水平高于健康对照组(P<0.05)。结论 Treg和NKT水平变化与肾母细胞瘤的发生与发展有关,Treg和NKT水平可能是反映肾母细胞瘤患儿免疫功能状态的较好指标。

关键词：肾母细胞瘤 CD4+CD25+CD127low调节性T细胞 CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞儿童

肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺表面活性蛋白A和D表达及其与肺炎临床特征的相关性

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中国当代儿科杂志 2016年第5期18卷 386-390页

作者：王鹂鹂郑首燕任洛肖秋艳龙晓茹罗健李渠北邓昱谢晓虹刘恩梅重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所/儿科学重庆市重点实验室/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆401122

目的观察肺表面活性蛋白A、D(SP-A、SP-D)在肺炎患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达,探讨SP-A、SP-D与肺炎患儿临床特征的相关性。方法 35例肺炎患儿纳入研究,对其肺泡灌洗液细胞进行分类计数,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患儿BALF... 详细信息

目的观察肺表面活性蛋白A、D(SP-A、SP-D)在肺炎患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达,探讨SP-A、SP-D与肺炎患儿临床特征的相关性。方法 35例肺炎患儿纳入研究,对其肺泡灌洗液细胞进行分类计数,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患儿BALF中SP-A和SP-D水平。结果患儿BALF中SP-D水平显著高于SP-A水平(P8 mg/L)的患儿BALF中SP-D水平明显低于C反应蛋白正常的患儿(P0.05)。结论肺炎患儿BALF中SP-D的表达显著高于SP-A,与肺炎患儿的临床特征有一定相关性,作为一种保护性因子在调节免疫及炎症反应中发挥着比SP-A更重要的作用。

关键词：肺炎肺表面活性蛋白支气管肺泡灌洗液儿童

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早产儿宫外发育迟缓及相关危险因素分析

临床儿科杂志 2015年第12期33卷 1016-1020页

作者：詹兴星包蕾重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆400014

目的探讨早产儿宫外发育迟缓(EUGR)的发生率及其相关危险因素。方法回顾性分析2014年8–12月住院治疗的184例早产儿的临床资料,以2003 Fenton早产儿宫内生长曲线为标准评价宫内发育迟缓(IUGR)、EUGR。结果 IUGR较非IUGR更易发生EUGR;出... 详细信息

目的探讨早产儿宫外发育迟缓(EUGR)的发生率及其相关危险因素。方法回顾性分析2014年8–12月住院治疗的184例早产儿的临床资料,以2003 Fenton早产儿宫内生长曲线为标准评价宫内发育迟缓(IUGR)、EUGR。结果 IUGR较非IUGR更易发生EUGR;出生体质量、住院时间、肠外营养时间、恢复自身宫内生长水平时胎龄、性别、母亲妊高症在纠正胎龄40周及44周时的EUGR组与非EUGR组间的差异具有统计学意义(P<0.05);logistic多因素回归分析发现,恢复自身宫内生长水平时的胎龄是早产儿在不同时期EUGR发生率的独立危险因素;在纠正胎龄40周时,出生体质量、IUGR分别是EUGR发生的保护因素及独立危险因素。结论早产儿在新生儿期发生EUGR是多因素共同参与的结果,新生儿后期EUGR发生主要与围产期因素、出生体质量、住院期间营养相关。

关键词：早产儿宫外发育迟缓随访危险因素

脱氧核酶抗呼吸道合胞病毒感染不同免疫功能小鼠的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 902-908页

作者：周娟赵晓东蒋利萍杨锡强重庆医科大学附属儿童医院肾脏免疫科儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室 400014

目的研究脱氧核酶（DZ）抗不同免疫功能小鼠呼吸道合胞病毒（RSV）感染的作用.方法 RSV感染BALB/c鼠和裸鼠滴鼻给予DZ,空斑形成试验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR检测病毒mRNA表达、支气管肺泡灌洗液白细胞计数,ELISA检测TNF-o、IL-12、I... 详细信息

目的研究脱氧核酶（DZ）抗不同免疫功能小鼠呼吸道合胞病毒（RSV）感染的作用.方法 RSV感染BALB/c鼠和裸鼠滴鼻给予DZ,空斑形成试验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR检测病毒mRNA表达、支气管肺泡灌洗液白细胞计数,ELISA检测TNF-o、IL-12、IFN-γ和IL-10水平,肺组织病理学分析炎症情况.结果 DZ治疗组BALB/c鼠和裸鼠肺组织病毒滴度比感染对照组下降（P＜0.05）,裸鼠下降更明显（P＜0.01）.0.2 mg、0.4 mg和0.8 mg DZ分别降低感染BALB/c鼠30.51%、47.38%（P＜0.05）、53.97%（P＜0.01）和感染裸鼠36.59%（P＜0.05）、48.72%、59.78%（P＜0.01）病毒mRNA表达.0.4 mg DZ治疗降低感染BALB/c鼠和裸鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数,改善肺组织病理学损伤（P＜0.05）,降低感染裸鼠气道局部TNF-α、IL-12和IFN-γ分泌（P＜0.05）.结论 DZ在不同免疫功能小鼠体内有效抑制RSV复制,减轻气道炎症,对裸鼠的保护作用更突出,是有效的抗RSV制剂.

关键词：呼吸道合胞病毒脱氧核酶免疫基因治疗

Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化

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基础医学与临床 2012年第4期32卷 363-368页

作者：林建萍田杰刘官信鲁荣刘建平智深深朱静重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育与疾病研究教育部重点实验室重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院心脏内科重庆400014

目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法... 详细信息

目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。

关键词： C3H10T1/2细胞 Islet-1 心肌样细胞组蛋白乙酰化

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巨噬细胞过表达miR-125b促进其凋亡

细胞与分子免疫学杂志 2016年第7期32卷 958-962,967页

作者：于光远詹学张祯祯李娅莎重庆医科大学附属儿童医院消化科重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院感染科重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的探讨肺结核患儿外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125b和靶基因Raf1原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAF1)表达;观察miR-125b对巨噬细胞凋亡和细胞活力的调节。方法收集和分离肺结核患儿和健康儿童的PBMC,采用荧光定量PCR检测miR-125b和R... 详细信息

目的探讨肺结核患儿外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125b和靶基因Raf1原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAF1)表达;观察miR-125b对巨噬细胞凋亡和细胞活力的调节。方法收集和分离肺结核患儿和健康儿童的PBMC,采用荧光定量PCR检测miR-125b和RAF1的mRNA表达水平,Western blot法检测RAF1的蛋白水平。THP-1巨噬细胞分别转染miR-125b模拟物(miR-125b mimic)、阴性对照模拟物(NC-mimic)、miR-125b抑制物(miR-125b inhibitor)以及阴性对照抑制物(NC-inhibitor),共培养48 h;利用Western blot法检测THP-1巨噬细胞中RAF1表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活力。结果在结核患儿PBMC的miR-125b表达下调,RAF1的mRNA和蛋白水平都升高。在THP-1巨噬细胞中过表达miR-125b时,RAF1表达下调,促进巨噬细胞凋亡,降低细胞活力;在THP-1巨噬细胞中miR-125b表达被抑制时,RAF1表达升高,抑制巨噬细胞凋亡,提高细胞活力。结论结核患儿PBMC中miR-125b水平降低,上调THP-1巨噬细胞miR-125b水平促进巨噬细胞凋亡并抑制细胞活力。

关键词： miR-125b Raf1原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAF1) THP-1巨噬细胞细胞凋亡

氨溴索对成熟表皮葡萄球菌生物被膜结构的破坏作用和膜内菌的杀灭作用

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中国抗生素杂志 2011年第8期36卷 635-639页

作者：郜向娜余加林吴玉华朱秀菊刘维勤重庆医科大学附属儿童医院新生儿科儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆400014

目的建立表皮葡萄球菌(***)生物被膜(biofilm,BF)体外模型,探讨氨溴索对表皮葡萄球菌成熟BF结构的破坏作用和对膜内菌的杀灭作用。方法平板法培养表皮葡萄球菌RP62A 24h,得到成熟BF,不同浓度氨溴索作用24h后,用扫描电镜(scanning electr... 详细信息

目的建立表皮葡萄球菌(***)生物被膜(biofilm,BF)体外模型,探讨氨溴索对表皮葡萄球菌成熟BF结构的破坏作用和对膜内菌的杀灭作用。方法平板法培养表皮葡萄球菌RP62A 24h,得到成熟BF,不同浓度氨溴索作用24h后,用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察BF的形态结构;激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)结合BF图像结构分析软件(image structure analyer,ISA)对BF结构参数进行分析,利用四唑盐(XTT)减低法检测氨溴索对BF内细菌的杀灭作用。结果氨溴索处理以后,电镜观察可见1.875mg/mL氨溴索处理组BF结构被破坏,仅见少量散在细菌。ISA软件定量分析显示:1.875mg/mL氨溴索处理组和对照组的BF厚度分别为(27.95±5.93)μm和(9.76±1.29)μm,t=7.955,P<0.05;平均扩散距离(average diffusion distance,ADD)分别为2.173±0.219和1.625±0.092,t=5.640,P<0.05;结构熵(textual entropy,TE)分别为7.706±0.610和5.488±0.747,t=5.633,P<0.05;区域孔率(areal porosity,AP)分别为0.772±0.036和0.889±0.063,t=-4.322,P<0.05。XTT减低法显示氨溴索的浓度为1.875、3.7和7.5mg/mL时,A450的值分别为1.288±0.251、0.548±0.170和0.156±0.05,与对照组相比P<0.05,均有统计学意义。结论氨溴索可破坏表皮葡萄球菌BF的形态结构,随着氨溴索浓度的增加,杀灭BF内细菌的能力增加。

关键词：表皮葡萄球菌生物被膜氨溴索 XTT

2009—2019年重庆主城区人呼吸道合胞病毒日发病例数与气象参数相关性研究

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中华医学杂志 2021年第36期101卷 2878-2884页

作者：刘翔宇龙鑫翟惠陈诗懿邓昱谢晓虹臧娜谢军罗征秀罗健李渠北符州任洛刘恩梅重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童感染免疫重庆市重点实验室重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童感染免疫重庆市重点实验室重庆400014

目的探讨重庆主城区人呼吸道合胞病毒(HRSV)日发病例数与气象参数之间的关系。方法本研究以2009年6月至2019年6月于重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心因急性下呼吸道感染住院患儿为研究对象,共3107例。采集患儿入院当天鼻咽抽吸物(NPA)... 详细信息

目的探讨重庆主城区人呼吸道合胞病毒(HRSV)日发病例数与气象参数之间的关系。方法本研究以2009年6月至2019年6月于重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心因急性下呼吸道感染住院患儿为研究对象,共3107例。采集患儿入院当天鼻咽抽吸物(NPA),检测HRSV及常见呼吸道病毒核酸;结合同期重庆主城区气象资料,对HRSV日发病例数及气象参数进行相关性和分布滞后非线性模型分析。结果3107例患儿的HRSV阳性率为34.53%(1073例),年龄M(Q1,Q3)为6(3,13)月龄,男性占64.31%(690例)。HRSV日发病数与最低温度(r=-0.220,P儿童和≥6月龄儿童的最大RR值(95%CI)分别为4.72(1.05~21.23)和11.98(1.70~84.35)。结论在重庆主城区,儿童HRSV日发病例数与气候参数有相关性,其中最低温度对HRSV感染有滞后和累积效应,6~10℃在滞后4~8 d时对HRSV发病的影响较大,累积效应对男童及≥6月儿童HRSV发病影响更明显。

关键词：人呼吸道合胞体病毒儿童气象流行病学分布滞后非线性模型